鄭雄　趙立朝　吳志強(qiáng)　張潔　黃亮亮　汪開成　張曼

摘要：【目的】明確廣西右江流域野生羅非魚的種群類別及其雜合情況，為廣西右江流域羅非魚的入侵防控及本土珍稀物種保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā繌膹V西右江流域隆安、平果、田東、田陽和百色5個(gè)采樣點(diǎn)采集野生羅非魚樣本共136尾，提取各采樣點(diǎn)羅非魚樣本DNA，設(shè)計(jì)特異性引物對(duì)線粒體COⅠ基因及核基因（enc1、ptr和sh3px3）進(jìn)行群體擴(kuò)增，通過DNASTAR 7.1的Megalign程序?qū)λ袠颖镜腃OⅠ基因序列進(jìn)行同源性比對(duì)分析，以確定羅非魚樣本的母本;采用MEGA 6.0對(duì)enc1、ptr和sh3px3基因進(jìn)行序列比對(duì)和校正，并構(gòu)建各采樣點(diǎn)羅非魚樣本的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹?！窘Y(jié)果】廣西右江流域5個(gè)采樣點(diǎn)的羅非魚母本種類共有4種，分別為尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）、齊氏羅非魚（Coptodon zillii）、莫桑比克羅非魚（O. mossambicus）和奧利亞羅非魚（O. aureus）。在26尾隆安羅非魚樣本中無雜合個(gè)體;在36尾平果羅非魚樣本中有3個(gè)雜合個(gè)體，雜合率為8.3%;在20尾田東羅非魚樣本中有2個(gè)雜合個(gè)體，雜合率為10.0%;在30尾田陽羅非魚樣本中有2個(gè)雜合個(gè)體，雜合率為6.7%;在24尾百色羅非魚樣本中有4個(gè)雜合個(gè)體，雜合率為16.7%?！窘Y(jié)論】廣西右江流域野生羅非魚的種間雜交率并不高，但其雜交優(yōu)勢(shì)更有利于羅非魚種群的擴(kuò)散，進(jìn)一步侵占土著魚種的生存空間，嚴(yán)重威脅廣西右江流域魚類資源的多樣性，有關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)管力度以防止野生羅非魚種群迅速擴(kuò)散。

關(guān)鍵詞： 羅非魚;DNA條形碼;雜合性;廣西右江流域

中圖分類號(hào)： S965.125? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2019）12-2797-09

Wild tilapia population and its hybridization in

Youjiang River， Guangxi

ZHENG Xiong1， ZHAO Li-chao2， WU Zhi-qiang1，3*， ZHANG Jie4，

HUANG Liang-liang1，5， WANG Kai-cheng2， ZHANG Man2

（1College of Environmental Science and Engineering， Guilin University of Technology， Guilin， Guangxi? 541006， China; 2College of Animal Science and Technology， Guangxi University，Nanning? 530004， China; 3Collaborative Innovation Center for Water Pollution Control and Water Safety in Karst Area， Guilin University of Technology， Guilin， Guangxi? 541004， China; 4Institute of Zoology， Chinese Academy of Sciences， Beijing? 100101， China; 5Guangxi Key Laboratory of Environmental Pollution Control Theory and Technology， Guilin， Guangxi? 541004， China）

Abstract：【Objective】Researching species and heterozygosity among the population of wild tilapias in Youjiang Ri-ver basin of Guangxi? to provide scientific base for prevention of tilapia invasion and conservation of indigenous species.【Method】A total of 136 tilapia individuals from Long’an， Pingguo， Tiandong， Tianyang and Baise in Youjiang River basin were studied. The DNA extraction， PCR amplification and gene sequencing based on COⅠ from mitochondria，and enc1，ptr， sh3px3 from ribosome with specific primers for each individual were performed. Through the megalign program of DNASTAR 7.1， the homologies of COⅠ gene sequences of all samples were compared and analyzed to determine the female parents of tilapia samples. The sequences of enc1，ptr，sh3px3 gene were compared and corrected by MEGA 6.0， and the phylogenetic trees of all samples were constructed. 【Result】The results showed that there were four female parents species in the five sampling sites， they were Oreochromis niloticus， Coptodon zillii， O. mossambicus and O. aureus. The hybrid rates of samples in Longan（26 individuals， 0 hybrid individual）， Pingguo（36 individuals， 3 hybrid individuals）， Tiandong（20 individuals， 2 hybrid individuals）， Tianyang（30 individuals， 2 hybrid individuals） and Baise（24 individuals， 4 hybrid individuals） were respectively 0， 8.3%， 10.0%， 6.7% and 16.7%. 【Conclusion】Although the interspecific hybridization rate is not too high， the situation will be more conducive to the spread of wild tilapia population and further encroachment on the living space of indigenous species，and severely threaten diversity of local fishery resources in Youjiang River basin due to heterosis. The government department concerned ought to enhance supervision，and prevent further proliferation of population of wild tilapia.

