趙 嫚 袁緒龍 李和樓 劉慶華 張 曼

1.山東第一醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，山東 泰安 271000； 2. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院，北京 100038； 3. 尿液細(xì)胞分子診斷北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100038

尿蛋白是尿液化學(xué)成分檢查中的重要項(xiàng)目之一，對尿蛋白的檢測能夠?qū)δI臟及全身其他系統(tǒng)的疾病進(jìn)行早期排查。正常情況下，由于尿蛋白可被重吸收，因此在健康成人尿中含量很少，為30～130 mg/24 h，當(dāng)含量異常增加時(shí)，能為腎臟、泌尿系統(tǒng)疾及腎臟外疾病的診斷提供較有價(jià)值的信息[1]。目前，臨床上檢查尿蛋白最為常用的方法是尿干化學(xué)法，但是這種檢測方法易受各種因素的影響而出現(xiàn)假性結(jié)果。且目前關(guān)于抗生素對尿干化學(xué)檢測尿蛋白影響的相關(guān)研究較少，因此本研究進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)收集2018年8月—2019年1月來我院就診并進(jìn)行尿液檢查的患者尿液標(biāo)本1242例，年齡12～78歲。其中，男性585例，女性657例。采樣過程嚴(yán)格按照操作規(guī)范完成，務(wù)必做到清潔，男性避免尿液標(biāo)本中混入精液或前列腺液，女性避免混入陰道分泌物。送檢尿液按要求收集并倒進(jìn)試管，貼好標(biāo)簽，送到檢驗(yàn)科，2 h內(nèi)檢測完并報(bào)告。

1.2 檢驗(yàn)方法

尿干化學(xué)試紙法：采用的儀器為尿干化學(xué)分析儀Mejer-700,嚴(yán)格按照尿干化學(xué)分析儀的使用操作說明進(jìn)行規(guī)范操作，儀器做好日常保養(yǎng)及質(zhì)控，結(jié)果分為-，+，2+，3+表示?；腔畻钏岱ǎ?1)取3～5 ml新鮮尿液加入試管。(2)滴加磺基水楊酸溶液3～4滴，形成界面。(3)立即觀察，如有渾濁，提示尿液中含有蛋白質(zhì)，渾濁深淺表示含量的多少 ，結(jié)果分為-，+，2+，3+表示。尿全自動沉渣法：采用的儀器為尿沉渣分析儀Cobio-xs，尿沉渣分析儀按操作SOP操作文件進(jìn)行，做好機(jī)器保養(yǎng)和質(zhì)控。人工顯微鏡鏡檢法：使用顯微鏡為日本奧林巴斯顯微鏡BX-51, 按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》操作。尿液用一次性吸管反復(fù)吹打混勻，然后取一滴尿液滴于玻片上，將玻片置于顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)與評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

(1)干化學(xué)法：蛋白陰性；(2)磺基水楊酸法：陰性，清晰不顯渾濁；(3)尿沉渣分析儀法，管型 0～1/μl，超過此范圍視為陽性；(4)鏡檢法：管型 0～1 /μl，超過此范圍視為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

以SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用χ2檢驗(yàn)比較數(shù)據(jù)，以P≤0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 干化學(xué)法測蛋白、磺基水楊酸法測蛋白、尿沉渣自動分析儀和人工顯微鏡檢尿管型結(jié)果

干化學(xué)法測尿蛋白的陽性率為28.74%，磺基水楊酸法測尿蛋白陽性率為36.07%，尿沉渣儀測管型陽性率為13.12%，顯微鏡檢管型陽性率為7.97%，磺基水楊酸法測尿蛋白陽性率最高，顯微鏡測管型陽性率最低，見表1,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 4種檢測方法檢測尿液結(jié)果[n(%)]

2.2 干化學(xué)法與磺基水楊酸法測尿蛋白檢測結(jié)果的比較

在檢測的1242份隨機(jī)尿標(biāo)本中，干化學(xué)檢測法陽性(1+～3+)、磺基水楊酸檢測法陰性的有12份；干化學(xué)檢測法陰性、磺基水楊酸檢測法陽性(1+～3+)的有103份，見表2，兩種方法的檢測結(jié)果之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 干化學(xué)法與磺基水楊酸法尿蛋白檢測結(jié)果的比較 (n)

