黃 晶 叢 晶 李 威 高敬書 張多加 常 慧 馬紅麗 楊新鳴 王 宇 吳效科

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦一科，黑龍江 哈爾濱 150040）

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院是國家中醫(yī)臨床研究基地，婦科以多囊卵巢綜合征、先兆流產(chǎn)、盆腔炎等為優(yōu)勢病種，開展了全國多中心、大樣本的深入研究。婦科疾病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制、個(gè)性化治療方案、療效的隨訪、藥物敏感性研究及新藥研發(fā)等離不開大量的生物樣本［1］，為適應(yīng)科研的需要，我院自2017年派送專業(yè)人員外出學(xué)習(xí)，建立婦科生物樣本庫，相繼購置了-80℃超低溫冰箱、臥式超低溫保存箱、整理架、凍存管、凍存盒、EDTA管（紫管）、促凝管（紅管）、移液器套裝（德國Eppendorf公司）、可調(diào)速臺(tái)式離心機(jī)、HDL潔凈工作臺(tái)、KFR-72LW/09YBA13海爾空調(diào)、生物樣本庫智能信息管理系統(tǒng)、低溫條碼打印機(jī)、掃碼機(jī)等，將血樣本進(jìn)行入出庫管理。通過積極采集和儲(chǔ)存婦科疾病血樣本，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測和規(guī)范、科學(xué)化的管理，為婦科疾病的基礎(chǔ)和臨床研究提供高質(zhì)量生物樣本資源。

生物樣本庫又稱生物銀行，是遵照國際標(biāo)準(zhǔn)化指南，收集、處理、儲(chǔ)存和應(yīng)用生物樣本以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用系統(tǒng)。生物樣本庫作為基礎(chǔ)研究成果向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化的平臺(tái)，在疾病診斷、新藥研發(fā)、疾病相關(guān)基因檢測及流行病學(xué)研究中均有重要作用。

我院婦科生物樣本庫現(xiàn)為初級(jí)建設(shè)階段，設(shè)有專職工作人員，負(fù)責(zé)血樣本的收集、處理、凍存等日常工作，制定了操作技術(shù)流程及管理制度；動(dòng)態(tài)記錄血樣本收集、標(biāo)識(shí)、分裝、出入庫、質(zhì)控等過程及相關(guān)數(shù)據(jù)，通過唯一編碼關(guān)聯(lián)血樣本的空間位置及相關(guān)信息。

吳效科老師主持的國家中醫(yī)藥管理局“中藥復(fù)方與微粉化黃體酮對(duì)先兆流產(chǎn)婦女活產(chǎn)的影響”項(xiàng)目已經(jīng)啟動(dòng)，全國各個(gè)分中心已派研究助手進(jìn)行培訓(xùn)，將預(yù)先粘貼隨機(jī)號(hào)的凍存管及凍存盒郵往各個(gè)分中心。待血樣收集完畢，將通過冷鏈公司，血樣及受試者血樣采集登記表（受試者編號(hào)、入組時(shí)間、治療前后采集時(shí)間及血樣本凍存數(shù)量），一并運(yùn)回中心生物樣本庫?，F(xiàn)以此項(xiàng)目為例，介紹如下。

1 血樣本采集前程序

婦科生物樣本庫的建立已通過黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，采集計(jì)劃由臨床科室、樣本庫工作人員共同制定并挑選一名臨床研究助手，每次采集病例由臨床醫(yī)生確定并簽署知情同意書，一式3份，由臨床科室、生物樣本庫、患者各執(zhí)1份留存。

2 血樣流程管理

2.1 血樣本采集流程 （吳效科老師中藥復(fù)方與微粉化黃體酮項(xiàng)目）：

2.1.1 留取血樣之前的準(zhǔn)備 （1）材料要求：①全血采集材料：靜脈采血材料、1×4 mL EDTA管（紫管）、3×1.8 mL凍存管（紅蓋）、凍存盒（黃色、綠色）、一次性血清吸管（任何大小都行）；②血清采集材料：靜脈采血材料、1×5 mL促凝管（紅管）、4×0.5 mL凍存管（藍(lán)蓋）、凍存盒（黃色、綠色）、一次性血清吸管（任何大小都行）。（2）設(shè)備要求：可調(diào)速臺(tái)式離心機(jī)；-80℃冰箱或-20℃無霜冰箱。