Key words： tilapia; DNA barcode; hybridization; Youjiang River of Guangxi

0 引言

【研究意義】羅非魚是我國主要淡水養(yǎng)殖水產(chǎn)品之一，也是廣西的主要養(yǎng)殖魚類（Bergstrom and Mensinger，2009;張紅燕等，2015）。羅非魚對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力極強(qiáng)，具有發(fā)病少、耐低氧、食性雜、繁殖快及生長快的特性，其肉質(zhì)鮮美、無骨間刺、富含營養(yǎng)，在促進(jìn)漁民收入增長及漁業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展方面發(fā)揮著重要作用（劉孝華，2007）。廣西屬于典型的熱帶季風(fēng)和亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)域，非常適宜羅非魚生長繁殖（Chen et al.，2012）;但羅非魚也是廣西江河流域的主要入侵魚類之一（汪開成等，2018）。羅非魚從養(yǎng)殖環(huán)境逃逸并成功入侵到自然水體后具有較強(qiáng)的表型適應(yīng)性和種間競爭力（Arba?iauskas et al.，2013;管嘉俊等，2017），會(huì)對(duì)當(dāng)?shù)厣锒鄻有耘c生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重威脅（趙立朝等，2019）。因此，明確廣西野生羅非魚的主要品種及入侵種群，研究其雜合情況，可為廣西內(nèi)陸水域生態(tài)安全保護(hù)及羅非魚入侵預(yù)警和防治提供理論依據(jù)。【前人研究進(jìn)展】DNA條形碼是利用基因組中通用短序列片段對(duì)物種進(jìn)行鑒別的技術(shù)，具有自動(dòng)化高、操作簡易及鑒定準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)（Hebert et al.，2003;Kress et al.，2005;Hollingsworth et al.，2011;Zhang and Hanner，2011）。其中，線粒體細(xì)胞色素C氧化酶Ⅰ基因（COⅠ）因具有應(yīng)用廣泛、數(shù)據(jù)庫信息完整等優(yōu)點(diǎn)，是目前魚類DNA條形碼研究中最常用的基因之一（武宇鵬等，2011;單云晶等，2013）。但由于線粒體DNA源自于母本，且羅非魚種間雜交頻繁（郭奕惠等，2009），若只鑒別線粒體DNA則無法確定其父本，而需對(duì)其細(xì)胞核基因進(jìn)行二次鑒定，才能確認(rèn)種群類別（高連明，2015）。李建林等（2011）篩選出7個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)（GM066、UNH995、UNH948、GM017、UNH162、GM440和GM166）作為羅非魚鑒定的分子標(biāo)記，且每個(gè)位點(diǎn)均能將尼羅羅非魚、奧利亞羅非魚和雜交羅非魚區(qū)分開來。Falade等（2016）對(duì)尼日利亞西南部淡水鯰魚和兩種羅非魚的16S rRNA和COⅠ基因進(jìn)行比較分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)基于COⅠ基因能精確地區(qū)分尖齒胡鯰、薩羅羅非魚和齊氏羅非魚。Ordo?ez等（2017）對(duì)菲律賓養(yǎng)殖場內(nèi)Oreochromis屬10個(gè)品系羅非魚、3個(gè)不同地點(diǎn)的紅羅非魚和2種純系羅非魚進(jìn)行COⅠ基因比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖羅非魚母本可被明確區(qū)分為4種，但COⅠ基因無法區(qū)分同種不同品系的羅非魚。Zhu等（2017）利用14個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)3個(gè)不同地區(qū)180份紅羅非魚樣本進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)臺(tái)灣紅羅非魚與以色列紅羅非魚和馬來西亞紅羅非魚均存在明顯遺傳差異。管嘉俊等（2018）對(duì)廣西6個(gè)不同地點(diǎn)的尼羅羅非魚D-loop序列進(jìn)行比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)欽州尼羅羅非魚種群個(gè)體間的遺傳距離比玉林、南寧、貴港、防城港和北海群體的要遠(yuǎn)，因而具有更明顯的遺傳分化現(xiàn)象?？傮w而言，目前國內(nèi)外已有大量針對(duì)羅非魚種群遺傳多樣性的相關(guān)研究，但主要是對(duì)線粒體內(nèi)1～2個(gè)基因位點(diǎn)進(jìn)行研究，或利用微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)羅非魚進(jìn)行種群鑒定，而鮮見基于DNA條形碼對(duì)羅非魚細(xì)胞核基因的探索，或結(jié)合線粒體基因與細(xì)胞核基因進(jìn)行研究。【本研究切入點(diǎn)】至今，有關(guān)廣西羅非魚的相關(guān)研究已有較多報(bào)道（強(qiáng)竣等，2012;Giery et al.，2015;沈夏霜等，2018），但尚無基于分子生物學(xué)對(duì)廣西右江流域野生羅非魚入侵種群進(jìn)行研究的報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】基于DNA分子鑒定對(duì)廣西隆安、平果、田東、田陽及百色5個(gè)采樣點(diǎn)的野生羅非魚樣本進(jìn)行比對(duì)分析，通過設(shè)計(jì)引物對(duì)群體線粒體COⅠ基因及細(xì)胞核enc1、ptr和sh3px3基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測序（Li et al.，2007），旨在明確廣西右江流域野生羅非魚的種群類別及其雜合情況，為廣西右江流域羅非魚的入侵防控及本土珍稀物種保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

