范文才,杜麗娟,施 欽,郭金博,殷云龍,華建峰
(1. 江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所,江蘇 南京 210014;2. 上海上實(shí)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司,上海 200040)
江蘇省海岸線長(zhǎng)954 km,未圍墾灘涂地總面積5 001. 67 km2,占全國(guó)的28%,土壤以沙壤為主,鹽分含量高,土地鹽漬化現(xiàn)象較為嚴(yán)重[1]。而由于近年的圍墾開(kāi)發(fā),濱海地區(qū)鹽漬化及次生鹽漬化面積更是急劇擴(kuò)大[2],已然成為影響生態(tài)環(huán)境的嚴(yán)重問(wèn)題,同時(shí)也是制約濱海地區(qū)植物生長(zhǎng)的主要環(huán)境因素。鹽生及耐鹽植物的篩選和利用對(duì)于濱海鹽堿地的生態(tài)修復(fù)具有重要意義[3],已經(jīng)成為改善濱海地區(qū)土地鹽漬化的重要途徑[4]。
近年來(lái),關(guān)于綠化植物耐鹽性方面的研究表明,灌木由于其抗逆性強(qiáng)和根系較淺的特點(diǎn),是濱海鹽堿地快速綠化的理想植物材料[5]。王娟等[6]選擇了6種常用綠化灌木,通過(guò)快相葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)觀測(cè)其葉片光系統(tǒng)Ⅱ(PSⅡ)對(duì)NaCl脅迫的快速響應(yīng)特性,篩選出金銀忍冬Loniceramaackii、茶條槭Acer ginnala和白丁香Syringa oblate3個(gè)耐鹽灌木樹(shù)種。劉昊華等[7]通過(guò)對(duì)3種濱海造林灌木樹(shù)種受NaCl脅迫后葉綠素和脯氨酸等生理指標(biāo)的觀察分析,用隸屬函數(shù)法評(píng)價(jià)3個(gè)供試樹(shù)種耐鹽性,由強(qiáng)到弱排序?yàn)椋簷f柳Tamarix chinensis、耐旱桑Morus alba‘Naihan’、果桑Morus alba‘Guo’。華建峰等[8]對(duì)江蘇省沿海地區(qū)24種灌木與喬木進(jìn)行耐鹽性評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)灌木耐鹽性普遍強(qiáng)于喬木,其中,海桐Pittosporum tobira、海濱木槿Hibiscus hamabo和匍地柏Sabina procumbens具有極強(qiáng)的耐鹽性。此外,對(duì)檉柳和白刺N(yùn)itraria tangutorum等灌木耐鹽機(jī)理的研究表明,鹽脅迫下凈光合速率、蒸騰速率等光合作用參數(shù)的變化和離子區(qū)域分布的調(diào)控能力是影響其耐鹽性的重要因素,供試樹(shù)種的凈光合速率、蒸騰速率和氣孔導(dǎo)度降低以響應(yīng)鹽脅迫,并通過(guò)莖髓部細(xì)胞內(nèi)的液泡對(duì)Na+和Cl+產(chǎn)生區(qū)隔作用從而調(diào)控離子的區(qū)域分布以減輕鹽脅迫對(duì)細(xì)胞造成的損害[9-10]。然而,目前單鹽(NaCl)脅迫是對(duì)植物耐鹽性生理研究的常規(guī)方法[11-13],而濱海鹽漬土中的鹽分多以混合鹽的形式存在[14],單鹽脅迫無(wú)法反映土壤中鹽分組成的實(shí)際情況,并會(huì)對(duì)植物耐鹽性實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生一定影響。
