馬洪熹 黎永鑒

【摘要】 目的 研究染色體核型異常與兩廣交界地區(qū)反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦之間的關(guān)系。方法 對兩廣交界地區(qū)180對反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦進(jìn)行外周血染色體核型分析。結(jié)果 180對反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦中，共出現(xiàn)染色體核型異常夫婦46對，染色體核型異常檢出率為25.56%（46/180），46對異常核型中染色質(zhì)多態(tài)變異25對（54.35%），染色體倒位11對（23.91%），染色體平衡易位7對（15.22%），羅伯遜易位1對（2.17%），染色體數(shù)目異常1 對（2.17%），嵌合體1對（2.17%）。結(jié)論 染色體核型異常是導(dǎo)致兩廣交界地區(qū)育齡夫婦反復(fù)自然流產(chǎn)的重要危險因素之一。

【關(guān)鍵詞】 復(fù)發(fā)性流產(chǎn);染色體;核型分析

中圖分類號：R714.21;R446.7 ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2019.05.006

【Abstract】 Objective To investigate correlation between chromosomal karyotype abnormality and repeated spontaneous abortion of couples in the border areas between Guangdong and Guangxi.Methods Analysis of chromosomal karyotype in peripheral blood was performed in 180 couples with repeated spontaneous abortions in the border areas between Guangdong and Guangxi.Results Among 180 couples with repeated spontaneous abortion，46 couples had abnormal chromosome karyotype，detection rate of which was 25.56%（46/180）.Among 46 couples with abnormal chromosome karyotype，25 couples（54.35%） had chromatin polymorphism variation，11 couples（23.91%） had chromosome inversion，7 couples（15.22%） had balanced translocation of chromosome，1 couple（2.17%） had Robertsonian translocation，1 couple（2.17%） had abnormal chromosome numbers，and 1 couple（2.17%） had chimera.Conclusion Chromosomal karyotype abnormality is one of the important risk factors for repeated spontaneous abortion in couples of childbearing age in border area between Guangdong and Guangxi.

【Key words】 repeated spontaneous abortions;chromosome;karyotype analysis

自然流產(chǎn)通常是指妊娠不足20周，胎兒體重不足500 g的妊娠物自然丟失。反復(fù)自然流產(chǎn)（Repeated spontaneous abortion，RSA）亦稱復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)（Recurrent spontaneous abortion），一般指與同一配偶發(fā)生連續(xù)3次或3次以上的自然流產(chǎn)[1]。近年來國內(nèi)外部分學(xué)者[2～3]提出將連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)者納入RSA的范疇。RSA作為常見的臨床不育癥，嚴(yán)重影響了廣大婦女的生殖健康。因此對反復(fù)自然流產(chǎn)的原因進(jìn)行準(zhǔn)確的判斷有著重要的現(xiàn)實意義。目前的研究表明：RSA病因主要涉及染色體核型、內(nèi)分泌、解剖、免疫、感染、不良環(huán)境、心理等因素。本文對2014年1月至2018年9月間來我院就診的180對兩廣交界地區(qū)反復(fù)自然流產(chǎn)的夫婦進(jìn)行了外周血染色體核型分析，研究該組病例異常染色體出現(xiàn)的頻率規(guī)律。

1 資料與方法1.1 一般資料 選擇2014年1月至2018年9月來我院就診的兩廣交界地區(qū)反復(fù)自然流產(chǎn)遺傳咨詢者共180對夫婦（360例）。男性年齡24～45歲，女性年齡20～43歲。納入標(biāo)準(zhǔn)為：就診夫婦至少有2次以上的自然流產(chǎn)史，所有病例均排除了內(nèi)分泌、生殖系統(tǒng)、免疫、感染、不良環(huán)境、心理等干擾因素。

