吳 育，顧慶華，蔡亞云，石美琴，張海琦，王訓(xùn)香

(1.南通市中醫(yī)院藥劑科，江蘇 南通 226000； 2.南通市中醫(yī)院脾胃科，江蘇 南通 226000； 3.南通大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南通 226000)

膽胃寧顆粒劑為南通市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，其批準(zhǔn)文號為蘇藥制字Z040021991，該方由院內(nèi)脾胃科名老中醫(yī)經(jīng)長年臨床實(shí)踐優(yōu)化改良形成的經(jīng)驗(yàn)方加減而來，含有炒柴胡、炒黃芩、炒枳殼、川厚樸及法半夏等中藥，具有和胃化濕、疏肝利膽及健脾助運(yùn)等功效。該制劑在臨床上主要用于治療膽汁反流引起的潰瘍。胃潰瘍的發(fā)病機(jī)制較多，是由多種因素綜合影響的結(jié)果，其中胃黏膜屏障的損害是最重要的機(jī)制之一。因?yàn)槟懼械哪懼岷湍扄}能破壞胃黏液屏障，繼而溶解胃黏膜的磷脂，增加胃黏膜的通透性造成H+反滲等作用，故膽汁反流與胃潰瘍有密切關(guān)系。莊瑞斐等[1]探討了膽胃寧顆粒劑治療膽胃不和型膽汁反流性胃炎的臨床療效，結(jié)果顯示，膽胃寧顆粒劑不僅能明顯減輕患者的臨床癥狀，減少膽汁反流，其作用機(jī)制可能與提高血漿胃動素(MTL)水平有關(guān)。樊錦河等[2]探討了膽胃寧顆粒對濕熱中阻型胃潰瘍愈合質(zhì)量的影響，指出膽胃寧顆粒能改善潰瘍愈合質(zhì)量，其原因可能與提高潰瘍邊緣黏膜表皮生長因子(EGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)量有關(guān)。膽汁反流性胃潰瘍是現(xiàn)代臨床常見病之一，中藥在脾胃病治療中占據(jù)不可忽視的地位，中醫(yī)學(xué)“金元四大家”之一的李杲提倡升陽益氣、補(bǔ)脾健胃，后代視為“補(bǔ)土派”。治療膽汁反流、反酸，采用疏肝和胃、理氣健脾，以治少陽病為主，常使用柴胡、黃芩、厚樸、枳殼及半夏等中藥。膽汁反流可導(dǎo)致胃黏膜甚至食道黏膜產(chǎn)生炎癥病變，臨床癥狀主要為胃脘痛、反酸、嘈雜、口苦和嘔吐等，可歸屬于中醫(yī)“胃脘痛”“嘔吐”等范疇[3]。本研究探討了膽胃寧顆粒劑對大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型的影響。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，合格證號：SCXK(蘇)2013-2015，由南通大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 儀器

酶標(biāo)儀(北京普朗醫(yī)療)；pH測定儀(大連貝爾分析儀器)；82-1型離心機(jī)(北京分析儀器廠)；電熱恒溫水溫箱(上海亞榮生化儀器廠)。

1.3 藥品與試劑

膽胃寧顆粒劑(南通市中醫(yī)院，院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號：蘇藥制字Z04001991)；奧美拉唑鎂腸溶片(阿斯利康制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字J20130092)配成4 mg/ml水溶液；胃蛋白酶活性試劑盒由南京建成生物有限公司提供；甲醛、乙醇和冰乙酸均為分析純。

2 方法

2.1 幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠模型的建立

SD大鼠40只，雌雄各半，將其隨機(jī)分為5組，每組8只，分別為模型組(蒸餾水0.1 ml/kg)、陽性組(奧美拉唑水溶液18 mg/kg)[4]和膽胃寧顆粒劑低劑量組(膽胃寧顆粒劑用水溶后給藥7.5 mg/kg)、中劑量組(膽胃寧顆粒劑15 mg/kg)及高劑量組(膽胃寧顆粒劑30 mg/kg)。每日上午固定時(shí)間段灌胃給藥1次，共10 d，第8日給藥后禁食不禁水48 h，第9、10日正常給藥。末次給藥后2 h結(jié)扎幽門(術(shù)中勿傷血管，勿牽扯幽門，勿鉗夾胃壁)。術(shù)后禁食禁水18 h后將大鼠處死，結(jié)扎賁門，摘取胃并收集胃液，計(jì)胃液總體積，在3 000 r/min下離心10 min，離心后的上清液進(jìn)行胃蛋白酶活性及胃酸測定，胃蛋白酶活性通過試劑盒測定，胃酸采用pH測定儀測定。采用1%甲醛溶液10 ml固定胃，30 min后沿胃大彎剖開，測量每只大鼠腺胃部所有潰瘍的長徑和短徑，并計(jì)算潰瘍面積(mm2)和潰瘍抑制率；潰瘍抑制率(%)=(模型組潰瘍面積-治療組潰瘍面積)/模型組潰瘍面積×100%[5]。