基于江蘇省濱海地區(qū)的環(huán)境特點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)配置了混合鹽溶液,選取法青、海桐和海濱木槿3種常見(jiàn)灌木樹(shù)種作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究其Na+、K+的含量及分配以及凈光合速率、蒸騰速率等光合指標(biāo)的響應(yīng),初步探明其耐鹽機(jī)理,以期為江蘇濱海鹽堿地耐鹽灌木材料的引種及選育提供科學(xué)依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)材料為兩年生法青、海桐和海濱木槿,苗木由江蘇宿遷綠楊園藝公司提供。2011年3月中旬將種苗移栽至塑料花盆中(盆高40 cm,上、下直徑分別為30 cm和25 cm),每盆1株,盆底置塑料盤。栽培基質(zhì)為黃土、泥炭土和珍珠巖(體積比為5∶2∶1),每盆裝基質(zhì)5.5 kg。苗木在室外培養(yǎng)2個(gè)月后,于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始兩周前移入溫室內(nèi)緩苗。
實(shí)驗(yàn)于2011年6月中旬在江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所(35°50′ N,118°49′ E)溫室內(nèi)進(jìn)行。混合鹽溶液的配比模擬江蘇省南通市如東縣濱海地區(qū)鹽漬土的離子組成及含量,設(shè)置3.0、5.0、8.0 g·kg-13 個(gè)鹽濃度水平為處理組及 0 g·kg-1為CK組,混合鹽溶液的鹽分組成及含量見(jiàn)表1。處理組逐次加入復(fù)合鹽溶液,3.0 g·kg-1加鹽一次,5.0 g·kg-1處理組分兩次加入,8.0 g·kg-1分 3 次,前后加鹽每次間隔2 d,使其鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別達(dá)到相應(yīng)水平。實(shí)驗(yàn)期間定期澆水,澆水后將塑料盤中的滲出溶液重新倒入盆中,以保持各處理鹽分含量,避免水分及鹽分的流失。CK組及處理組的每種鹽濃度水平均分別設(shè)置7個(gè)重復(fù),隨機(jī)排列。鹽脅迫周期為45 d。各處理鹽分組成見(jiàn)表1。
表 1 各處理的鹽分組成Table 1 Salt composition of the treatments
1.3.1葉綠素(Chl)含量的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取CK組及各處理組功能葉片,擦凈后用95%乙醇避光浸提樣品24 h。取適量提取液分別在波長(zhǎng)665 nm、649 nm 和470 nm 下測(cè)定吸光度,以95%乙醇作為空白對(duì)照。按照常規(guī)公式計(jì)算Chla和Chlb含量(mg/L),并計(jì)算總?cè)~綠素含量(Chl T)=Chl a + Chl b[15]。
1.3.2Na+和K+含量的測(cè)定
取CK組及各處理組的根莖葉,烘干至恒質(zhì)量后粉碎,精確稱取0.75 g于50 mL規(guī)格的錐形瓶中,加入15 mL HNO3,搖勻后封口放置過(guò)夜。滴入10滴HClO4后蓋上曲頸漏斗,于消煮爐上消煮 100 min(200 ℃ 40 min,300 ℃ 60 min),冷卻后將消煮液定容至25 mL,樣品消煮同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)以校正方法及試劑上的誤差,取10 mL定容后的消煮液定容至50 mL,于火焰光度計(jì)上測(cè)定Na+、K+。并按相同程序制備Na+、K+標(biāo)準(zhǔn)曲線[16]。
Na+(或 K+)質(zhì)量分?jǐn)?shù) (%)=X·V·ts·10-4/m。 (1)式(1)中,X為標(biāo)準(zhǔn)方程求得顯色液Na+(或K+)的質(zhì)量濃度(μg·mL-1),V為顯色液體積(mL);ts為分取倍數(shù);m為干樣質(zhì)量(g)。