1.2 主要儀器 普通低速離心機(jī)、37℃普通恒溫培養(yǎng)箱、37℃水浴箱、干燥箱、Olympus CKX41型顯微鏡（日本Olympus公司）、LABBM9080全自動染色體核型掃描分析系統(tǒng)（上海北昂醫(yī)療技術(shù)有限公司）。

1.3 主要試劑 一生駿細(xì)胞培養(yǎng)液、達(dá)暉淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液、秋水仙素、KCL低滲液、固定液、胰蛋白酶、吉姆薩染液。

1.4 研究方法 常規(guī)外周血染色體制備法，在無菌條件下，接種外周血于淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基中，每個標(biāo)本接種A、B瓶。常規(guī)條件下培養(yǎng)、制片，經(jīng)G顯帶法處理后鏡檢。每個病例計數(shù)20～30個染色體中期分裂象細(xì)胞，并診斷分析5個細(xì)胞核型、數(shù)目。如疑為嵌合體或鑲嵌體，計數(shù)100個核型，并計算百分比。

2 結(jié) ?果 ?180對兩廣交界地區(qū)的反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦中，共出現(xiàn)染色體核型異常夫婦46對，染色體核型異常檢出率為25.56%（46/180）。46對異常核型中染色質(zhì)多態(tài)變異25對（54.35%），染色體倒位11對（2391%），染色體平衡易位7對（15.22%），羅伯遜易位、染色體數(shù)目異常、嵌合體各1 對（各占217%）。46對染色體核型異常夫婦均為一方出現(xiàn)異常，無夫婦雙方異常。46對染色體核型異常夫婦比例及構(gòu)成比見表 1;46對染色體核型異常夫婦類型頻率分布見表2。

3 討 ?論 ?染色體核型異常是導(dǎo)致育齡夫婦反復(fù)自然流產(chǎn)的重要危險因素之一，有數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常兩種形式。如今，外周血染色體核型分析作為反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦遺傳咨詢中重要組成部分也得到了認(rèn)可，而針對兩廣交界地區(qū)反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦染色體分析的系統(tǒng)報道還較為少見。本研究對兩廣交界地區(qū)180對（360例）反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦的外周血染色體核型分布頻率進(jìn)行研究分析，共檢出染色體核型異常夫婦 46對，異常檢出率為25.56%。而按例數(shù)計算，異常檢出率為12.78%（46/360），與國內(nèi)外文獻(xiàn)報道的兩廣其他地區(qū)5.2%～14.52%的檢出率基本相符[4～9]。

本研究在180對反復(fù)自然流產(chǎn)患者中，檢出染色體平衡易位7對夫婦7例病例，異常例數(shù)檢出率為1.94%。染色體平衡易位作為常見的染色體結(jié)構(gòu)異常類型，是引起自然流產(chǎn)的因素之一。平衡易位指的是同時斷裂的兩條染色體，斷片相互交換位置之后重接而形成兩條衍生染色體，該易位原有基因總數(shù)和染色體片段均無變化，只是位置發(fā)生了改變。因此，攜帶者表型是正常，對個體發(fā)育一般無嚴(yán)重影響。但在生育過程中，理論上形成18種配子，與正常配子結(jié)合，可形成18 種合子，正常的僅有一種，平衡易位攜帶者有一種，其他16種以三體或部分單體的形式出現(xiàn)，由于遺傳物質(zhì)的不平衡而導(dǎo)致流產(chǎn)或死胎[10]。所以表型正常的平衡易位攜帶者夫婦，在再次妊娠時，應(yīng)做產(chǎn)前診斷明確胎兒染色體核型是否正常，以決定是否繼續(xù)妊娠。

