姜芳燕,楊寧,馮慧敏,武耀廷,3

(1.海南熱帶海洋學(xué)院 海南省熱帶海洋漁業(yè)資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,海南 三亞 572022;2.三亞鑫海龍工貿(mào)有限公司,海南 三亞 572000; 3.海南大學(xué), 海口 570228)

不同活性物質(zhì)對(duì)大海馬爛尾病病原菌的體外抑菌作用研究

姜芳燕1,楊寧2,馮慧敏1,武耀廷1,3

(1.海南熱帶海洋學(xué)院 海南省熱帶海洋漁業(yè)資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,海南 三亞 572022;2.三亞鑫海龍工貿(mào)有限公司,海南 三亞 572000; 3.海南大學(xué), ?？?570228)

本研究考察不同活性物質(zhì)對(duì)海馬爛尾病病原菌PseudoalteromonasspongiaeHL11的抑菌作用,結(jié)果表明茶多酚、大蒜素、沒(méi)食子酸、聚賴(lài)氨酸和乳酸5種活性物質(zhì)具有抑菌效果,而其余13種活性物質(zhì)沒(méi)有抑菌效果.進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),其最優(yōu)復(fù)合抑菌配方為:茶多酚27.5 mg.L-1、沒(méi)食子酸10 mg.L-1、乳酸10 mg.L-1、大蒜素30 mg.L-1、聚賴(lài)氨酸100 mg.L-1,其最大抑菌圈直徑為31.6 mm.本研究旨在為海馬實(shí)際生產(chǎn)中爛尾病的防治,提供一種無(wú)毒副作用、無(wú)藥物殘留和健康環(huán)保的養(yǎng)殖方式.

大海馬;海綿假交替單胞菌;抑菌實(shí)驗(yàn);正交實(shí)驗(yàn);活性物質(zhì)

0 引言

海馬(Hippocampusspp.)又名落龍子,隸屬海龍科、海馬屬,是一種藥用價(jià)值和觀(guān)賞價(jià)值很高的小型海洋魚(yú)類(lèi)[1].海馬品種龐雜,分類(lèi)煩瑣,現(xiàn)階段全世界范圍內(nèi)共有54種,其中我國(guó)沿海區(qū)域約有13種[2].伴隨著人類(lèi)活動(dòng)對(duì)海洋環(huán)境的破壞以及過(guò)度的捕撈活動(dòng),使得自然海域中野生海馬的數(shù)量急劇減少[3].為了平衡野生海馬資源保護(hù)和市場(chǎng)需求之間的矛盾,人工養(yǎng)殖海馬是其主要解決方案之一[4].

隨著海馬養(yǎng)殖的工廠(chǎng)化程度加深,其病害問(wèn)題也不可避免地凸顯出來(lái)[5].海馬病害的主要種類(lèi)有真菌性疾病[6]、細(xì)菌性疾病[4]和寄生蟲(chóng)病[7],還有一些非細(xì)胞微生物比如病毒引起的疾病[8].魚(yú)類(lèi)細(xì)菌性爛尾病是一種發(fā)生于世界范圍內(nèi)的,嚴(yán)重危害眾多品種養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的疾病[9].嚴(yán)重時(shí)尾部爛掉,骨骼外露,傳染率高,死亡快,可引起病魚(yú)大批死亡.在海馬實(shí)際養(yǎng)殖過(guò)程易患爛尾病,其主要癥狀表現(xiàn)為尾部皮膚發(fā)白、潰爛、肝臟糜爛、腸道發(fā)白或透明等,不及時(shí)隔離治療會(huì)導(dǎo)致全部死亡.針對(duì)爛尾病的治療,目前已報(bào)道患爛尾病的斜帶石斑魚(yú)[10]、劍尾魚(yú)[9]、眼斑石首魚(yú)[11]和大黃魚(yú)[12]等常見(jiàn)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)均采用慶大霉素、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明以及左氟沙星等抗生素作為實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)用藥.但是,抗生素的長(zhǎng)期使用,不僅使病原菌產(chǎn)生耐藥性,而且會(huì)影響海馬自身的抗病能力,同時(shí)還存在著藥物殘留的問(wèn)題[13].近年來(lái),從天然植物特別是藥用植物中尋找純天然抗生物藥物已成為研究熱點(diǎn)[14].本課題組前期從患爛尾病的大海馬分離鑒定其病原菌為海綿假交替單胞菌(PseudoalteromonasspongiaeHL11),并進(jìn)行相關(guān)的藥敏實(shí)驗(yàn).本研究對(duì)大海馬爛尾病原菌有抑菌作用的生物活性物質(zhì)進(jìn)行初步篩選,通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化獲得最佳復(fù)合抑菌配方,旨在為海馬爛尾病的生物防治研究奠定基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)菌株

本實(shí)驗(yàn)中所用的大海馬爛尾病原菌株為海綿假交替單胞菌(P.spongiaeHL11),由本課題組分離獲得,于冰箱4℃保藏.

