梁秀清+沈曉+李子鴻+李懷國++劉東文+王利勝

[摘要] 目的 比較大鼠灌胃山楂消脂膠囊超微粉和細粉后大黃酸的藥代動力學特征差異。 方法 大鼠分別灌胃給予超微粉混懸液或細粉混懸液，用高效液相色譜法測定大黃酸的血藥濃度變化。色譜柱為Uranus C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15），流速為1 mL/min，檢測波長為254 nm，血藥濃度-時間數(shù)據(jù)采用PKSolver2.0藥代動力學軟件進行分析。 結果 大黃酸血藥濃度在0.16～40.00 μg/mL線性關系良好。大鼠灌胃給予山楂消脂膠囊超微粉混懸液及細粉混懸液后大黃酸血漿-時間曲線均符合二房室模型，山楂消脂膠囊超微粉及山楂消脂膠囊細粉的主要藥動學參數(shù)AUC分別為（4.08±4.96）μg/（mL·h）和（0.74±0.06）μg/（mL·h）（P < 0.05），藥峰濃度（Cmax）分別為（0.79±0.15）μg/mL和（0.17±0.02）μg/mL（P < 0.05）。 結論 超微粉碎能使大黃酸在大鼠體內(nèi)的吸收更完全，提高生物利用度。

[關鍵詞] 山楂消脂膠囊；超微粉；細粉；大黃酸；藥代動力學

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）11（a）-0027-04

Pharmacokinetic study of rhein from the ultra-micro and fine powder of Shanzha Xiaozhi Capsules in rats

LIANG Xiuqing1 SHEN Xiao2 LI Zihong1 LI Huaiguo1 LIU Dongwen1 WANG Lisheng2

1.Preparation Center， Foshan Hospital of TCM， Guangdong Province， Foshan 528000， China； 2.College of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangdong Province， Guangzhou 510006， China

[Abstract] Objective To compare the differences of pharmacokinetic characteristics of rhein after rats received ultra-micro and fine powder of Shanzha Xiaozhi Capsules by gavage. Methods The experimental rats were given suspensions of the ultra-micro and fine powder of Shanzha Xiaozhi Capsules. The plasma concentration of rhein in rats was measured by high performance liquid chromatography. Uranus C18 （250 mm× 4.6 mm， 5 μm） was used as the analytical column. The mobile phase was methanol-water-0.1% phosphoric acid （85∶15）， the wavelength of detection was set at 254 nm， and the flow rate was 1.0 mL/min. Serum concentration-time data was processed by pharmacokinetics software PKSolver 2.0. Results The linear range of rhein was from 0.16 to 40.00 μg/mL. The concentration-time curves of rhein in rats fitted well into two compartment model. The main pharmacokinetic parameters of the AUC of rhein from the ultra-micro and fine powder of Shanzha Xiaozhi Capsules were （4.08±4.96） μg/（mL·h） and （0.74±0.06） μg/（mL·h） （P < 0.05）， the maximum plasma concentration of rhein from the ultra-micro and fine powder of Shanzha Xiaozhi Capsules were （0.79±0.15） μg/mL and （0.17±0.02） μg/mL （P < 0.05）. Conclusion The ultra-micro porphyrization can make the absorption of rhein more complete in rats and improve bioavailability.

[Key words] Shanzha Xiaozhi Capsules； Ultramicra-power； Fine-power； Rhein； Pharmacokinetics

山楂消脂膠囊由山楂和大黃兩味中藥組成，具有行氣化痰、消積除滯等作用[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，山楂消脂膠囊臨床上具有降低冠心病患者動脈斑塊中的脂質含量、改善心絞痛發(fā)作癥狀等作用[3-5]。為提高山楂消脂膠囊的生物利用度，現(xiàn)采用超微粉碎技術對其工藝進行改革。大黃作為君藥，故選用有效成分大黃酸進行超微粉與細粉相對生物利用度的比較研究，從而對山楂消脂膠囊進行超微粉碎是否合理以及有效性進行客觀評價，為更深入的臨床研究及醫(yī)院其他制劑超微粉技術的引入提供理論基礎。endprint