2017年7月，在廣西隆安、平果、田東、田陽和百色5個(gè)采樣點(diǎn)進(jìn)行羅非魚樣本采集，采集方式為垂釣和網(wǎng)撈，采集樣本數(shù)量分別為26、36、20、30和24尾。采集后現(xiàn)場解剖并剪取魚類肌肉組織，分別裝入2.0 mL的離心管中，按照采樣點(diǎn)粗略分類。羅非魚肌肉組織10000 r/min離心3 min，采用移液槍吸取水分后，以無水乙醇浸泡換洗2次，每次換洗后倒掉溶液并置于通風(fēng)櫥風(fēng)干（劉軍等，2016），最后將肌肉組織浸泡在無水乙醇中，對(duì)每份組織樣本進(jìn)行無序隨機(jī)標(biāo)號(hào)，號(hào)碼前面標(biāo)記采樣點(diǎn)名字的兩個(gè)拼音首字母，如隆安寫作LA。

1. 2 DNA提取

取出浸泡在無水乙醇中的羅非魚肌肉組織，剪取小塊肌肉并以雙蒸水沖洗2次以上，將其剪碎后放入2.0 mL的離心管內(nèi)，10000 r/min離心5 min，棄上清液（王娜泠等，2017）。使用DP324海洋動(dòng)物基因組提取試劑盒[天根生化科技（北京）有限公司]進(jìn)行DNA提取，以2.0%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測，然后在凝膠成像系統(tǒng)上觀察拍照（Rognon and Guyomard，1997;Ward et al.，2008），保留條帶明亮或稍暗的樣本進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)，未擴(kuò)增出條帶的樣本則進(jìn)行DNA提取重復(fù)試驗(yàn)。

1. 3 PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測

以引物COⅠ-F和COⅠ-R對(duì)線粒體COⅠ基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增（郭新紅等，2004），同時(shí)采用enc1_F85和enc1_R982、ptr_F458和ptr_R1248、sh3px3_F461和sh3px3_R1303分別對(duì)細(xì)胞核基因enc1、ptr和sh3px3進(jìn)行PCR擴(kuò)增（李晶等，2013）。所有引物均由北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司合成，引物信息及其反應(yīng)體系分別見表1和表2。

1. 4 統(tǒng)計(jì)分析

對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測，在凝膠成像系統(tǒng)上觀察拍照，將擴(kuò)增效果良好的條帶送至北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司測序。通過DNASTAR 7.1的Megalign程序，將所有樣本的COⅠ基因序列與GenBank中不同種羅非魚相應(yīng)位置序列進(jìn)行同源性比對(duì)分析，以確定羅非魚樣本的母本。enc1、ptr和sh3px3基因測序結(jié)果均采用MEGA 6.0進(jìn)行序列比對(duì)和校正（Tamura et al.，2013），并通過鄰位相連法（Neighbor-joining，NJ）構(gòu)建各采樣點(diǎn)樣本的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（李晶等，2013;Tamura et al.，2013），Bootstrap重復(fù)次數(shù)設(shè)為1000。

2 結(jié)果與分析

2. 1 PCR擴(kuò)增結(jié)果

PCR擴(kuò)增效果良好。以百色羅非魚樣本的ptr和sh3px3基因?yàn)槔?.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果（圖1）顯示，擴(kuò)增獲得的條帶大小約700 bp，清晰明亮，且無特異性擴(kuò)增條帶，也沒有引物二聚體產(chǎn)生，可用于后續(xù)研究。

2. 2 COⅠ基因序列分析結(jié)果

以百色羅非魚樣本為例進(jìn)行同源性比對(duì)分析，圖2最右側(cè)縱列KU565867.1、HM882909.1、EU751879.1和KJ553787.1分別對(duì)應(yīng)NCBI中尼羅羅非魚、齊氏羅非魚、莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚的COⅠ基因編號(hào)及其序列;從第5行起為百色羅非魚樣本的COⅠ序列編號(hào)，編號(hào)最前面的兩個(gè)字母為地名縮寫，數(shù)字為樣本序號(hào)，如BS-C1_CF即為百色羅非魚1號(hào)樣本。同源性比對(duì)分析結(jié)果顯示，尼羅羅非魚、齊氏羅非魚、莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚的COⅠ基因序列分別與本研究中5個(gè)采樣點(diǎn)羅非魚樣本的相應(yīng)序列匹配度很高，同源性均在98.0%以上;尼羅羅非魚、莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚COⅠ基因的同源性也較高（92.0%～96.0%），與其同為Oreochromis屬的實(shí)際情況相符，說明同屬異種羅非魚具有極高的基因相似度;齊氏羅非魚與其他3種羅非魚的同源性相對(duì)較低（85.0%～89.0%），與齊氏羅非魚和其他3種羅非魚不同屬的情況也相符。

羅非魚樣本的母本種類可確定為4種：尼羅羅非魚、齊氏羅非魚、莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚?；诹_非魚COⅠ基因序列鑒定結(jié)果（表3）可知，所有羅非魚樣本中母本為尼羅羅非魚的數(shù)量最多，齊氏羅非魚次之，莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚數(shù)量相對(duì)較少;各采樣點(diǎn)的羅非魚樣本中，母本為尼羅羅非魚的比例最高;除田東之外，其他采樣點(diǎn)羅非魚樣本的母本均以齊氏羅非魚的比例次之，而莫桑比克和奧利亞羅非魚的比例相對(duì)較低，其中，百色和隆安兩個(gè)采樣點(diǎn)未檢出以奧利亞羅非魚作為母本的樣本，而在田東采樣點(diǎn)未檢出以齊氏羅非魚和莫桑比克羅非魚作為母本的樣本。