2.3 抗生素對尿干化學(xué)蛋白檢測的影響

選取尿干化學(xué)檢測法與磺基水楊酸檢測法均陽性,且使用頭孢抗生素治療的患者65例，分別在頭孢抗生素使用前、使用2 h、使用4 h、使用6 h后用尿干化學(xué)法和磺基水楊酸法檢測尿蛋白。使用頭孢抗生素2～4 h對干化學(xué)尿蛋白檢測會造成假陰性，6 h后影響作用消失。而使用頭孢抗生素2～6 h對磺基水楊酸法檢測尿液蛋白均沒有干擾作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 抗生素對尿干化學(xué)蛋白的干擾 [n(%)]

3 討 論

干化學(xué)法檢測尿蛋白原理:是利用了pH指示劑蛋白質(zhì)誤差法，在pH 3.2的條件下四溴酚藍(lán)產(chǎn)生陰離子，與帶陽離子的蛋白質(zhì)結(jié)合發(fā)生顏色變化，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比[2]?；腔畻钏岱y尿蛋白原理：蛋白質(zhì)等電點(diǎn)原理，易促使蛋白形成不溶性沉淀，磺基水楊酸為微生物堿，在酸性條件下，其陰離子可與帶正電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性蛋白鹽而沉淀[3-4]。本研究發(fā)現(xiàn)磺基水楊酸法測尿蛋白陽性檢出率明顯高于尿干化學(xué)蛋白檢測法，有文獻(xiàn)報(bào)道，尿干化學(xué)法對清蛋白敏感，對球蛋白不敏感，且可漏檢本周氏蛋白，而磺基水楊酸法與清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周氏蛋白等均能發(fā)生反應(yīng)[5]。

管型是蛋白質(zhì)、細(xì)胞及其崩解物在腎小管、集合管內(nèi)凝固而成的圓柱形蛋白聚體[6]，它的檢測對腎臟實(shí)質(zhì)性疾病診斷、治療和預(yù)后觀察均有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)造尿沉渣分析儀檢測管型假陽性率偏高，尿沉渣儀檢測管型是應(yīng)用數(shù)碼照相機(jī)對每份標(biāo)本捕捉一定數(shù)量的數(shù)字化畫面，然后由自動微粒識別軟件進(jìn)行鏡檢圖像分析處理，模仿人工顯微鏡鏡檢方式[7-9]。人工顯微鏡檢法為鏡檢管型的確證方法，操作簡單，但是存在操作繁瑣，效率低下的缺點(diǎn)。造成尿沉渣分析儀檢測管型假陽性率偏高的原因多為上皮細(xì)胞、黏液絲、棉毛、麻纖維等類管型異物、細(xì)菌團(tuán)、非晶形尿酸鹽結(jié)晶、非晶形磷酸鹽結(jié)晶和真菌菌絲等[10]，大量白細(xì)胞或紅細(xì)胞有時(shí)也可導(dǎo)致儀器病理管型檢測結(jié)果假陽性。

臨床上常常使用大劑量抗生素進(jìn)行抗感染治療，頭孢類抗生素是廣泛使用的一種抗生素。頭孢菌素類分子中含有頭孢烯的半合成抗生素，屬于β-內(nèi)酰胺類抗生素[11-12]，對細(xì)菌的選擇作用強(qiáng)，具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)、耐青霉素酶、過敏反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn),是一類高效、低毒的重要抗生素。陳克[13]研究發(fā)現(xiàn):使用頭孢抗生素1～24 h可以使尿蛋白檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性，而劉云芳[14]則報(bào)道:頭孢唑林可使尿蛋白測定結(jié)果陽性程度降低。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，尿干化學(xué)檢測法中，頭孢類抗生素使用2～4 h后，尿蛋白陽性率明顯降低，在4 h后，假陰性率明顯升高，6 h后影響作用消失，但使用頭孢抗生素2～6 h對磺基水楊酸法檢測尿液蛋白均沒有干擾作用。這與劉云芳的研究相似：頭孢類抗生素可使尿蛋白陽性檢測結(jié)果假性降低或呈假陰性。

綜上所述，在進(jìn)行尿蛋白檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)尿干化學(xué)、沉渣分析儀及顯微鏡檢共同判斷，對尿蛋白陽性的標(biāo)本，無論尿沉渣分析儀有無管型提示均應(yīng)鏡檢。而對尿蛋白陰性標(biāo)本，尿沉渣分析儀提示有管型的標(biāo)本也應(yīng)鏡檢，必要時(shí)使用磺基水楊酸法進(jìn)行確證。大劑量使用頭孢類抗生素后短時(shí)間內(nèi)不進(jìn)行尿蛋白的檢測，在消除藥物的干擾作用后進(jìn)行檢測，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信度， 為臨床疾病的診斷提供更好的幫助。