1 儀器與試藥

1.1 儀器

戴安summitP680液相色譜儀（戴安公司）；PDA-100二級管陣列檢測器；Chromelon色譜工作站；湘儀高速離心機（H1850）（湖南湘儀有限公司）；XW-80A渦旋混合器（上海精科實業(yè)有限公司）；AUW120D分析天平（SHIMADZU）；KQ5200DE型超聲振蕩儀（昆山市超聲儀器有限公司）；DP-MD200-2/亞歐德氮吹儀（廣州海瀝生物科技有限公司）；FC160F粉碎機粉碎（上海坤麟制藥機械有限公司）；BFM-6BI型貝利微粉機（濟南倍力粉技術工程有限公司）。

1.2 試藥

山楂消脂膠囊（院內(nèi)制劑，由廣東省佛山市中醫(yī)院提供，批號0431503）；大黃酸（批號0757-200206）購于中國藥品生物制品檢定所；甲醇：色譜純（DiKMA公司）；水為超純水；磷酸：色譜純（成都市客龍化工試劑廠）；乙酸乙酯：分析純（天津市津東天正精細化學試劑廠）；鹽酸：分析純（天津市津東天正精細化學試劑廠）。

1.3 動物

SPF級SD大鼠，雄性，體重220～260 g，1.6月齡，在室溫20～-23℃，相對濕度65%～75%條件下喂養(yǎng)，自由進食、飲水，適應性培養(yǎng)1周。由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，合格證號：SKXK粵2008-0020，粵監(jiān)證字2008A002。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Uranus C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm），流動相甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），檢測波長254 nm，流速1.0 mL/min，柱溫為室溫，進樣量為20 μL[6]。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取1.6 mg大黃酸對照品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容，濃度為160 μg/mL。經(jīng)倍數(shù)稀釋配成0.24、0.48、0.96、24.00、36.00、48.00、60.00 μg/mL共7個濃度的對照品溶液。

2.3 山楂消脂膠囊超微粉與細粉及其混懸液的制備

將山楂、大黃藥材打成粗粒，再通過FC160F粉碎機粉碎，即得粒徑為100目的細粉；將山楂、大黃藥材打成粗粒，再通過BFM-6BI型貝利微粉機粉碎，即得粒徑為200目的細粉。分別稱取2.5 g的超微粉及細粉于50 mL容量瓶中，加超純水超聲溶解，定容，即為供試品溶液，濃度為0.05 g/mL。

2.4 血漿樣品預處理

將血漿樣品置于肝素管，4000 r/min，離心5 min（離心半徑為9.16 cm），取上清液0.2 mL，加入0.1 mol/mL鹽酸0.05 mL酸化，再加入1.5 mL乙酸乙酯，渦旋混合振蕩10 min，8000 r/min，離心8 min（離心半徑為9.16 cm），沉淀蛋白，吸取乙酸乙酯層1 mL，于40℃氮氣吹干，殘渣加甲醇0.1 mL，漩渦混合振蕩溶解，12 000 r/min，離心10 min（離心半徑為12.84 cm），取上清液0.07 mL，低溫保存，用時過濾供液相檢測。

2.5 動物分組與給藥

將SD大鼠10只隨機分為超微粉組和細粉組。實驗前12 h禁食不禁水。超微粉組灌胃給予超微粉混懸液，細粉組灌胃給予細粉混懸液，兩組均按0.5 g/kg的劑量給藥。于給藥后5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、1.5 h、2 h、4 h、6 h、9 h、12 h、24 h于大鼠眼眶取血0.5 mL于肝素管中，4000 r/min離心8 min，取上清液0.2 mL，按“2.4”項下操作，測定大黃酸峰面積，并計算相應大黃酸的濃度。

2.6 方法專屬性

在選定的色譜條件下，山楂消脂膠囊中的其他成分和血漿中內(nèi)源性成分不干擾大黃酸的測定，見圖1，其中大黃酸的出峰時間在7 min左右。

2.7 標準曲線

精密量取系列大黃酸對照品溶液于離心管中，加入0.1 mL大鼠空白血漿，制成大黃酸質量濃度分別為0.16、0.32、0.64、16.00、24.00、32.00、40.00 μg/mL的血漿樣本，按“2.1”項下操作，以大黃酸的峰面積Y對大黃酸血藥濃度X進行線性回歸，得回歸方程Y = 1107.4X-0.0015（r = 0.9996），大黃酸在0.16～40.00 μg/mL線性關系良好。

2.8 精密度試驗

分別取大黃酸對照品溶液制成0.16、16.00、40.00 μg/mL的血漿樣品，每個濃度平行作6份，按“2.1”項下操作，在1 d內(nèi)測定6次。結果測得3種不同濃度血漿樣品的平均RSD為4.26%，見表1。日間精密度的測定，同上法制備血漿樣品，在1 d內(nèi)測定1次，連續(xù)測定6 d。結果測得3種不同濃度血漿樣品的平均RSD為6.08%，見表2。