2.1.2 留取血樣（空腹） （1）首先確認(rèn)受試者是否處于空腹?fàn)顟B(tài)，如未空腹可重新安排采血時(shí)間。若因其他特殊原因無法另行安排，應(yīng)在采血記錄卡上注明“未空腹”；（2）受試者取坐位，若自覺頭暈可靠在椅子上或躺在床上；（3）如果采血不成功，需要重新安排采血時(shí)間。2.1.3處理血樣的規(guī)范性操作步驟 （1） 全血采集方法（采用靜脈采血方式）：采集每個(gè)受試者的血液，將全血裝在1個(gè)4 mL的紫蓋抗凝管中（包含EDTA），顛倒混勻抗凝管8～10次（避免溶血），充分混勻EDTA和全血，保證抗凝效果；用吸液槍將全血轉(zhuǎn)移至全血凍存管中，每管1 mL，每人份3管。凍存管已預(yù)先粘貼隨機(jī)號(hào)，根據(jù)每個(gè)受試者的隨機(jī)號(hào)，在全血凍存盒中選擇對(duì)應(yīng)隨機(jī)號(hào)的凍存管。同時(shí)在“受試者血樣采集登記表”上詳細(xì)記錄受試者編號(hào)、入組時(shí)間、治療前后血樣本采集時(shí)間及血樣本凍存數(shù)量。血樣本先由分中心保存在-20℃或者-80℃的冰箱中（-20℃最長保存時(shí)間為3個(gè)月或-80℃可長期保存）直至3個(gè)月后郵寄到中心樣本庫。

（2） 血清采集方法（采用靜脈采血方式，空腹采血）：安排受試者在早晨 7:00—10:00采血。采2個(gè)紅管，每管4 mL上下輕搖管子5次（避免溶血），室溫下至少靜置30分鐘后進(jìn)行離心，靜置時(shí)間最長不得超過 2 h。離心條件：3000 rpm，20 min。用一次性吸管將上清取出，移至血清凍存管中，0.5 mL需采集4管。凍存管已預(yù)先粘貼隨機(jī)號(hào)，根據(jù)每個(gè)受試者的隨機(jī)號(hào)，在血清凍存盒中選擇對(duì)應(yīng)隨機(jī)號(hào)的凍存管。同時(shí)，在受試者血樣采集登記表上詳細(xì)記錄受試者編號(hào)、入組時(shí)間、治療前后血樣本采集時(shí)間及血樣本凍存數(shù)量。最后將凍存盒放在-80℃或-20℃冰箱中。

2.2 血樣本的運(yùn)輸 所有生物樣本都被視為具有潛在生物危害風(fēng)險(xiǎn)，樣本的包裝和運(yùn)輸應(yīng)嚴(yán)格遵循國家的相關(guān)規(guī)定［2］。從各個(gè)分中心回收的血樣本必須由冷鏈公司干冰包埋進(jìn)行運(yùn)輸。

2.3 信息系統(tǒng) 采用生物樣本庫智能信息管理系統(tǒng)，打印機(jī)、掃碼機(jī)、條碼采用低溫二維碼打印，并于標(biāo)簽顯示其樣本編碼、采集日期、類型、存儲(chǔ)方式以及存儲(chǔ)位置等。例如，CHOP-IT-1800910-BS-F-02，代表先兆流產(chǎn)，2018年第9月10號(hào)入庫，血清，冰凍存儲(chǔ)，第二復(fù)份。

2.4 血樣本的保存 血樣本應(yīng)保存在 －80℃超低溫冰箱中。并記錄樣本保存的位置和狀態(tài)。保存的樣本應(yīng)定期進(jìn)行追蹤和核對(duì)，并對(duì)其外部和內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。

2.5 血樣本的清理與銷毀 對(duì)沒有利用價(jià)值的血樣本進(jìn)行清理和銷毀，可以節(jié)約超低溫冰箱的存儲(chǔ)空間，降低樣本保存成本。待銷毀的樣本應(yīng)作為醫(yī)療垃圾，嚴(yán)格依照相關(guān)法律法規(guī)進(jìn)行銷毀。樣本信息管理系統(tǒng)應(yīng)做好相關(guān)記錄［2］。

3 質(zhì)量控制

定期對(duì)庫內(nèi)樣本隨機(jī)抽查進(jìn)行質(zhì)量控制，對(duì)樣本的位置信息、臨床信息（患者基本信息、診斷、治療、輔助檢查、跟蹤隨訪）的規(guī)范性及完整性進(jìn)行抽查，聽取反饋結(jié)果。