1.2試劑

茶多酚、殼聚糖、甲殼素、甜菜堿、曲酸和聚賴(lài)氨酸購(gòu)自山東西亞化學(xué)股份有限公司,沒(méi)食子酸購(gòu)自天津市福晨化學(xué)試劑廠(chǎng),大蒜素、蔓越莓提取物、紫雛菊提取物、馬卡根粉、黑升麻提取物、接骨木提取物、南非醉茄和迷迭香葉提取物均購(gòu)自美國(guó)健安喜(GNC)股份有限公司,其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純.

1.3培養(yǎng)基

酵母浸膏1 g,胰蛋白胨5 g,牛肉膏3 g,瓊脂20 g,用沉淀、過(guò)濾海水定容至1 L,pH 7.2.種子培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,不加瓊脂.

1.4生物活性物質(zhì)抑菌實(shí)驗(yàn)

生物活性物質(zhì)抑菌活性的測(cè)定采用瓊脂孔擴(kuò)散對(duì)峙法.將菌懸液用生理鹽水稀釋至1.0×108cfu/mL,取100 μL均勻涂布于瓊脂培養(yǎng)基上,然后在培養(yǎng)基上成“十”字形等距離打孔,每平板打4個(gè)孔,取 50 μL待測(cè)活性物質(zhì)加入孔內(nèi),30℃恒溫培養(yǎng)24 h后測(cè)量抑菌圈的直徑.

1.5生物活性物質(zhì)初篩

在查閱文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上,考察茶多酚、Nisin、殼聚糖、甜菜堿和生姜提取物等18種天然活性物質(zhì)成分對(duì)病原菌P.spongiaeHL11的抑菌效果,進(jìn)行有抑菌作用活性物質(zhì)初篩.

1.6單因素優(yōu)化

考察不同濃度活性物質(zhì)對(duì)病原菌P.spongiae HL11抑菌效果.其中,茶多酚、乳酸和聚賴(lài)氨酸的濃度梯度均為100、50、25和12.5 mg.L-1.由于沒(méi)食子酸的溶解度和大蒜素純度的限制,將其溶度梯度設(shè)為40、20、10和5 mg.L-1.

1.7正交實(shí)驗(yàn)

在單因素抑菌實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,綜合考慮沒(méi)食子酸的溶解度和單因素抑菌效果,將其溶度固定在10 mg.L-1.以茶多酚、乳酸、大蒜素和聚賴(lài)氨酸等活性物質(zhì)濃度為4個(gè)因素,以抑菌圈直徑為響應(yīng)值,采用L9(34)型正交試驗(yàn),確定病原菌P.spongiaeHL11最佳復(fù)合抑菌配方.采用國(guó)際通用的統(tǒng)計(jì)軟件MINITAB 15.0中的“DOE”模塊中的“田口設(shè)計(jì)”進(jìn)行試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析與優(yōu)化、相關(guān)圖表的生成等工作.具體的試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1.

1.8數(shù)據(jù)分析處理

所有抑菌實(shí)驗(yàn)均為3個(gè)平行,選取抑菌圈比較明顯的平板測(cè)定其抑菌圈直徑,結(jié)果取3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值.正交實(shí)驗(yàn)的方差分析采用MINITAB 15.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理.

2 結(jié)果與討論

2.1有抑菌作用的生物活性物質(zhì)初篩

分別考察茶多酚、Nisin、殼聚糖、甜菜堿和生姜提取物等18種天然活性物質(zhì)成分對(duì)病原菌P.spongiaeHL11的抑菌效果.結(jié)果表明,茶多酚、乳酸、沒(méi)食子酸、聚賴(lài)氨酸和大蒜素等5種活性物質(zhì)有較好的抑菌效果,而其他13種活性物質(zhì)并無(wú)抑菌效果.

表2 不同生物活性物質(zhì)對(duì)病原菌P.spongiae HL11的抑菌效果

2.2單因素優(yōu)化

進(jìn)一步研究5種活性物質(zhì)對(duì)病原菌P.spongiaeHL11的抑菌效果,如圖1所示.結(jié)果顯示,茶多酚、沒(méi)食子酸、乳酸、大蒜素和聚賴(lài)氨酸對(duì)菌株HL11的抑菌圈直徑,都隨著濃度的增加而增加.

