韓長(zhǎng)青,付惠玲

(西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，西安710077)

川崎病(Kawasaki disease，KD)是兒科臨床常見(jiàn)的病癥，此病在1967年由日本川崎富作醫(yī)師最先報(bào)道，男性發(fā)病率高于女性，在成人或3個(gè)月以下的小兒群體中比較少見(jiàn)。其病因未明，主要病理改變是可發(fā)生全身性的血管炎，并且較易合并有冠脈的損害，還可引發(fā)嚴(yán)重的心血管類并發(fā)癥，未接受治療的患兒的并發(fā)癥發(fā)生率為20%～25%，對(duì)于患兒的身體健康具有較大的危害，已經(jīng)受到廣大兒科醫(yī)學(xué)工作者的重視[1]。有報(bào)道[2]指出，CD4+型T細(xì)胞的異?；罨軌?qū)е露囝愌仔约?xì)胞因子參與KD發(fā)病。輔助性T細(xì)胞9(Helper T cells 9，Th9)作為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的CD4+ T細(xì)胞，可通過(guò)產(chǎn)生白細(xì)胞介素-9(interleukin-9，IL-9)形成免疫調(diào)節(jié)，其在自身免疫類疾病當(dāng)中具有一定的作用，Th9細(xì)胞和IL-9是否也參與到KD的發(fā)病進(jìn)程當(dāng)前臨床上鮮有報(bào)道[3，4]。本文通過(guò)分析急性期KD患兒外周血Th9細(xì)胞與IL-9的水平變化及其意義，為臨床診治急性期KD患兒提供監(jiān)測(cè)靶點(diǎn)，并有助于患兒的預(yù)后，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年2月～2017年2月在西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院就診的急性期KD患兒79例進(jìn)行研究，記為KD急性期組。入組標(biāo)準(zhǔn)：①所有患兒均滿足第5版的川崎病診斷指南中關(guān)于KD的有關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②病程>5d；③年齡>3個(gè)月；④入院前未應(yīng)用免疫球蛋白和阿司匹林，以及免疫抑制劑和激素藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有其他的感染性、過(guò)敏性亦或是自身免疫類疾病者；②有血液疾病者；③有惡性腫瘤者；④有心、肝、腎等重要臟器的功能性障礙者；⑤病歷資料缺失者。所有患兒的家長(zhǎng)均對(duì)此次研究做到知情同意，且已簽署了同意書(shū)。79例患兒中，男45例，女34例；年齡4個(gè)月～6歲，平均(3.24±0.34)歲；病程6～12d，平均(8.04±0.34)d。患兒的急性期癥狀：發(fā)熱、皮疹65例，頸部非膿型淋巴結(jié)腫大54例，眼結(jié)合膜充血51例，草莓舌50例，手足硬型水腫48例。對(duì)其中的70例患兒實(shí)施恢復(fù)期(即病程為21～60 d)隨訪，記為KD恢復(fù)期組，其中男41例、女29例；年齡4個(gè)月～5歲，平均(3.18±0.27)歲；病程7～11 d，平均(8.07±0.32)d。另選同期在醫(yī)院接受健康體檢的兒童70例作為對(duì)照組，其中男40例、女30例；年齡5個(gè)月～5歲，平均(3.19±0.40)歲。對(duì)各組的年齡及性別等資料數(shù)據(jù)實(shí)施比較，P均>0.05。此次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)。

1.2 外周血Th9細(xì)胞比例測(cè)算及IL-9檢測(cè) 為各組受試者采集晨間空腹靜脈血6 mL，放于促凝管內(nèi)，取2 mL給予10 min 3 000 r/min離心后提取血清，放在-80 ℃下保存。IL-9水平的檢測(cè)通過(guò)購(gòu)自美國(guó)Rapid BilLab公司的ELISA試劑盒實(shí)施操作。另取2 mL血液標(biāo)本通過(guò)Ficoll密度和梯度離心法將其分離成單個(gè)的核細(xì)胞，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，將細(xì)胞密度調(diào)節(jié)到5×106/mL，以5 μL的別藻藍(lán)蛋白-抗人CD3抗體及異硫氰酸熒光素-抗人CD8抗體實(shí)施染色。而后依次細(xì)胞固定、破膜、細(xì)胞內(nèi)染色，經(jīng)PBS沖洗2次后固定檢測(cè)外周血的Th9細(xì)胞。操作過(guò)程中所用抗體均購(gòu)自深圳晶美工程公司，嚴(yán)格遵照說(shuō)明書(shū)的步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 外周血紅蛋白(CRP)、血沉(ESR)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)檢測(cè) 再取2mL血液標(biāo)本給予10 min 3 000 r/min離心后提取血清，利用購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司的AU2700型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定CRP、ESR水平，應(yīng)用購(gòu)自深圳的庫(kù)貝爾公司的血細(xì)胞分析儀測(cè)定PLT水平，試劑盒均為儀器自配。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血Th9細(xì)胞及IL-9水平比較 KD急性期組和KD恢復(fù)期組的外周血Th9細(xì)胞及IL-9水平均高于對(duì)照組，且KD急性期組高于KD恢復(fù)期組，三組間任意兩組相比，P均<0.05，見(jiàn)表1。

表1 各組外周血Th9細(xì)胞及IL-9水平比較

2.2 各組CRP、ESR和PLT水平比較 KD急性期組和KD恢復(fù)期組的CRP、ESR和PLT水平均高于對(duì)照組，且KD急性期組的CRP、ESR高于KD恢復(fù)期組，而PLT低于KD恢復(fù)期組，三組間任意兩組相比，P均<0.05，見(jiàn)表2。