2.9 回收率試驗

精密量取空白血漿0.10 mL于離心管中，分別加入大黃酸對照品溶液0.2 mL，制成大黃酸質量濃度分別為0.16、16.00、40.00 μg/mL的血漿樣本，每個濃度平行5份，按“2.1”項下操作，測定的大黃酸峰面積為S，另取濃度為0.24、24.00、60.00 μg/mL大黃酸對照品溶液0.2 mL，加入0.1 mL甲醇，按“2.1”項下操作，測定的大黃酸峰面積為A，回收率=S/A×100%，計算得到其平均提取回收率為85.85%，大于85%，符合藥代動學研究的要求，見表3。

2.10 藥動學研究

大鼠灌服山楂消脂膠囊超微粉混懸液及山楂消脂膠囊細粉混懸液后，于不同時間點進行采樣處理并測定相應大黃酸峰面積，數(shù)據(jù)經(jīng)PKSolver 2.0程序藥代動力學模型擬合，以理論血藥濃度與實測血藥濃度相關系數(shù)最大且AIC值最小為原則，確定山楂消脂膠囊超微粉與細粉中大黃酸在大鼠體內(nèi)均符合二室模型，主要藥動學參數(shù)見表4，平均血藥濃度-時間曲線見圖2。采用t檢驗對超微粉與細粉之間的差異進行統(tǒng)計分析。研究結果表明，山楂消脂膠囊超微粉和細粉中大黃酸在大鼠體內(nèi)均呈開放二室模型；統(tǒng)計學處理，山楂消脂膠囊超微粉及山楂消脂膠囊的主要藥動學參數(shù)AUC分別為（4.08±4.96）μg/（mL·h）和（0.74±0.06）μg/（mL·h），藥峰濃度（Cmax）分別為（0.79±0.15）μg/mL和（0.17±0.02）μg/mL。對兩樣本進行t檢驗，結果可得Cmax、AUC和清除率（CL）的差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。其中大鼠灌服山楂消脂膠囊超微粉所得Cmax、AUC值大于灌服山楂消脂膠囊細粉，說明山楂消脂膠囊中藥物經(jīng)過超微粉碎后，其有效成分大黃酸在體內(nèi)的吸收利用程度有所提高。通過計算相對生物利用度，超微粉為細粉的5.51倍，表明山楂消脂膠囊經(jīng)超微粉碎后，吸收速度加快，生物利用度提高。endprint

表4 口服給藥山楂消脂膠囊超微粉和細粉后大黃酸

在大鼠血漿中的主要藥動學參數(shù)（x±s，n = 5）

3 討論

超微粉碎通過將固體物質粉碎成直徑小于10 μm粉體，使藥物具粒徑細且分布均勻，從而提高利用率，減少物料[6-10]。然而，對含有不穩(wěn)定成分的藥材，采用超微粉碎技術時需采用低溫粉碎來減少藥物的損失[11-12]。

山楂消脂膠囊由大黃與山楂兩味中藥組成，大鼠給予山楂消脂膠囊超微粉及細粉后，在選定色譜條件下大黃酸與其他成分達到基線分離，說明該條件下山楂消脂膠囊中其他成分及血漿內(nèi)源性物質對大黃酸的測定均不產(chǎn)生干擾，可作為測定的指標。

本研究采用反相高效液相色譜法[13-14]，通過比較山楂消脂膠囊超微粉與細粉中大黃酸在大鼠體內(nèi)的藥代動力學差異，探討超微粉碎技術對藥物有效成分吸收的影響。山楂消脂膠囊經(jīng)超微粉碎后，吸收速度加快，生物利用度提高，可能是由于藥物經(jīng)過超微粉碎后，細胞破壁率增加，表面積增大，吸收量和吸收速度也隨之提高[15-17]。這與文獻報道的一致，即大黃經(jīng)過超微粉碎后其有效成分大黃酸的溶出度明顯增加[18-19]。T1/2β為藥物消除半衰期，實驗結果表明細粉的消除半衰期大于微粉組，說明山楂消脂膠囊經(jīng)過超微粉碎后其吸收速度加快，消除速度提高。

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（收稿日期：2017-06-14 本文編輯：張瑜杰）endprint