圖1 不同濃度的5種活性物質(zhì)對(duì)病原菌P.spongiae HL11的抑菌效果

傳統(tǒng)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中,為了防治魚(yú)病,經(jīng)常在飼料中添加抗生素或激素,帶來(lái)藥物殘留和抗藥性等問(wèn)題[15].天然食藥用活性物質(zhì),具有毒副作用小、高效、健康無(wú)害、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn),避免由于使用抗生素帶來(lái)的抗藥性、養(yǎng)殖環(huán)境污染、藥物殘留超標(biāo)等問(wèn)題,同時(shí)滿(mǎn)足人們對(duì)綠色水產(chǎn)品的需求,符合無(wú)公害水產(chǎn)養(yǎng)殖的發(fā)展趨勢(shì)[16].茶多酚是茶葉中多酚類(lèi)物質(zhì)的總稱(chēng),具有較強(qiáng)的抗氧化能力強(qiáng),抑菌譜廣,無(wú)毒副作用,可作為食品添加劑,被廣泛應(yīng)用于畜禽飼料中[15].龍萌等[15]研究表明茶多酚能顯著提高了團(tuán)頭魴幼魚(yú)的增重率、特定生長(zhǎng)率以及肌肉中粗蛋白含量,降低了餌料系數(shù).沒(méi)食子酸又稱(chēng)為五倍子酸、棓酸,是中藥五倍子的主要有效成分之一,是現(xiàn)在許多常用于漁業(yè)生產(chǎn)中的單方或者復(fù)方中藥的抑菌有效活性成分之一[16].現(xiàn)有大量研究結(jié)果表明,五倍子對(duì)魚(yú)、蝦、中華鱉、鋸緣青蟹等水產(chǎn)動(dòng)物的氣單胞菌屬、弧菌屬等許多致病菌表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑菌抗菌性能[16].乳酸廣泛存在于如泡菜、腌肉、橄欖及酸奶等發(fā)酵食品中.喬支紅等[17]研究報(bào)道乳酸對(duì)金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、埃希氏大腸桿菌等3株食源性致病菌均有不同程度的抑制作用.大蒜素是大蒜瓣和蒜精油中含硫化合物的總稱(chēng),是大蒜的主要生物活性成分,具有不同程度的抑菌作用,被譽(yù)為天然抑菌劑[18].大量研究表明,大蒜素能有效抑制氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌、鰻弧菌、魯耶爾森氏菌等淡水魚(yú)類(lèi)的主要致病菌,對(duì)草魚(yú)腸炎病、爛腮病、赤皮病和鰱魚(yú)的出血病以及魚(yú)類(lèi)的暴發(fā)性傳染病都特別有效[18].聚賴(lài)氨酸是由鏈霉菌屬的少數(shù)菌種代謝產(chǎn)生的具有明顯抑菌功能的L-賴(lài)氨酸聚合物,聚合度通常在25～35個(gè)賴(lài)氨酸[19].聚賴(lài)氨酸作為一種天然的微生物代謝產(chǎn)物,具有完全的可降解特性及生物相容性,在食品、營(yíng)養(yǎng)保健、生物醫(yī)學(xué)、材料、農(nóng)業(yè)化學(xué)等領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用[20].上述5種活性物質(zhì),除沒(méi)食子酸和大蒜素已應(yīng)用于水產(chǎn)病害防治,其余的尚未有相關(guān)的應(yīng)用報(bào)道.在本研究中,這5種活性物質(zhì)對(duì)海馬爛尾病病原菌P.spongiaeHL11的抑菌圈直徑與課題組前期藥敏實(shí)驗(yàn)中的大部分常用抗生素相當(dāng),且未表現(xiàn)出耐藥性.而且茶多酚等5種活性物質(zhì),均為天然食藥用成分,能通過(guò)海馬代謝完全,無(wú)藥物殘留,無(wú)毒副作用,且不會(huì)產(chǎn)生抗藥性,也不會(huì)對(duì)海馬養(yǎng)殖水體環(huán)境造成污染.

2.3正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化

采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)從4個(gè)通過(guò)單因素抑菌實(shí)驗(yàn)篩選出的影響因子(即茶多酚、乳酸、聚賴(lài)氨酸和大蒜素)中篩選出具有顯著影響因子.每個(gè)因子均采用高中低3個(gè)水平,正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析見(jiàn)表3,方差分析見(jiàn)表4.