2. 3 核基因的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析結(jié)果

基于enc1、ptr和sh3px3基因分別構(gòu)建獲得3種系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，每個(gè)分支后的字母為地點(diǎn)名縮寫，中間數(shù)字為羅非魚樣本序號(hào)，后面字母為其COⅠ基因?qū)δ副镜蔫b定結(jié)果。以N代替尼羅羅非魚、Z代替齊氏羅非魚、M代替莫桑比克羅非魚、A代替奧利亞羅非魚，特殊序號(hào)0 N和0 Z分別代表從NCBI中檢索到的純系尼羅羅非魚和齊氏羅非魚各核基因序列（表4）。

3種核基因的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（圖3～圖5）顯示，每種系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹中所有樣本均聚類成兩大分支，分別代表兩個(gè)不同的屬，即齊氏羅非魚的Coptodon屬和其他3種羅非魚的Oreochromis屬。齊氏羅非魚個(gè)體間的遺傳距離較小，系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分支整齊，且節(jié)點(diǎn)支持率高，大多都在60.0%以上;奧利亞羅非魚和尼羅羅非魚同屬不同種羅非魚分為兩支，其遺傳距離較大;而莫桑比克羅非魚幾乎完全和尼羅羅非魚聚為一支，其遺傳距離非常小，難以進(jìn)行區(qū)分辨別。

基于enc1基因的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（圖3）顯示，田陽45號(hào)（TY45A）、平果2號(hào)（PG2A）和15號(hào)（PG15A）、田東3號(hào)（TD3A）和19號(hào)（TD19A）樣本的母本為奧利亞羅非魚，但未與奧利亞羅非魚聚成一支，反而處于尼羅羅非魚分支內(nèi)，可認(rèn)定其為雜合個(gè)體;百色7號(hào)（BS7Z）和19號(hào)（BS19Z）樣本的母本為齊氏羅非魚，但處于不同屬的尼羅羅非魚分支內(nèi)，也認(rèn)定其為雜合個(gè)體。基于ptr基因的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（圖4）顯示，田陽40號(hào)（TY40Z）樣本的母本為齊氏羅非魚，卻分類在不同屬的奧利亞羅非魚分支內(nèi)，可認(rèn)定其為雜合個(gè)體?；趕h3px3基因的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（圖5）顯示，平果1號(hào)（PG1Z）、百色20號(hào)（BS20Z）和21號(hào)（BS21Z）樣本的母本為齊氏羅非魚，雖然其在齊氏羅非魚屬分支內(nèi)，但與其他大多數(shù)齊氏羅非魚并不在同種的分支內(nèi)，且距離稍遠(yuǎn)，節(jié)點(diǎn)支持低，故認(rèn)為其與純合齊氏羅非魚具有一定的遺傳距離，即為雜合個(gè)體。

綜上所述，在26尾隆安羅非魚樣本中無雜合個(gè)體;在36尾平果羅非魚樣本中有3個(gè)雜合個(gè)體，雜合個(gè)體數(shù)占該采樣點(diǎn)羅非魚樣本總數(shù)的8.3%;在20尾田東羅非魚樣本中有2個(gè)雜合個(gè)體，雜合個(gè)體數(shù)占該采樣點(diǎn)羅非魚樣本總數(shù)的10.0%;在30尾田陽羅非魚樣本中有2個(gè)雜合個(gè)體，雜合個(gè)體數(shù)占該采樣點(diǎn)羅非魚樣本總數(shù)的6.7%;在24尾百色羅非魚樣本中有4個(gè)雜合個(gè)體，雜合個(gè)體數(shù)占該采樣點(diǎn)羅非魚樣本總數(shù)的16.7%。

3 討論

本研究的COⅠ基因同源性比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析結(jié)果顯示，26尾隆安羅非魚樣本的母本種類有尼羅羅非魚、齊氏羅非魚和莫桑比克羅非魚，雜合率為0;36尾平果羅非魚樣本的母本種類有尼羅羅非魚、齊氏羅非魚、莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚，雜合率為8.3%;20尾田東羅非魚樣本的母本種類有尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚，雜合率為10.0%;30尾田陽羅非魚樣本的母本種類有尼羅羅非魚、齊氏羅非魚、莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚，雜合率為6.7%;24尾百色羅非魚樣本的母本種類有尼羅羅非魚、齊氏羅非魚和莫桑比克羅非魚，雜合率為16.7%。除了隆安羅非魚沒有種間雜交情況外，廣西右江其他河段羅非魚均存在種間雜交情況。說明在廣西右江流域，野生羅非魚的確存在著雜合情況，但雜合現(xiàn)象不明顯，且雜合率并不高。

