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浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 浙江 杭州 310053

桃仁為薔薇科植物桃或山桃的種子，具有活血祛瘀和潤(rùn)腸通便之功效［1］?，F(xiàn)代研究亦表明，桃仁具有抗凝血、抗菌、活血化瘀等作用，臨床上可用于治療痛經(jīng)、血滯經(jīng)閉、瘀血腫痛、腸燥便秘等多種疾病?！夺t(yī)學(xué)啟源》記載桃仁“治大便血結(jié)”，桃仁既能潤(rùn)腸通便，又善于活血化瘀?！督饏T要略》下瘀血湯中用桃仁以活血潤(rùn)燥［2］?！妒泪t(yī)得效方》采用五仁丸（包括桃仁、杏仁等組成）治療津枯便秘以及由桃仁、杏仁組成的民間治便秘驗(yàn)方。桃仁具有通滯開(kāi)結(jié)功效，宜用于瘀熱內(nèi)結(jié)或氣滯血瘀之便秘，其性質(zhì)平和，為習(xí)慣性便秘之良藥，提示桃仁對(duì)胃腸平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)可能有興奮作用［3］。關(guān)于桃仁的組成成分及藥理作用已經(jīng)得到很多闡明，但是，桃仁是否影響小腸收縮運(yùn)動(dòng)以及收縮幅度，未見(jiàn)報(bào)道。本文以家兔離體小腸為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探索桃仁提取物對(duì)家兔離體小腸收縮運(yùn)動(dòng)的影響，以便探索其初步機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康家兔4只（購(gòu)買于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心），實(shí)驗(yàn)前禁食12h。

1.2 主要儀器設(shè)備：RM6240生物信息采集處理系統(tǒng)、HSS-1（B）型恒溫水浴槽、麥?zhǔn)喜劬鶠槌啥純x器廠生產(chǎn)；50521張力換能器由北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑：臺(tái)氏液：氯化鈉8mg/ml、氯化鉀0.2mg/ml、氯化鈣0.2mg/ml、氯化鎂0.1mg/ml、碳酸氫鈉1mg/ml、磷酸二氫鈉0.05mg/ml、葡萄糖1mg/ml，pH8；硫酸阿托品注射液（批號(hào)：H12020384，天津金耀藥業(yè)有限公司）；乙酰膽堿。

1.4 桃仁及水提取液制備：稱取新鮮桃仁100g，粉碎為粗末，直徑約為2mm，加水1000ml，浸泡30min，煮沸1h，過(guò)濾后濾渣加水500ml，煎煮30min，過(guò)濾。合并濾液，濃縮至200ml備用。桃仁水提取液的濃度為0.5g/ml，4℃冰箱留存?zhèn)溆谩?shí)驗(yàn)時(shí)加入臺(tái)氏液配成所需工作液濃度。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法與步驟：分述如下。

1.5.1 家兔離體腸肌的制備：取健康家兔，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，采用20%氨基甲酸乙酯,以5ml/kg劑量麻醉家兔，立即打開(kāi)腹腔并采取十二指腸空腸腸段，迅速置入盛有氧飽和臺(tái)氏液的培養(yǎng)皿中，清洗腸內(nèi)容物，剪去腸系膜，腸管剪成2～3cm的小段，兩端各穿一線并打結(jié)備用。在麥?zhǔn)显〔壑?，加?7℃臺(tái)氏液。連接好加氧泵以及通氣玻鉤并供氧，每秒鐘1～2個(gè)氣泡。水浴溫度37±0.5℃。

1.5.2 離體小腸收縮運(yùn)動(dòng)的記錄：待腸段運(yùn)動(dòng)穩(wěn)定后，用RM6240生物信息采集處理系統(tǒng)、及張力換能器記錄腸肌收縮運(yùn)動(dòng)，觀察桃仁水提取液對(duì)離體小腸收縮運(yùn)動(dòng)，以及觀察在乙酰膽堿、阿托品作用下桃仁水提取液對(duì)家兔離體小腸收縮運(yùn)動(dòng)的影響。設(shè)立正常腸段組（正常組）、桃仁水提取液組、乙酰膽堿+桃仁水提取液組、阿托品+桃仁水提取液組。