以抑菌圈直徑為響應(yīng)值,對(duì)正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行極差分析(表3).R值反應(yīng)某個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響程度,極差越大則該因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響越顯著,反之影響會(huì)下降.由表3可知,不同活性物質(zhì)對(duì)病原菌P.spongiaeHL11的抑菌作用影響依次為D>C>A>B,即聚賴(lài)氨酸>大蒜素>茶多酚>乳酸.K值大小顯示各因素水平對(duì)各活性物質(zhì)抑菌活性的影響程度.各活性物質(zhì)每個(gè)水平對(duì)病原菌P.spongiaeHL11的抑菌作用依次為A2>A1>A3,B1>B2>B3,C3>C2>C1,D3>D2>D1.根據(jù)以上正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析可知,其最優(yōu)抑菌復(fù)合配方為：A2B1C3D3,即茶多酚27.5 mg.L-1、乳酸10 mg.L-1、大蒜素30 mg.L-1和聚賴(lài)氨酸100 mg.L-1.

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及極差分析

針對(duì)以上結(jié)果,采用Minitab15.0軟件進(jìn)行方差分析,結(jié)果如表4所示,茶多酚、大蒜素和聚賴(lài)氨酸的P值小于0.05,均為顯著因子,其中聚賴(lài)氨酸對(duì)抑菌圈直徑影響最大,其次是茶多酚,最后是大蒜素.而乳酸的P值為0.598,屬于不顯著因子,其F值為0.53(<1),說(shuō)明乳酸對(duì)抑菌圈直徑的影響比誤差項(xiàng)還小.因此四種活性物質(zhì)濃度對(duì)病原菌P.spongiaeHL11的抑菌效果依次為聚賴(lài)氨酸>茶多酚>大蒜素>乳酸,與表3極差分析相一致.

表4 方差分析結(jié)果

圖2 五種活性物質(zhì)的主效應(yīng)圖

由各活性物質(zhì)的主效應(yīng)圖(圖2)可知,其最佳抑菌配方為茶多酚濃度(A2)為27.5 mg.L-1,乳酸濃度(B1)為10 mg.L-1,大蒜素濃度(C3)為30 mg.L-1,聚賴(lài)氨酸濃度(D3)為100 mg.L-1,與表3極差分析相吻合.為檢驗(yàn)正交實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果的可靠性,采用上述最優(yōu)抑菌配方進(jìn)行6次重復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證,結(jié)果顯示抑菌圈直徑大小平均值為31.6 mm,與理論預(yù)測(cè)值相吻合.因此,基于正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的天然活性物質(zhì)對(duì)病原菌P.spongiaeHL11抑菌復(fù)合配方準(zhǔn)確可靠,可用于實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中.

3 結(jié)論

本研究以大海馬爛尾病病原菌P.spongiaeHL11為研究對(duì)象,從茶多酚、Nisin、殼聚糖、甜菜堿和生姜提取物等18種天然活性物質(zhì)成分篩選對(duì)其有抑菌作用的活性物質(zhì).體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,茶多酚、大蒜素、沒(méi)食子酸、聚賴(lài)氨酸和乳酸等5種活性物質(zhì)具有抑菌效果,而其余13種活性物質(zhì)無(wú)抑菌作用.通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),確定5種活性物質(zhì)具有抑菌作用的濃度范圍.進(jìn)一步通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化各活性物質(zhì)的最優(yōu)抑菌復(fù)合配方.根據(jù)抑菌實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,確定復(fù)配活性物質(zhì)的最佳組合為：茶多酚27.5 mg.L-1、沒(méi)食子酸10 mg.L-1、乳酸10 mg.L-1、大蒜素30 mg.L-1和聚賴(lài)氨酸100 mg.L-1,其最大抑菌圈直徑為31.6 mm.

以天然食藥用活性物質(zhì)代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素在水產(chǎn)病害防治的應(yīng)用,不僅能避免抗藥性、藥物殘留、微生態(tài)平衡破壞、養(yǎng)殖環(huán)境污染等問(wèn)題,而且可以提高其安全性,發(fā)展無(wú)公害水產(chǎn)養(yǎng)殖,具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值.本研究旨在為海馬實(shí)際生產(chǎn)中爛尾病的防治,提供一種無(wú)毒副作用、無(wú)藥物殘留和健康環(huán)保的養(yǎng)殖模式.課題組下一步將根據(jù)各種活性物質(zhì)的抑菌機(jī)理、配伍方法、無(wú)公害養(yǎng)殖要求等,開(kāi)發(fā)具有高效、無(wú)毒和使用方便等優(yōu)點(diǎn)的活性物質(zhì)復(fù)方配方,以拓展生物活性物質(zhì)在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用范圍.