2.2 冰醋酸型胃潰瘍大鼠模型的建立

取SD大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，分別為模型組(蒸餾水0.1 ml/kg)、陽性組(奧美拉唑水溶液18 mg/kg)和膽胃寧顆粒劑低劑量組(膽胃寧顆粒劑7.5 mg/kg)、中劑量組(膽胃寧顆粒劑15 mg/kg)及高劑量組(膽胃寧顆粒劑30 mg/kg)。將100%冰醋酸溶液0.01 ml注入大鼠腺胃部前壁漿膜下。造模第2日后開始每日上午固定時(shí)間段灌胃給藥1次，共10 d。末次給藥后2 h將大鼠處死，剖腹結(jié)扎賁門和幽門，采用1%甲醛溶液10 ml固定胃，30 min后沿胃大彎剖開，測量每只大鼠腺胃部所有潰瘍的長徑和短徑，并計(jì)算潰瘍面積(mm2)和潰瘍抑制率。

3 結(jié)果

3.1 五組幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠潰瘍面積及潰瘍抑制率比較

與模型組比較，低、中及高劑量組幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠潰瘍面積明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且隨劑量增加呈明顯的劑量依賴性，其中高劑量組與陽性組的作用相當(dāng)，見表1。

表1 五組幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠潰瘍面積及潰瘍抑制率比較Tab 1 Comparison of area and inhibition rates of ulcer among five groups of rats with pyloric ligation gastric ulcer

注：與模型組比較，*P<0.05；“—”代表無潰瘍發(fā)生

Note: compared with the model group,*P<0.05；“—”means no ulcer occurs

3.2 五組幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠胃液量、胃酸及胃蛋白酶活性比較

與模型組比較，低、中及高劑量組幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠胃酸和胃蛋白酶活性明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中高劑量組與陽性組的作用相當(dāng)，見表2。

表2 五組幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠胃液量、胃酸及胃蛋白酶活性比較Tab 2 Comparison of volume of gastric secretion, activities of gastric acid and pepsin among five groups of rats with pyloric ligation gastric ulcer

注：與模型組比較，*P<0.05

Note: compared with the model group,*P<0.05

3.3 五組醋酸型胃潰瘍大鼠潰瘍面積及抑制率比較

與模型組比較，低、中及高劑量組醋酸型胃潰瘍大鼠潰瘍面積明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中,中劑量組與陽性組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，效果優(yōu)于陽性組，見表3。

表3 五組醋酸型胃潰瘍大鼠潰瘍面積及抑制率比較Tab 3 Comparison of area and inhibition rates of ulcer among five groups of rats with acetic acid gastric ulcer

注：與模型組比較，*P<0.05；“—”代表無潰瘍發(fā)生

Note: compared with the model group,*P<0.05；“—”means no ulcer occurs

4 討論

胃潰瘍的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，當(dāng)前認(rèn)為該病的發(fā)生常與胃黏膜損傷因子及自身防御因子失衡有關(guān)，關(guān)于胃黏膜損傷機(jī)制的研究已取得了很大的進(jìn)展。胃潰瘍主要由感染(幽門螺桿菌)、胃酸與胃蛋白酶的侵襲及胃黏膜防御功能減弱等原因引起。皮質(zhì)類固醇、非甾體抗炎藥以及酗酒、吸煙等均會誘發(fā)胃潰瘍的形成。本研究通過不同動物模型考察院內(nèi)制劑膽胃寧顆粒劑治療胃潰瘍的效果，觀察胃酸、胃蛋白酶活及潰瘍面積等指標(biāo)，直觀反映出膽胃寧顆粒劑的治療效果。膽胃寧顆粒劑高劑量的治療效果與陽性藥相當(dāng)，能顯著減少潰瘍面積，提高潰瘍抑制率，降低胃蛋白酶活性，減少胃內(nèi)酸度，最終促進(jìn)潰瘍的愈合。