1.3.3光合系統(tǒng)參數(shù)的測(cè)定
采用美國(guó)LI-COR公司所產(chǎn)的Li-6400便攜式光合測(cè)定儀,測(cè)定鹽脅迫下3種灌木葉片的光合系統(tǒng)參數(shù)。測(cè)定時(shí)間段為鹽脅迫處理的第43 d的9:00至11:00,使用光合測(cè)定儀內(nèi)置LED紅藍(lán)光源,由其內(nèi)置小鋼瓶提供恒定CO2(350~450 ul·L-1),濕度控制在60%~70%。每種苗木的每種處理均隨機(jī)選取4株,并隨機(jī)選取其中、上部分完全展開(kāi)的健康葉片3到4片進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。給定光通量密度 600 μmol·m-2s-1,停留 2 ~ 3 min 左右讀數(shù),每次測(cè)定時(shí)連續(xù)記錄6~8個(gè)穩(wěn)定數(shù)據(jù)。測(cè)定指標(biāo)包括凈光合速率(Pn)、氣孔導(dǎo)度(Gs)、蒸騰速率(Tr)和胞間CO2濃度(Ci),水分利用效率(WUE)為Pn和Tr的比值。
采用OriginPro 9.1制圖,SPSS 19.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析,采用新復(fù)極差法(Duncan)檢驗(yàn)各數(shù)據(jù)組間的差異顯著性,P<0.05時(shí)為差異顯著。
2.1.1供試樹(shù)種Na+的含量及分配
隨著混合鹽脅迫濃度的增加,3個(gè)供試樹(shù)種根中的Na+含量逐漸增加,且與CK均存在顯著差異(P<0.05)(如圖1)。鹽濃度為8.0 g·kg-1時(shí),法青、海桐和海濱木槿分別比CK增加了240%、69.67%和239%。
圖1 不同濃度混合鹽脅迫對(duì)3種灌木根莖葉中Na+含量的影響Fig. 1 Effects of mixed salinity stress on the Na+content in roots, stems and leaves of three different shrubs
法青莖中Na+含量隨混合鹽濃度的增加而顯著升高(P<0.05),且在混合鹽濃度為8.0 g·kg-1時(shí)含量最高,增加了690%。而海桐和海濱木槿莖中Na+含量在中、低鹽濃度(鹽含量<5.0 g·kg-1)下與CK差異不顯著,鹽濃度為8.0 g·kg-1時(shí)莖中的Na+含量顯著高于CK(P<0.05),分別增加了106%和48.79%。
混合鹽脅迫下法青葉片中的Na+含量在各個(gè)鹽濃度處理下均顯著高于CK(P<0.05),與鹽濃度呈明顯的正相關(guān)。海桐和海濱木槿Na+含量在3.0 g·kg-1時(shí)與CK差異不顯著,5.0 g·kg-1及8.0 g·kg-1時(shí)顯著性高于CK(P<0.05)。
總體來(lái)說(shuō),從不同營(yíng)養(yǎng)器官來(lái)看,在未受到混合鹽脅迫條件下,3種供試樹(shù)種各器官中Na+的分布趨勢(shì)均為:莖、葉差異較小,根中含量較高;而在3.0 g·kg-1~8.0 g·kg-1混合鹽脅迫條件下,各樹(shù)種根中Na+含量上升速率均高于莖和葉,莖葉種間差異較大,Na+含量基本為根>莖>葉。
2.1.2供試樹(shù)種K+的含量及分配
與CK相比,混合鹽脅迫各處理下,法青、海桐和海濱木槿根中K+含量無(wú)顯著差異?;旌消}脅迫后3種灌木莖中K+含量隨混合鹽脅迫的增強(qiáng)呈先增大后降低的趨勢(shì)。其中,海桐和海濱木槿的K+含量均在混合鹽濃度為3.0 g·kg-1時(shí)達(dá)到最高,分別是CK的1.61倍和1.26倍(P<0.05)。法青莖中K+含量則在鹽濃度為5.0 g·kg-1時(shí)達(dá)到最大,為CK的1.16倍。當(dāng)混合鹽濃度達(dá)8.0 g·kg-1時(shí),法青莖中K+含量顯著低于CK(P<0.05),海桐和海濱木槿K+含量略低于CK,但與CK差異不顯著(如圖2)。