羅伯遜易位是指兩個D組或G組的染色體在著絲?；蚱浣烁浇鼣嗔押笕诤铣蔀橐粋€染色體，是相互易位的一種特殊形式[10]。在我院180對反復(fù)自然流產(chǎn)夫婦中，檢出有1對夫婦1例病例存在羅氏易位，異常例數(shù)檢出率為0.28%。羅氏易位分為同源羅伯遜易位和非同源羅伯遜易位兩種形式。非同源羅伯遜易位攜帶者產(chǎn)生的6種配子中，正常配子、攜帶者、不平衡配子的概率分別為1/6、1/6、4/6，因此存在有正常、異常胚胎的孕育情況發(fā)生。我院檢出的1例病例為非同源羅伯遜易位，該對夫婦出現(xiàn)了懷孕2次，自然流產(chǎn)2次的癥狀。而同源羅伯遜易位產(chǎn)生的2種配子，與正常配子結(jié)合只能形成單體或三體的合子，一般會出現(xiàn)流產(chǎn)或三體方式存活。近年來，有學(xué)者認(rèn)為inv（9）與其他倒位一樣會形成遺傳效應(yīng)，提示inv（9）可能與反復(fù)自然流產(chǎn)有一定相關(guān)性[11～12]。本研究中，46對存在染色體異常的夫婦中，檢出11對夫婦11例病例存在倒位核型，異常檢出率為3.06%，其中9對夫婦9例病例為inv（9）。染色體倒位是指一條染色體出現(xiàn)斷裂后，產(chǎn)生的片斷倒轉(zhuǎn) 180 度后重新連接而形成，一般遺傳物質(zhì)無增減，因此倒位攜帶者表型多正常。倒位攜帶者理論上可形成4 種配子：兩種為帶有部分重復(fù)及部分缺失的重組染色體，一種為倒位染色體，還有一種為正常染色體。前兩種異常配子與正常配子結(jié)合后，由于基因的平衡受到破壞而表現(xiàn)為流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局。

染色體多態(tài)性是人群內(nèi)各個體之間出現(xiàn)染色體形態(tài)或著色方面的變異，其涉及區(qū)域一般在遺傳上含高度重復(fù)DNA序列、不活躍的結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)。常見的染色體多態(tài)性見于1號、9號和16號異染色質(zhì)區(qū)增加以及D組和G組染色體隨體的增加或縮短，還有Y染色體的多態(tài)性，即大Y和小Y[13]。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，染色體多態(tài)性一般無臨床表型效應(yīng)，通常認(rèn)為屬于正常的變異。但近幾年來，越來越多的文獻(xiàn)報道表明染色體的多態(tài)性可能與流產(chǎn)有關(guān)[14～17]，其引起臨床效應(yīng)的機(jī)理可能為染色體多態(tài)部分造成遺傳物質(zhì)的增減表現(xiàn)出功能異常，影響了細(xì)胞分裂，從而導(dǎo)致胚胎發(fā)育障礙，致使生育夫婦反復(fù)出現(xiàn)流產(chǎn)等臨床癥狀。本研究中，25對夫婦25例病例出現(xiàn)染色體多態(tài)性變異情況，占總受檢人群的6.94%，占核型異常例數(shù)構(gòu)成比為54.35%，也說明了多態(tài)性變異在本研究中與反復(fù)流產(chǎn)有關(guān)。

此外，本次研究檢出了1對夫婦中丈夫存在有核型為47，XYY的染色體數(shù)目異常情況，該患者除精子畸形率高之外無其他異常表型，其妻孕2次自然流產(chǎn)2次。嵌合體1對，核型為46，XY/46，XY，inv（9）（p11;q13），因其在遺傳過程中產(chǎn)生異常配子而導(dǎo)致表現(xiàn)出流產(chǎn)、死胎等情況。

綜上所述，染色體核型異常是引起兩廣交界地區(qū)育齡夫婦反復(fù)自然流產(chǎn)的重要危險因素之一，對于反復(fù)流產(chǎn)夫婦進(jìn)行染色體核型檢查是非常有必要的，應(yīng)在臨床上大力推廣。從臨床醫(yī)生角度，可以提供診療依據(jù);從患者角度，可以指導(dǎo)再次妊娠;從國家層面，可以保障人口出生素質(zhì)。

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