本研究發(fā)現(xiàn)近乎一半的雜合個(gè)體，其母本是奧利亞羅非魚，另一半則為齊氏羅非魚。以奧利亞羅非魚和尼羅羅非魚可雜交出尼奧羅非魚（奧利亞♀+尼羅♂），且奧利亞羅非魚（♀）與尼羅羅非魚（♂）的雜交后代表現(xiàn)出高雄性率和雜交雙重優(yōu)勢(shì)（萬松良等，2018）。由系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析結(jié)果可知，所有母本為奧利亞羅非魚的雜合個(gè)體均處于尼羅羅非魚分支內(nèi)，COⅠ基因在線粒體內(nèi)繼承自母本，核基因則繼承自父本和母本，因此可確定是奧利亞羅非魚（♀）與尼羅羅非魚（♂）雜交。雜交產(chǎn)生的子代具有雜交優(yōu)勢(shì)，盡管雜合情況并不嚴(yán)重，但仍會(huì)對(duì)當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境和生物多樣性造成威脅。李莉好等（2008）研究表明，尼羅♀+奧利亞♂雜交產(chǎn)生的子代較奧利亞♀+尼羅♂雜交產(chǎn)生的子代具有更強(qiáng)的遺傳多樣性和多態(tài)性，因而擁有更強(qiáng)的雜交優(yōu)勢(shì)。本研究中并未發(fā)現(xiàn)以尼羅羅非魚為母本的雜合個(gè)體，只出現(xiàn)奧利亞♀+尼羅♂的雜交方式，可能是不同羅非魚種群的性別比例不同所致。此外，系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析結(jié)果顯示齊氏羅非魚與其他羅非魚雖不在同一屬內(nèi)，但其雜交數(shù)仍占羅非魚樣本雜交總數(shù)的一半，說明羅非魚可進(jìn)行屬間雜交，且較頻繁，也表明齊氏羅非魚具有很強(qiáng)的雜交能力。王金龍等（2007）也曾研究證實(shí)，奧利亞羅非魚同樣擁有強(qiáng)大的雜交能力，其作為母本可與作為父本的鱖（Siniperca chuatsi）進(jìn)行科間雜交，并產(chǎn)生可育后代。

在羅非魚種群雜合率表現(xiàn)最低的隆安羅非魚樣本中，發(fā)現(xiàn)其母本僅有尼羅羅非魚、齊氏羅非魚和莫桑比克羅非魚，而未檢出奧利亞羅非魚，進(jìn)一步說明奧利亞羅非魚雜交占據(jù)野生羅非魚雜交的比例很高。在羅非魚種群雜合率最高的百色羅非魚樣本中，同樣未檢出以奧利亞羅非魚作為母本的雜合個(gè)體，也說明齊氏羅非魚雜交占據(jù)野生羅非魚雜交的比例很高。在平果羅非魚樣本中同時(shí)發(fā)現(xiàn)有4種羅非魚作為母本，理論上應(yīng)具有較高的雜合率，但其雜合率僅8.3%;在田陽羅非魚樣本中，其羅非魚種類構(gòu)成與平果羅非魚樣本相似，雜合率同樣不高，僅6.7%。究其原因可能與各羅非魚種群的數(shù)量、種群性比構(gòu)成及外部溫度等因素不同有關(guān)。田東羅非魚樣本的母本種類只有尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚，其雜合率卻達(dá)10.0%，表明尼羅羅非魚與奧利亞羅非魚在自然條件下可發(fā)生雜交，且具有較高的雜合率。

在廣西右江流域完成入侵的羅非魚主要以尼羅羅非魚和齊氏羅非魚為主，同時(shí)存在一些其他種類的羅非魚，如莫桑比克羅非魚和奧利亞羅非魚等。豐富的入侵種類為羅非魚種間幾乎不存在的生殖隔離提供了良好雜交基礎(chǔ)，同時(shí)由于外界環(huán)境壓力的作用，致使廣西右江上游羅非魚雜合情況極其普遍。在本研究的5個(gè)采樣點(diǎn)中，羅非魚雜合率最高的百色采樣點(diǎn)處于廣西右江最上游，漁業(yè)資源豐富，水流較緩，有利于魚類繁殖;而沒有種間雜交的隆安采樣點(diǎn)處于廣西右江最下游，地勢(shì)低，水流較湍急，不利于魚類產(chǎn)卵繁殖，說明環(huán)境因素可能是影響羅非魚種間雜合的重要因素之一。這與高天揚(yáng)等（2018）對(duì)北江魚類群落進(jìn)行調(diào)查的結(jié)果相似，上游魚類多樣性多于下游，即上游魚類擁有更多的捕食與繁衍機(jī)會(huì)。

羅非魚具有適應(yīng)性強(qiáng)、發(fā)病少、耐低氧、食性雜、繁殖快及生長快的特性，是聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織（FAO）向全世界大力推廣的優(yōu)良養(yǎng)殖品種（譚細(xì)暢等，2012），但這些特性也促使羅非魚成為世界性生物入侵魚類（Peterson et al.，2006）。羅非魚種間雜交表現(xiàn)出一定的雜交優(yōu)勢(shì)，如奧利亞羅非魚（♀）與尼羅羅非魚（♂）的雜交后代表現(xiàn)出高雄性率和雜交雙重優(yōu)勢(shì)（萬松良等，2018），莫桑比克羅非魚與紅羅非魚或尼羅羅非魚的雜交后代均具有更強(qiáng)的耐高鹽性（Urmaza and Aguilar，2005）。這種雜交優(yōu)勢(shì)進(jìn)一步提升了羅非魚對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力，使其能更快地適應(yīng)新的生境，提高存活率。雜合羅非魚對(duì)環(huán)境適應(yīng)能力的增強(qiáng)加快了羅非魚對(duì)本土魚類生態(tài)位的侵占，而導(dǎo)致本土魚類資源多樣性受到嚴(yán)重威脅（周輝明等，2011）。廣西右江流域野生羅非魚的雜合率雖然不高，但仍然建議有關(guān)管理部門加強(qiáng)對(duì)野生羅非魚的監(jiān)管力度，采取有針對(duì)性的措施降低羅非魚種群的分布和擴(kuò)散，建立完善的本土魚類保護(hù)機(jī)制，以保護(hù)廣西右江流域魚類資源多樣性和生物完整性。