圖2 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)混合鹽脅迫對(duì)3種灌木根莖葉中K+含量的影響Fig.2 Effects of mixed salinity stress on the K+content in roots, stems and leaves of three different shrubs
混合鹽脅迫下,各樹(shù)種葉中K+含量變化差異較大。3種灌木的葉片K+含量則呈先增大后減小的變化趨勢(shì)。法青和海桐葉中K+含量在混合鹽濃度為3.0 g·kg-1時(shí)達(dá)到最大,但與CK差異不顯著,鹽濃度升高到5.0和8.0 g·kg-1時(shí),葉中K+含量顯著低于CK(P<0.05)。各個(gè)混合鹽處理下海濱木槿葉中K+含量均顯著高于CK(P<0.05),但各個(gè)處理間差異不顯著。
總的來(lái)說(shuō),混合鹽脅迫使各供試樹(shù)種的K+含量下降,種間及各部位差異較大。在未受到鹽脅迫情況下,3種供試樹(shù)種各器官中K+的分布趨勢(shì)均為:葉>根>莖。試驗(yàn)表明根系因最早與外界鹽離子接觸,因而其對(duì)K+的吸收作用在較低濃度下(3.0 g·kg-1)即被抑制,而莖、葉對(duì)K+的吸收隨混合鹽濃度的升高而降低。3種灌木地上部分在混合鹽脅迫下積累的K+均較高,證明灌木抗逆性較強(qiáng),且海濱木槿地上部分積累的K+最多,推測(cè)是其耐鹽性較好的主要原因。
2.1.3混合鹽脅迫對(duì)供試樹(shù)種K+/Na+的影響
3個(gè)樹(shù)種根中的K+/Na+均與鹽脅迫濃度呈負(fù)相關(guān),即隨混合鹽濃度的升高而下降。而各樹(shù)種莖中的K+/Na+變化情況有所差異,法青莖中的K+/Na+隨混合鹽濃度的提高而逐漸降低,而海桐和海濱木槿莖中K+/Na+在3.0 g·kg-1混合鹽脅迫下有所增大,分別在混合鹽濃度為5.0 g·kg-1和8.0 g·kg-1時(shí)降低至CK以下。3個(gè)供試樹(shù)種葉片中的K+/Na+均隨混合鹽脅迫濃度的增大而減小,與鹽脅迫濃度呈明顯的負(fù)相關(guān)。
總體來(lái)說(shuō),在未受到鹽脅迫下,各樹(shù)種體內(nèi)保持著較高的K+/Na+,尤其是莖、葉部分。從同一植物的不同營(yíng)養(yǎng)器官來(lái)看,法青、海桐和海濱木槿的K+/Na+均為:葉>莖>根。3個(gè)樹(shù)種相比,在相同鹽脅迫條件下,海濱木槿、海桐的根、莖、葉均具有更高的K+/Na+比(見(jiàn)表2)。
表 2 混合鹽脅迫對(duì)各樹(shù)種根莖葉中K+/Na+的影響?Table 2 Effects of mixed salinity stress on the K+/Na+ratio in roots, stems and leaves of three different shrubs
3.0 g·kg-1和 5.0 g·kg-1混合鹽脅迫下,3 種灌木的葉綠素含量與CK相比變化不大?;旌消}濃度為8.0 g·kg-1時(shí),法青的葉綠素含量顯著下降,降幅為CK的47.26%,海桐和海濱木槿葉綠素含量無(wú)明顯降幅(見(jiàn)圖3)。
圖3 混合鹽脅迫對(duì)3個(gè)灌木樹(shù)種葉片葉綠素含量的影響Fig. 3 Effect of mixed salinity stress on leaf chlorophyll content of three different shrubs
混合鹽脅迫使3種灌木的Pn下降,且各鹽脅迫處理下的Pn都顯著低于CK(P<0.05)。3個(gè)樹(shù)種中法青的Pn變化最為劇烈。混合鹽脅迫濃度為3.0 g·kg-1時(shí),法青的Pn降幅最大,為41.98%。海桐的Pn從5.0 g·kg-1混合鹽脅迫處理開(kāi)始迅速下降,降幅為CK的51.77%。海濱木槿Pn變化最為平緩,在8.0 g·kg-1混合鹽處理下光合速率仍能保持在較高水平。