對(duì)收集的樣本進(jìn)行質(zhì)量控制，是生物樣本庫管理和運(yùn)行的基本要求，包括樣本采集、分裝、入庫、出庫整個(gè)過程中對(duì)樣本質(zhì)量的監(jiān)控，避免樣本出現(xiàn)污染、降解等質(zhì)量問題.不同來源、不同使用方式的樣本，其具體的質(zhì)量要求可能有所差別，能夠客觀反映取材組織細(xì)胞當(dāng)時(shí)病理、生理狀態(tài)下的分子信息［3］。開展有效的質(zhì)量管理，嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)是樣本庫運(yùn)營過程的關(guān)鍵所在。

4 信息化管理

生物樣本庫的信息化管理包括日常保存的樣本信息以及與樣本相關(guān)的臨床信息管理，是樣本庫建設(shè)中的重要組成部分，也是樣本庫科學(xué)管理和樣本資源科學(xué)利用的關(guān)鍵［4］。信息化系統(tǒng)包括受試者知情同意，樣本的采集、處理和入庫時(shí)間；對(duì)樣本存放位置進(jìn)行自動(dòng)分配、查找和追蹤；冰箱和環(huán)境的實(shí)時(shí)溫度；樣本出庫和凍融次數(shù)；質(zhì)控報(bào)告等。我院婦科項(xiàng)目組數(shù)據(jù)庫存儲(chǔ)生物樣本庫的血樣本的臨床信息，為血樣本的重要組成部分。

5 與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的關(guān)系

高質(zhì)量、高水準(zhǔn)的生物樣本是人類重大疾病基因組、功能基因組、蛋白質(zhì)組等基礎(chǔ)、臨床研究與分子診斷標(biāo)志物、藥物靶點(diǎn)研發(fā)、健康研究的最珍貴資源與關(guān)鍵環(huán)節(jié)，也是眾多研究成果快速實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，即“轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)”應(yīng)用到臨床如疾病預(yù)測、早期診斷、分子分型與個(gè)性化治療、預(yù)后評(píng)估的重要保證，毫無疑問也是生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)自主創(chuàng)新體系中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)與保證，更是生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要基石和源泉［5］。倡導(dǎo)以患者為中心，強(qiáng)調(diào)基礎(chǔ)研究人員與臨床醫(yī)生的密切合作，以提高醫(yī)療總體水平。來源于醫(yī)院患者的生物樣本庫是開展轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究的重要基礎(chǔ)［6］。轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)一直是近年來國際醫(yī)學(xué)健康領(lǐng)域的熱門研究方向，生物樣本庫更是開展轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究的重要基礎(chǔ)，建立高質(zhì)量的生物樣本庫，大規(guī)模、高效地搜集和利用生物樣本，通過整合獲得更加完整、全面的生物樣本信息數(shù)據(jù)，對(duì)于提高科研效率具有極大的幫助［7］。

6 討論

標(biāo)準(zhǔn)化的流程、完善的質(zhì)量控制體系、嚴(yán)格的納入/排除標(biāo)準(zhǔn)以及規(guī)范的信息化管理平臺(tái)是樣本庫建設(shè)的關(guān)鍵，也是實(shí)現(xiàn)多中心、跨區(qū)域資源共享的前提。整合、共享與智能化管理是生物樣本庫發(fā)展的必然趨勢［8］。

生物樣本庫的建立，能將臨床的大量有效樣本統(tǒng)一化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化地采集、處理，使臨床疾病樣本能夠更加有效利用，基礎(chǔ)研究樣本來源更加可靠快捷。因我國現(xiàn)階段面臨的問題：①樣本質(zhì)量參差不齊，會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)誤差，嚴(yán)重影響后續(xù)研究的可重復(fù)性。②組學(xué)數(shù)據(jù)與醫(yī)療數(shù)據(jù)割裂，表現(xiàn)為數(shù)據(jù)分散保存、共享水平低。

我院婦科生物樣本庫現(xiàn)為建設(shè)初期，應(yīng)不斷完善樣本庫的建設(shè)。由“解決樣本的存儲(chǔ)問題”，逐步向“樣本的質(zhì)量問題”“樣本的信息化問題”“大數(shù)據(jù)建設(shè)問題”邁進(jìn)。

在不斷整合自身資源的同時(shí)，利用與國內(nèi)外多個(gè)分中心建立起的長期良好合作關(guān)系，深入開展不孕不育等婦科疾病的基礎(chǔ)研究，提高研究交流平臺(tái)，以期更好地為婦科疾病的中醫(yī)藥臨床研究服務(wù)。