4 結(jié)論

廣西右江流域野生羅非魚的種間雜合率并不高，但其雜交優(yōu)勢(shì)更有利于羅非魚種群的擴(kuò)散，進(jìn)一步侵占土著魚種的生存空間，嚴(yán)重威脅廣西右江流域魚類資源的多樣性，有關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)管力度以防止野生羅非魚種群迅速擴(kuò)散。

參考文獻(xiàn)：

高連明. 2015. DNA條形碼在生物多樣性編目與評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[J]. 生物多樣性，23（3）：286-287. [Gao L M. 2015. Applications of DNA barcoding in biodiversity inventory and assessment[J]. Biodiversity Science，23（3）：286-287.]

高天揚(yáng)，謝迪，彭寧東，張少平，李朝，羅錦楨，王春暉，趙俊. 2018. 北江魚類群落結(jié)構(gòu)多樣性及其演替趨勢(shì)[J]. 水生態(tài)學(xué)雜志，39（4）：54-62. [Gao T Y，Xie D，Peng N D，Zhang S P，Li C，Luo J Z，Wang C H，Zhao J. 2018. Fish community structure diversity and succession in the Bei-jiang River[J]. Journal of Hydroecology，39（4）：54-62.]

管嘉俊，韓卓君，鄭慧芳，李文紅，郭忠寶. 2018. 廣西主要養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)逃逸尼羅羅非魚線粒體D-loop控制區(qū)序列分析[J]. 激光生物學(xué)報(bào)，27（5）：451-459. [Guan J J，Han Z J，Zheng H F，Li W H，Guo Z B. 2018. The analysis of the mitochondrial D-loop control region sequences from escape Oreochromis niloticus in the main aquaculture area of Guangxi[J]. Acta Laser Biology Sinica，27（5）：451-459.]

管嘉俊，鄭惠芳，喬慶，周毅，郭忠寶，陳日釗，李文紅. 2017. 廣西主要養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)逃逸尼羅羅非魚形態(tài)差異分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，48（11）：2071-2077. [Guan J J，Zheng H F，Qiao Q，Zhou Y，Guo Z Z，Chen R Z，Li W H. 2017. Morphological variation analysis on escaped Nile tilapia from main aquaculture areas in Guangxi[J]. Journal of Southern Agriculture，48（11）：2071-2077.]

郭新紅，劉少軍，劉巧，劉筠. 2004. 魚類線粒體 DNA 研究新進(jìn)展[J]. 遺傳學(xué)報(bào)，31（9）：983-1000. [Guo X H，Liu S J，Liu Q，Liu Y. 2004. New progresses on mitochondrial DNA in fish[J]. Acta Genetica Sinica，31（9）：983-1000.]

郭奕惠，喻達(dá)輝，黃桂菊，李莉好，符云，葉衛(wèi). 2009. 中國主要養(yǎng)殖羅非魚親緣關(guān)系的COI序列分析[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，28（1）：75-79. [Guo Y H，Yu D H，Huang G J，Li L H，F(xiàn)u Y，Ye W. 2009. Phylogenetic relationship of Oreochromis tilapias cultured in mainland China based on COI sequences[J]. Journal of Huazhong Agricultural University，28（1）：75-79.]

李建林，唐永凱，李紅霞，俞菊華，徐跑. 2011. 尼羅羅非魚、奧利亞羅非魚及其雜交后代微衛(wèi)星標(biāo)記鑒別和種質(zhì)純度分析[J]. 上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，20（1）：27-33. [Li J L，Tang Y K，Li H X，Yu J H，Xu P. 2011. Identification and pureness of germplasm analysis of Oreochromis niloticus，Oreochromis aureus，and their hybrids by microsatellite markers[J]. Journal of Shanghai Ocean University，20（1）：27-33.]

李晶，劉雪濤，郭華威，岳碧松，李靜. 2013. 動(dòng)物DNA條形碼之分析方法研究進(jìn)展[J]. 四川動(dòng)物，32（6）：950-954. [Li J，Liu X T，Guo H W，Yue B S，Li J. 2013. Progress of analytic methods in animal DNA barcoding[J]. Si-chuan Journal of Zoology，32（6）：950-954.]

李莉好，喻達(dá)輝，黃桂菊，葉衛(wèi)，杜博，符云，童馨，郭奕惠. 2008. 尼羅羅非魚、奧利亞羅非魚及其正、反雜交群體的遺傳多樣性[J]. 中國水產(chǎn)科學(xué)，15（4）：585-592. [Li L H，Yu D H，Huang G J，Ye W，Du B，F(xiàn)u Y，Tong X，Guo Y H. 2008. Genetic diversity of Oreochromis niloticus，O. aureus and their reciprocally-crossed hybrid stocks[J]. Journal of Fishery Sciences of China，15（4）：585-592.]

劉軍，趙良杰，凡迎春，張新磊，劉其根. 2016. 魚類環(huán)境 DNA 研究中通用引物的篩選驗(yàn)證[J]. 淡水漁業(yè)，46（1）：9-17. [Liu J，Zhao L J，F(xiàn)an Y C，Zhang X L，Liu Q G. 2016. Universal primer screening and verification for fish environment DNA research[J]. Freshwater Fisheries，46（1）：9-17.]