隨著混合鹽濃度的增大,3種灌木的Gs和Tr逐漸減小,趨勢(shì)較為一致,鹽脅迫濃度越高,Gs和Tr受抑制越嚴(yán)重?;旌消}脅迫濃度在3.0 g·kg-1時(shí),法青的Gs和Tr變化比較劇烈,與CK相比,分別下降了71.17%和62.80%,而海桐的Gs和Tr分別下降了38.57%和41.19%,海濱木槿的Gs和Tr分別下降了53.82%和40.70%。5.0 g·kg-1濃度混合鹽脅迫下,3種灌木的Gs降幅都很劇烈,法青、海桐和海濱木槿的Gs分別下降了92.20%、81.46%和85.52%,Tr分別下降了88.88%、79.29%和70.72%。方差分析顯示,3種灌木的Gs和Tr在各種鹽處理下與CK存在顯著差異(P<0.05),而在中、高鹽脅迫下(≥5.0 g·kg-1)Gs和Tr差異不顯著(見(jiàn)圖4)。
相較于上述光合參數(shù),3種灌木在受到鹽脅迫后的Ci變化趨勢(shì)較為緩和。法青的Ci隨著鹽濃度的上升呈先下降后上升趨勢(shì),鹽濃度為3.0 g·kg-1時(shí)Ci最低,降幅為CK的16.39%。海桐在鹽濃度為5.0 g·kg-1時(shí),Ci出現(xiàn)較大降幅,為CK的21.42%。海濱木槿的Ci受鹽脅迫影響較小,5.0 g·kg-1鹽脅迫時(shí),降幅最大,僅為CK的8.40%。3種灌木受鹽脅迫后均能維持較高的WUE。法青在鹽濃度升高后,WUE呈先上升后下降的趨勢(shì),于鹽濃度為3.0 g·kg-1時(shí),WUE達(dá)到最高,為CK的144.06%。海桐隨著鹽脅迫的加重,WUE呈上升趨勢(shì),在鹽濃度達(dá)到5.0 g·kg-1時(shí)上升較為明顯,為CK的272.37%。海濱木槿在各鹽濃度下,WUE差異不明顯,較為穩(wěn)定。
圖4 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)混合鹽脅迫對(duì)3種灌木光合特性的影響Fig. 4 Effects of mixed salinity stress on the photosynthetic characteristics of three different shrubs
鹽脅迫對(duì)植物的損害往往是通過(guò)離子毒害及滲透脅迫的方式產(chǎn)生作用[17]。正常生理狀態(tài)下,植物細(xì)胞內(nèi)各離子維持在穩(wěn)定水平。受鹽脅迫后,Na+含量上升,而過(guò)多的Na+會(huì)使代謝過(guò)程中的酶形成無(wú)活性蛋白從而對(duì)植物產(chǎn)生危害[18]。大多植物對(duì)Na+和K+的吸收具有拮抗作用,即Na+的上升一般伴隨著K+的下降,而K+是植物生長(zhǎng)發(fā)育中必須的營(yíng)養(yǎng)元素,同時(shí)對(duì)于植物具有重要生理作用,是保證植物維持正常代謝的關(guān)鍵離子,因而植物在受鹽脅迫后,能否維持較高水平的K+/Na+是判斷其耐鹽能力的重要標(biāo)準(zhǔn)[19]。楊升等[20]以K+/Na+作為重要生理指標(biāo)之一科學(xué)合理的評(píng)價(jià)了衛(wèi)矛Euonymus alantus、 沙 棗Elaeagnus angustifolia和美國(guó)白蠟Fraxinus Americana3 個(gè)樹(shù)種的耐鹽能力。莫海波等[21]對(duì)4種豆科植物的研究發(fā)現(xiàn),受鹽脅迫后,表現(xiàn)出較高K+/Na+、地上部分Na+含量較低的刺槐Robinia pseudoacacia具有更好的耐鹽性。法青、海桐和海濱木槿在受混合鹽脅迫后,Na+大量進(jìn)入植物體內(nèi),各樹(shù)種由于其根部具有較強(qiáng)的Na+的滯留能力,積累的Na+比莖、葉部分更多,使其地上部分Na+含量能夠維持在相對(duì)較低水平以適應(yīng)鹽脅迫。相同鹽脅迫條件下,海濱木槿和海桐的根、莖、葉相較于法青均具有更高的K+/Na+,推測(cè)3種灌木中,海濱木槿和海桐具有更好的耐鹽性,這與華建峰等[8]研究結(jié)果相一致。