1.6 數(shù)據(jù)處理：以正常臺(tái)式液中穩(wěn)定的腸段收縮平均振幅為100%，其余各組數(shù)據(jù)以與其相比所得相對(duì)值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用SPSS17.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 桃仁水提取液對(duì)家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)收縮振幅的影響：在正常臺(tái)氏液中，小腸收縮運(yùn)動(dòng)相對(duì)穩(wěn)定，平均收縮張力為0.077±0.003g，收縮振幅為100%。加入0.5g/ml濃度的桃仁水提取液3ml、5ml、7ml（終濃度分別為0.075g/ml、0.125g/ml、0.175g/ml）后，家兔小腸收縮張力由正常對(duì)照的0.077±0.003g分別增強(qiáng)到0.082±0.002g（P＞0.05）、0.112±0.002g(P＜0.01)、0.124±0.002g(P＜0.01)，家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的振幅分別增強(qiáng)至(108±0.2)%、（146±0.2）%、（162±0.2）%。即桃仁水提取液對(duì)家兔離體小腸收縮運(yùn)動(dòng)具有明顯促進(jìn)作用，且桃仁水提取液呈濃度依賴性增強(qiáng)家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)（詳見(jiàn)圖1、表1）。

2.2 乙酰膽堿作用下桃仁水提液對(duì)家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的影響：在正常臺(tái)氏液條件下，待小腸收縮運(yùn)動(dòng)平穩(wěn)后，加入0.01g/L終濃度的乙酰膽堿溶液，可見(jiàn)小腸收縮運(yùn)動(dòng)的振幅明顯增大，促進(jìn)小腸收縮運(yùn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)，收縮力由0.077±0.003g升至0.293±0.037g（n=4,P＜0.05）,家兔小腸收縮振幅由100%增加至(380.2±3.7)%。在此基礎(chǔ)上加入0.5g/ml的桃仁水提取液5ml后，小腸收縮運(yùn)動(dòng)的振幅明顯減小，收縮力減弱，收縮力由0.293±0.037g降至0.077±0.002g（n=4，P＜0.05），小腸收縮運(yùn)動(dòng)的振幅降至(100±0.2)%，明顯抑制小腸收縮運(yùn)動(dòng)。該結(jié)果提示桃仁水提取液對(duì)乙酰膽堿具有顯著拮抗作用（詳見(jiàn)圖2、表1）。

2.3 阿托品作用下桃仁水提液對(duì)家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的影響：在正常臺(tái)氏液條件下，家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)平穩(wěn)后，加入0.5mg/ml終濃度的阿托品，家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的振幅明顯減小，收縮力減弱，收縮力由正常對(duì)照0.077±0.003g降低到0.053±0.005g（n=4,P＜0.01），小腸收縮運(yùn)動(dòng)的振幅由100%減弱至(69±0.5)%。在此基礎(chǔ)上加入0.5g/ml濃度的桃仁水提取液5ml后，家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的振幅有回升，腸道收縮運(yùn)動(dòng)明顯增強(qiáng)，收縮力由0.053±0.005g增強(qiáng)至0.092±0.007g（n=4,P＜0.01）。小腸收縮運(yùn)動(dòng)有一定恢復(fù)，收縮的振幅提高至（119±0.7）%。表明桃仁水提取液對(duì)阿托品具有顯著拮抗作用（詳見(jiàn)圖3、表1）。