劉孝華. 2007. 羅非魚的生物學(xué)特性及養(yǎng)殖技術(shù)[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，46（1）：115-116. [Liu X H. 2007. Biological cha-racteristics and cultivation cechnology of the tilapia mossambica[J].? Hubei Agricultural Sciences，46（1）：115-116.]

強(qiáng)竣，楊弘，王輝，徐跑，柒壯林，何杰. 2012. 海豚鏈球菌感染對(duì)不同品系羅非魚血液生化指標(biāo)和肝臟HSP70 mRNA表達(dá)的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，36（6）：958-968. [Qiang J，Yang H，Wang H，Xu P，Qi Z L，He J. 2012. Studies on blood biochemical indices and expression of hepatic HSP70 mRNA of different tilapia strains artificially cha-llenged with Streptococcus iniae[J]. Journal of Fisheries of China，36（6）：958-968.]

單云晶，魯翠云，李超，張明昭，顧穎，孫效文. 2013. 基于線粒體COI基因序列的5種鯉養(yǎng)殖品種遺傳多樣性研究[J]. 中國水產(chǎn)科學(xué)，20（5）：931-938. [Shan Y J，Lu C Y，Li C，Zhang M Z，Gu Y，Sun X W. 2013. Study of DNA barcoding and genetic variation based on the mitochondrial COI genesequences in five carp varieties[J]. Journal of Fishery Sciences of China，20（5）：931-938.]

沈夏霜，敖秋桅，甘西，譚蕓，羅永巨，梁軍能，朱佳杰. 2018. 吉富羅非魚抗病品系F5代抗病性能和生長性能的評(píng)估[J]. 南方水產(chǎn)科學(xué)，14（3）：83-90. [Shen X S，Ao Q G，Gan X，Tan Y，Luo Y J，Liang J N，Zhu J J. 2018. Estimation of disease resistance and growth in F5 generation families of GIFT tilapia[J]. South China Fisheries Scien-ce，14（3）：83-90.]

譚細(xì)暢，李新輝，李躍飛，李捷. 2012. 尼羅羅非魚早期發(fā)育形態(tài)及其在珠江水系的空間分布[J]. 生物安全學(xué)報(bào)，21（4）：295-299. [Tan X C，Li X H，Li Y F，Li J. 2012. Early development and spatial distribution of the Nile tilapia （Oreochromis niloticus） in the Pearl River[J]. Journal of Biosafety， 21（4）：295-299.]

萬松良，筴金華，任炳琛，魏志宇，張艷紅，萬珊. 2018. 奧利亞羅非魚（WZ♀）×尼羅羅非魚（XY♂、YY♂）雜交子代的性比分析[J]. 水產(chǎn)學(xué)雜志，31（3）：14-19. [Wan S L，Ce J H，Ren B C，Wei Z Y，Zhang Y H，Wan S. 2018. Sex ratio analysis of hybrid F1 from female blue tilapia Oreochromis aureus（WZ ♀）×male Nile tilapia O. niloticus （XY ♂，YY ♂） crosses[J]. Chinese Journal of Fisheries，31（3）：14-19.]

汪開成，吳志強(qiáng)，武琳，譚虹雨，趙立朝，劉博文，趙雪倩，高勝男，程光平，張曼，黃鈞. 2018. 廣西紅水河外來紅腹羅非魚形態(tài)差異分析[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，31（10）：2208-2216.[Wang K C，Wu Z Q，Wu L，Tan H Y，Zhao L C，Liu B W，Zhao X Q，Gao S N，Cheng G P，Zhang M，Huang J. 2018. Morphological variation analysis on the redbelly tilapia（Coptodon zillii） of Hongshui River in Guangxi[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences，31（10）：2208-2216.]

王金龍，楊弘，吳婷婷，張志偉. 2007. 奧利亞羅非魚（♀）×鱖（♂）遠(yuǎn)緣雜交子代的遺傳結(jié)構(gòu)[J]. 中國水產(chǎn)科學(xué)，14（1）：32-38. [Wang J L，Yang H，Wu T T，Zhang Z W. 2007. Genetic constitutions of distant hybridization offsprings between Oreochromis aurea （♀） ×Siniperca chuatsi（♂）[J]. Journal of Fishery Sciences of China，14（1）：32-38.]

王娜泠，胡則輝，卞光明，柴學(xué)軍. 2017. DNA條形碼技術(shù)及其在水生動(dòng)物中的應(yīng)用[J]. 浙江海洋大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），36（5）：432-438. [Wang N L，Hu Z H，Bian G M，Chai X J. 2017. DNA barcoding and its application in aquatic animals[J]. Journal of Zhejiang Ocean University（Natural Science），36（5）：432-438.]

武宇鵬，丁亮，李捷，武春生，范仁俊，朱朝東. 2011. DNA條形碼的應(yīng)用進(jìn)展及討論[J]. 環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào)，33（1）：99-106.[Wu Y P，Ding L，Li J，Wu C S，F(xiàn)an R J，Zhu C D. 2011. DNA barcoding：Current progresses and discussions[J]. Journal of Environmental Entomology，33（1）：99-106.]