2.3 患兒外周血Th9細(xì)胞及IL-9與CRP、ESR和PLT的相關(guān)性分析 根據(jù)Spearman法對(duì)指標(biāo)間的相關(guān)性進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，患兒外周血Th9細(xì)胞及IL-9與CRP和ESR均呈正相關(guān)(r分別為0.571，0.682，0.604，0.714；P均<0.05)，與PLT呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.589，-0.723；P均<0.05)。

表2 各組CRP、ESR和PLT水平比較

3 討論

臨床上，KD屬于小兒時(shí)期較為多見(jiàn)的一種后天性心臟病，對(duì)患兒機(jī)體的危害較大，通?？捎绊懼行?dòng)脈，特別是冠狀動(dòng)脈，大約有10%的患者可發(fā)展成冠脈瘤，或是冠脈狹窄及血栓，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致猝死[6，7]。KD發(fā)病機(jī)制至今仍未明確，但有學(xué)者認(rèn)為其可能和機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的高度活化形成的異常性自主反應(yīng)相關(guān)。有報(bào)道[8，9]指出，KD是由免疫介導(dǎo)的發(fā)生于全身中小血管的急性炎癥，可使機(jī)體內(nèi)形成大量的炎性遞質(zhì)及免疫球蛋白，最終導(dǎo)致各種炎癥因子水平明顯升高。隨著人們對(duì)KD的深入認(rèn)識(shí)，當(dāng)前臨床認(rèn)為Th細(xì)胞可能與KD的發(fā)病有關(guān)，而Th9細(xì)胞可在自身免疫型疾病和過(guò)敏型疾病以及感染型疾病當(dāng)中發(fā)揮出重要作用。本文通過(guò)分析急性期KD患兒外周血Th9細(xì)胞與IL-9的水平變化及其意義，以期為臨床診治提供數(shù)據(jù)支持。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，KD急性期組和KD恢復(fù)期組的外周血Th9細(xì)胞及IL-9水平均高于對(duì)照組，且KD急性期組高于KD恢復(fù)期組(P均<0.05)，這提示了KD患兒外周血Th9細(xì)胞及IL-9水平明顯升高。究其原因，可能是因?yàn)門h9細(xì)胞與其細(xì)胞因子IL-9均參與到了KD病情的進(jìn)展過(guò)程中。具體而言，IL-9作為一種T細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞因子，能夠直接對(duì)淋巴B細(xì)胞產(chǎn)生作用，并在免疫球蛋白的形成和調(diào)控中產(chǎn)生重要作用，此過(guò)程對(duì)KD疾病的發(fā)生發(fā)展具有促進(jìn)作用[10～12]。

同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，KD急性期組和KD恢復(fù)期組的CRP、ESR和PLT水平均高于對(duì)照組，且KD急性期組的CRP、ESR高于KD恢復(fù)期組，而PLT低于KD恢復(fù)期組(P均<0.05)，這提示了KD患兒CRP和ESR水平明顯升高，而處于KD急性期的患兒PLT明顯更低。分析其原因，可能是因?yàn)镃RP、ESR和PLT均是炎癥反應(yīng)或觀察高凝狀態(tài)的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，而KD患兒發(fā)病后機(jī)體出現(xiàn)了一系列的免疫生化反應(yīng)，致使炎癥情況保持在較高的狀態(tài)，并出現(xiàn)凝血異常，因此可從CRP、ESR和PLT等指標(biāo)的變化中加以呈現(xiàn)[13～15]。在2004年時(shí)，美國(guó)的心臟學(xué)會(huì)為制定KD診斷和評(píng)估指南，亦將上述3個(gè)指標(biāo)用于KD病情的輔助診斷。

此外，本實(shí)驗(yàn)對(duì)指標(biāo)間的相關(guān)性進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，患兒外周血Th9細(xì)胞及IL-9與CRP和ESR均呈正相關(guān)，與PLT呈負(fù)相關(guān)，這也再次證實(shí)了KD患兒機(jī)體外周血Th9細(xì)胞及IL-9與炎癥因子及高凝指標(biāo)之間的聯(lián)系十分緊密?？紤]是因?yàn)榛純旱腡h9細(xì)胞通過(guò)過(guò)量地分泌IL-9參與到KD的發(fā)病進(jìn)程中，并且同此種疾病的形成、發(fā)展以及轉(zhuǎn)歸均聯(lián)系緊密[16～18]。Nakamura等人也報(bào)道證實(shí)，IL-9可誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)的中性粒細(xì)胞形成并釋放IL-8，進(jìn)而招募到更多數(shù)目的有關(guān)中性粒細(xì)胞，并參與到中性粒細(xì)胞誘發(fā)的炎性反應(yīng)[19，20]。

綜上所述，急性期KD患兒外周血中Th9細(xì)胞與IL-9水平明顯升高，且與機(jī)體的炎癥因子及高凝指標(biāo)之間聯(lián)系緊密，臨床上可考慮通過(guò)監(jiān)測(cè)Th9細(xì)胞及IL-9更好地評(píng)價(jià)KD患兒的病情癥狀，從而有助于臨床診治過(guò)程。需要指出的是，本次研究過(guò)程當(dāng)中也具有一定的局限性以及不足之處，比如研究時(shí)限較短，樣本量相對(duì)較少，同時(shí)未與其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展協(xié)同性的綜合性研究，這可能會(huì)影響結(jié)果的科學(xué)性及準(zhǔn)確性，今后可考慮從此方面著手，通過(guò)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，延長(zhǎng)研究時(shí)間，并邀請(qǐng)其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)共同開(kāi)展研究，從而獲得更具代表性和科學(xué)性的研究結(jié)論。