幽門結(jié)扎型胃潰瘍是由于刺激幽門竇黏膜的壓力感受器，引起迷走-迷走反射，導(dǎo)致高胃酸分泌，使致潰瘍因素增加而形成[6-7]。本研究采用幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠模型，使其膽汁反流入胃，膽汁可以改變胃黏液的性質(zhì)并破壞黏膜屏障，加劇H+的滲入，刺激肥大細(xì)胞釋放組胺，擴(kuò)張血管使得黏膜血流量和毛細(xì)血管滲透性增加，黏膜發(fā)生水腫、出血和炎癥，甚至發(fā)生急性糜爛。結(jié)果顯示，膽胃寧顆粒劑能顯著降低大鼠胃液胃蛋白酶活性，使大鼠胃內(nèi)游離酸、總酸度減少，最終使?jié)儬顟B(tài)下胃蛋白酶活性不過度激活，對胃黏膜起到保護(hù)作用。膽胃寧顆粒劑對大鼠幽門結(jié)扎所致胃潰瘍有抑制作用，呈量效關(guān)系，這說明其抗?jié)冏饔玫膶?shí)現(xiàn)與其抑制胃酸的分泌和胃蛋白酶的活性有關(guān)。醋酸型胃潰瘍是以醋酸直接損傷胃壁組織，并引起局部血液循環(huán)障礙而形成的慢性潰瘍模型，酷似人胃潰瘍[8-9]。膽胃寧顆粒劑對醋酸型胃潰瘍有顯著的療效，醋酸造成潰瘍面明顯，本研究結(jié)果可較好反映出膽胃寧顆粒劑的抗?jié)冃Ч?。周曉偉等[8]研究結(jié)果顯示，大鼠潰瘍與其p38炎癥信號通路相關(guān)，與腫瘤壞死因子α和白細(xì)胞介素6等炎性因子有關(guān)，故膽胃寧顆粒劑很可能通過調(diào)節(jié)炎性因子而發(fā)揮胃黏膜保護(hù)作用，還可能抑制幽門螺桿菌感染，其確切機(jī)制還有待深入研究。

胃潰瘍屬于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)概念，根據(jù)其臨床特點(diǎn)，可將其歸屬于中醫(yī)學(xué)“胃脘痛”“痞證”和“肝胃氣痛”等范疇?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》最早記載“胃脘痛”癥狀。陳育忠等[10]總結(jié)出脾胃虧虛是發(fā)病的根本因素，痰濕、疲血及寒熱等為標(biāo)，外感邪氣、飲食不節(jié)及情緒不暢為主要病因。臨床較常用補(bǔ)益藥、理氣藥、清熱藥、止血藥及活血化瘀藥等治療胃潰瘍。膽胃寧顆粒劑含柴胡、白芍、白術(shù)、黃芩、郁金、厚樸、枳殼及半夏等中藥，為大柴胡湯加減方[11]。柴胡疏肝利膽，能疏泄、散精，使胃腸積滯得除；白芍養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛，二者常相須為用。郁金為“血分之氣藥”，黃芩苦寒，入膽經(jīng)，兩者相伍善于清泄少陽半表半里之熱，二藥佐柴胡又能清火解郁，疏利肝膽。枳殼理氣寬中；半夏燥濕化痰，降逆止嘔；厚樸下氣除滿；方中體現(xiàn)膽胃同治、健脾通降和清熱化濕之治法，三藥行氣散結(jié)，開達(dá)中焦。白術(shù)健脾燥濕利水，扶土以抑木；佐以甘草補(bǔ)脾益氣，調(diào)和諸藥。如此，有攻有補(bǔ)，祛邪而不傷正，“通降”之法貫穿全方，清濕熱，振脾陽，復(fù)胃氣，肝隨脾升，膽隨胃降，則諸癥自愈，體現(xiàn)了中醫(yī)“腑病以調(diào)氣為先”“六腑以通為補(bǔ)”和“腑以通降為用”的學(xué)術(shù)思想[12]。陽性藥奧美拉唑?yàn)橘|(zhì)子泵抑制劑，特異性地作用于胃壁細(xì)胞質(zhì)子泵(H+-K+-ATP酶)所在部位，抑制H+-K+-ATP酶的活性，使壁細(xì)胞內(nèi)的H+不能轉(zhuǎn)運(yùn)到胃腔中從而阻斷胃酸分泌，使胃酸含量大為減少。但其不良反應(yīng)常見：(1)胃腸道不良反應(yīng)，包括口干、輕度惡心、嘔吐和腹脹等；(2)肝腎功能異常也有發(fā)生，包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和膽紅素升高；(3)代謝/內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂，長期應(yīng)用奧美拉唑可導(dǎo)致維生素B12缺乏；(4)神經(jīng)精神異常[13]。中醫(yī)藥以整體觀念、辨證論治為主導(dǎo)，能有效調(diào)節(jié)相關(guān)攻擊因子與防御因子之間的失衡，調(diào)整紊亂的消化功能，在預(yù)防潰瘍復(fù)發(fā)、提高療效等方面有著廣闊的前景[14]。