圖1 不同濃度桃仁水提取液對(duì)家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的影響

表1 乙酰膽堿、阿托品、桃仁水提取液對(duì)家兔離體小腸收縮運(yùn)動(dòng)的影響

圖2 乙酰膽堿和桃仁水提取液作用下小腸收縮運(yùn)動(dòng)收縮情況

圖3 阿托品和桃仁水提取液作用下家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)情況

3 討論

桃仁是臨床常用活血化瘀的重要中藥，能夠明顯增加腦血流量，降低腦血管阻力并改善血流動(dòng)力學(xué)，近年來(lái)多用于治療心腦血管疾病。這種重要性可能與其不飽和脂肪酸的組成，亞油酸和油酸的含量有關(guān)［4］。它的主要化學(xué)成分為脂肪油類、苷類、氨基酸和蛋白質(zhì)、揮發(fā)油、甾體和黃酮及其糖苷類化合物［5］?，F(xiàn)代藥理研究側(cè)重于分析桃仁的活血化瘀的功效，尚未發(fā)現(xiàn)桃仁提取物可以刺激腸壁增加蠕動(dòng)而促進(jìn)排便的現(xiàn)象［5］。有報(bào)告含有桃仁配方的血府逐瘀湯治療膽汁反流性胃炎，獲得高于西藥治療的總有效率［6］。桃仁富含45%的脂肪油，能提高腸內(nèi)容物粘膜的潤(rùn)滑性，且具有改善血流阻滯、血行障礙等作用，一直是臨床治療便秘的常用藥物［1］，但是，目前有關(guān)桃仁對(duì)胃腸作用的研究甚少。

與大腦、心臟或骨骼肌電信號(hào)相比，小腸收縮運(yùn)動(dòng)的電信號(hào)具有明顯較低的頻率［7］。因此，消化道收縮運(yùn)動(dòng)興奮性較低，慢波信號(hào)良好，具有自動(dòng)節(jié)律性收縮的特性，給予離體小腸合適的生存環(huán)境，就可以保持其消化道收縮運(yùn)動(dòng)的良好生理特性。這是由于家兔離體腸肌雖已失去外來(lái)神經(jīng)的支配，但是壁內(nèi)神經(jīng)叢仍存在，在適宜的條件下，仍能保持收縮運(yùn)動(dòng)的特性及腸壁神經(jīng)叢的作用［8］。小腸的節(jié)律性活動(dòng)是受小腸的基本電節(jié)律（即慢波電位）所控制，易受離子環(huán)境、神經(jīng)遞質(zhì)和激素等生物活性物質(zhì)的影響［9］。本研究結(jié)果表明，桃仁對(duì)家兔離體小腸收縮運(yùn)動(dòng)具有顯著的加強(qiáng)作用。

乙酰膽堿是膽堿能神經(jīng)末梢釋放的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，主要通過(guò)突觸后膜煙堿型受體和毒蕈堿型受體發(fā)揮其生理作用，其中廣泛分布于胃腸平滑肌，并對(duì)小腸具有調(diào)控作用的為M膽堿能受體[10]。因此，可明顯興奮胃腸道收縮運(yùn)動(dòng)，使小腸收縮幅度、張力、蠕動(dòng)增加，具有重要的胃腸道運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)功能。乙酰膽堿激動(dòng)胃腸平滑肌上的M受體，通過(guò)cAMP作為第二信使的細(xì)胞膜信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流，興奮小腸平滑肌并產(chǎn)生強(qiáng)烈的收縮運(yùn)動(dòng)［11］。阿托品為M受體阻斷劑，競(jìng)爭(zhēng)性拮抗乙酰膽堿或膽堿能受體激動(dòng)藥對(duì)M受體激動(dòng)作用，表現(xiàn)出與劑量相關(guān)的抑制腺體分泌、松弛平滑肌、加快心率及升高血壓等作用，因此，導(dǎo)致小腸收縮運(yùn)動(dòng)的收縮振幅減小。本研究結(jié)果表明，桃仁能夠拮抗乙酰膽堿對(duì)家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的興奮作用，同時(shí)又能夠拮抗阿托品引起的家兔小腸收縮運(yùn)動(dòng)的抑制作用。因此，筆者認(rèn)為結(jié)果提示桃仁對(duì)興奮作用下的小腸收縮運(yùn)動(dòng)和抑制作用下的小腸收縮運(yùn)動(dòng)可能具有雙向作用。但是，桃仁對(duì)家兔小腸的具體作用機(jī)制尚不明確，亟待進(jìn)一步闡明。

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