張紅燕，袁永明，賀艷輝，王紅衛(wèi)，代云云. 2015. 中國羅非魚生產(chǎn)與貿(mào)易現(xiàn)狀分析及建議[J]. 中國漁業(yè)經(jīng)濟(jì)，33（3）：95-100. [Zhang H Y，Yuan Y M，He Y H，Wang H W，Dai Y Y. 2015. Analysis and suggestions on production and trade of tilapia in China[J]. Chinese Fisheries Economics，33（3）：95-100.]

趙立朝，吳志強(qiáng)，張曼，鄭雄，李德越，劉博文. 2019. 廣西南部主要水系野生羅非魚建群狀況調(diào)查分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，50（2）：397-404. [Zhao L C，Wu Z Q，Zhang M，Zheng X，Li D Y，Liu B W. 2019. Establishment of wild tilapia population community in mainrivers of southern Guangxi[J]. Journal of Southern Agriculture，50（2）：397-404.]

周輝明，劉引蘭，李飛. 2011. 廣西右江魚類資源研究[J]. 江西水產(chǎn)科技，（3）：22-25. [Zhou H M，Liu Y L，Li F. 2011. Study on fish resources in Youjiang River，Guangxi[J]. Jiangxi Fishery Science and Technology，（3）：22-25.]

Arba?iauskas K，Lesutiene J，Gasiūnait Z R. 2013. Feeding strategies and elemental composition in Ponto-Caspian peracaridans from contrasting environments：Can stoichiometric plasticity promote invasion success？[J]. Freshwater Biology，58（5）：1052-1068.

Bergstrom M A，Mensinger A F. 2009. Interspecific resource competition between the invasive round goby and three native species： Logperch，slimy sculpin，and spoonhead sculpin[J]. Transactions of the American Fisheries Socie-ty，138（5）：1009-1017.

Chen M，Li L P，Wang R，Liang W W，Huang Y，Li J，Lei A Y，Huang? W Y，Gan X. 2012. PCR detection and PFGE genotype analyses of streptococcal clinical isolates from tilapia in China[J]. Veterinary Microbiology，159（3-4）：526-530.

Falade M O，Opene A J，Benson O. 2016. DNA barcoding of Clarias gariepinus，Coptodon zillii and Sarotherodon me-lanotheron from Southwestern Nigeria[J]. F1000 Research，5：1268.

Giery S T，Layman C A，Langerhans R B. 2015. Anthropogenic ecosystem fragmentation drives shared and unique pa-tterns of sexual signal divergence among three species of Bahamian mosquitofish[J]. Evolutionary Applications，8（7）：679-691.

Hebert P D N，Cywinska A，Ball S L，Dewaard J R. 2003. Bio-logical identifications through DNA barcodes[J]. Procee-dings of the Royal Society B-biological Science，270（1512）：313-321.

Hollingsworth P M，Graham S W，Little D P. 2011. Choosing and using a plant DNA barcode[J]. PLoS One，6（5）：e19254.

Kress W J，Wurdack K J，Zimmer E A，Weigt L A，Janzen D H. 2005. Use of DNA barcodes to identify flowering plants[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，102（23）：8369-8374.

Li C H，Orti G，Zhang G，Lu G Q. 2007. A practical approach to phylogenomics：The phylogeny of ray-finned fish（Actinopterygii） as a case study[J]. BMC Evolutionary Biology，7：44.

Ordo?ez J F F，Ventolero M F H，Santos M D. 2017. Maternal mismatches in farmed tilapia strains（Oreochromis spp.） in the Philippines as revealed by mitochondrial COI gene[J]. Mitochondrial DNA （Part A），28（4）：526-535.

Peterson M S，Slack W T，Waggy G L，F(xiàn)inley J，Woodley C M，Partyka M L. 2006. Foraging in non-native environments：Comparison of Nile tilapia and three co-occurring native centrarchids in invaded coastal Mississippi watersheds[J]. Environmental Biology of Fishes，76：283-301.

Rognon X，Guyomard R. 1997. Mitochondrial DNA differentia-tion among east and west African nile tilapia populations[J]. Journal of Fish Biology，51（1）：204-207.

Tamura K，Stecher G，Peterson D，F(xiàn)ilipski A，Kumar S. 2013. MEGA 6：Molecular evolutionary genetics analysis version 6.0[J]. Molecular Biology and Evolution，30（12）：2725-2729.

Urmaza E B，Aguilar R O. 2005. Growth performance of saline-tolerant tilapia produced from cross combinations of various tilapia spieces[J].Journal of Aquaculture in the Tropics，20（1）：11-27.

Ward R D，Costa F O，Holmes B H，Steinke D. 2008. DNA barcoding of shared fish species from the North Atlantic and Australasia： Minimal divergence for most taxa，but Zeus faber and Lepidopus caudatus each probably constitute two species[J]. Aquatic Biology，3（1）：71-78.

Zhang J B，Hanner R. 2011. DNA barcoding is a useful tool for the identification of marine fishes from Japan[J]. Bioche-mical Systematics and Ecology，39（1）：31-42.

Zhu W B，Yang H，Yuan X H，Dong Z J，F(xiàn)u J J，Wang L M，Su S Y，Liu N，Song? F B，Chen X T. 2017. High genetic diversity and differentiation in three red tilapia stocks revealed by microsatellite DNA marker analysis[J]. Aquaculture International，25（6）：1997-2006.

（責(zé)任編輯 蘭宗寶）