葉綠素含量不僅可以直觀反映植物光合作用的能力,也是植物耐鹽性能力評(píng)價(jià)的一個(gè)重要生理指標(biāo)[22-23]?;旌消}脅迫下,當(dāng)鹽濃度為3.0 g·kg-1時(shí),3種灌木葉綠素含量變化不明顯,當(dāng)鹽濃度繼續(xù)增加后,海濱木槿葉綠素含量有上升趨勢(shì)并在鹽濃度達(dá)到8.0 g·kg-1后又輕微下降,海桐葉綠素含量整體呈下降趨勢(shì)但不明顯,法青葉綠素含量降幅較大。總體來(lái)看,海桐和海濱木槿在承受高濃度混合鹽脅迫時(shí)葉綠素含量相較于正常水平均無(wú)明顯變化,表明其對(duì)鹽脅迫有較強(qiáng)的適應(yīng)性,這與前人研究相一致[8,24]。王超宇等[25]發(fā)現(xiàn)在4.0和8.0 g/kg鹽脅迫下,3種耐鹽性較強(qiáng)的木本濱藜Atriplex gardneri,Atriplex tridentate,Atriplex canescens的葉綠素合成幾乎沒(méi)有受到影響。此外,葉綠素作為植物進(jìn)行光合作用的主要色素,其含量高低與植物的凈光合速率有密切關(guān)系。劉振威等[26]通過(guò)對(duì)幾個(gè)品種南瓜葉片的葉綠素含量及凈光合速率進(jìn)行比較,證明在環(huán)境條件一致的情況下,葉綠素含量與凈光合速率變化呈正相關(guān)。Pn是植物總光合速率與呼吸作用速率的差值,代表植物有機(jī)物累積速率[27],可作為衡量植物光合系統(tǒng)工作情況的指標(biāo)[28]。本實(shí)驗(yàn)中,混合鹽脅迫抑制了3種灌木的Pn,并且隨著鹽濃度的升高,3種灌木的Pn所受影響也越為嚴(yán)重。Farqugar[29]等認(rèn)為,伴隨著Gs和Ci降低的Pn降低一般由氣孔限制所導(dǎo)致。與CK相比,除3.0 g·kg-1鹽脅迫下海桐的Ci略高于CK但差異不明顯外,各濃度鹽脅迫下,3種灌木的Ci均有所下降,3種灌木的Gs在各鹽濃度脅迫下均顯著下降,表明氣孔限制是混合鹽脅迫下3種灌木Pn下降的原因之一,但其具體調(diào)控機(jī)理還有待深入研究。3種灌木的WUE在鹽濃度為3.0 g·kg-1時(shí)均有所上升,可能是由于氣孔收縮,Gs和Tr降低,從而減少了其水分的散失[30]。當(dāng)鹽濃度達(dá)到8.0 g·kg-1時(shí),海桐的WUE持續(xù)上升,海濱木槿較為穩(wěn)定,表明海桐和海濱木槿在鹽脅迫下對(duì)水分具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用,而法青與低濃度鹽脅迫時(shí)相比,WUE有所下降,推測(cè)其耐鹽性相比海桐和海濱木槿較弱,在高濃度鹽脅迫時(shí),耐鹽機(jī)制受到一定破壞。
綜上研究分析,法青、海桐及海濱木槿在受混合鹽脅迫后會(huì)有不同程度的生理響應(yīng)。通過(guò)對(duì)這3種灌木受鹽脅迫后葉綠素含量、K+/Na+及光合作用參數(shù)等重要指標(biāo)的分析發(fā)現(xiàn),法青在3.0 g·kg-1混合鹽脅迫時(shí),具有一定的耐鹽性,而在鹽濃度更高的情況下,海桐和海濱木槿表現(xiàn)出對(duì)鹽脅迫更好的適應(yīng)性??梢?jiàn),海桐及海濱木槿可在沿海綠化中發(fā)揮更重要的作用,應(yīng)用前景廣闊。但由于本實(shí)驗(yàn)是在溫室內(nèi)展開(kāi),受土壤結(jié)構(gòu)、植物生長(zhǎng)階段和氣候差異等因素影響,具有一定局限性,若考慮將海濱木槿和海桐作為沿海防護(hù)林樹(shù)種,還需進(jìn)行田間實(shí)驗(yàn)以開(kāi)展進(jìn)一步研究。