[1]LOURIE S A,SEAHORSE P,PROGRA M TNA.A guide to the identification of Seahorses [M].Project Seahorse and Traffic North America,2004:3-4.

[2]LAWRENCE C.Breeding seahoreses-Facts and fallacies [J].Western fishers,1998:39.

[3]BAUM J,VINCENT A.Magnitude and inferred impacts of the seahorse trade in Latin America [J].Environmental Conservation,2005,32(4):305-319.

[4]LIN T T,ZHANG D,LIU X,et al.Variations of immune parameters in the lined seahorseHippocampuserectusafter infection with enteritis pathogen ofVibrioparahaemolyticus[J].Fish & Shell fish Immunology,2016,50:247-254.

[5]BAUM J K,MEEUWIG J J,VINCENT A C.Bycatch of lined seahorses (Hippocampuserectus) in a Gulf of Mexico shrimp trawl fishery [J].Fishery Bulletin,2003,101(4):721-731.

[6]KOLDEWEY H.Seahorse Husbandry in Public Aquariums:Manual with chapters contributed by members of the Syngnathid Discussion Group[M].Zoological Society of London,2005.

[7]SHIN S P,HAN J E,GOMEZ D K,et al.Identification of scuticociliatePhilasteridesdicentrarchifrom indo-pacific seahorsesHippocampuskuda[J].African Journal of Microbiology Research,2011,5(7):738-741.

[8]BONAR C J,GARNER M M,KELLER C J,et al.Pathologic findings in weedy (Phyllopteryxtaeniolatus) and leafy (Phycoduruseques) seadragons[J].Veterinary Pathology,2013,50(3):368-376.

[9]徐曉麗,邵蓬,崔寬寬,等.劍尾魚(yú)爛鰓、爛尾病病菌的分離鑒定[J].淡水漁業(yè),2014,44(1):66-71.

[10]梅冰,周永燦,徐先棟,等.斜帶石斑魚(yú)爛尾病病原菌的分離與鑒定[J].熱帶海洋學(xué)報(bào),2010,29(6):118-124.

[11]姚歡,黃郁蔥,蔡雙虎,等.眼斑擬石首魚(yú)爛尾病病原菌的分離鑒定及滅活疫苗的免疫效果[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2016,36(4):36-43.

[12]石亞素,王建躍,王世意,等.海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚(yú)爛尾病病原研究[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2006,12(4):7-9.

[13]李海東.日本海馬白斑狀皮膚潰爛病病原學(xué)及組織病理學(xué)研究[D].煙臺(tái):魯東大學(xué),2015.

[14]時(shí)振東,杜洪生,蘇延友.生姜花椒及黃傘提取物抑菌效果評(píng)價(jià)[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2009,25(1):73-75.

[15]龍萌,侯杰,蘇玉晶,等.酵母硒和茶多酚對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)和生長(zhǎng)軸基因表達(dá)營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)及抗病力的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2015,39(1):97-107.

[16]郭海燕.五倍子及其有效成分沒(méi)食子酸在中華倒刺鲃和南方鲇的藥理學(xué)研究[D].重慶:西南大學(xué),2016.

[17]錢(qián)麗紅,陶妍,謝晶.茶多酚對(duì)金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抑菌機(jī)理[J].微生物學(xué)通報(bào),2010,37(11):1628-1633.

[18]喬支紅,程永強(qiáng),魯戰(zhàn)會(huì),等.乳酸對(duì)三種食源性致病菌的抑菌及殺菌作用[J].食品科技,2008,10:187-191.

[19]李麗.大蒜素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].福建畜牧獸醫(yī),2010,32(4):21-22.

[20]杜國(guó)豐,陳紅漫,闞國(guó)仕.ε-聚賴(lài)氨酸的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].輕工科技,2015,204(11):25-27.

[21]劉盛榮,吳清平,張菊梅,等.ε-聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌菌種及生物特性多樣性研究進(jìn)展[C].2010第二屆中國(guó)食品安全高峰論壇論文集,2010:130-133.

InvitroAntibacterialActivityofVariousActiveSubstancesagainstTail-rotDiseasePathogenofHippocampuskuda

JIANG Fang-yan1, YANG Ning2, FENG Hui-min1, WU Yao-ting1,3

(1.Key Laboratory of Tropic Sea Fishery Protection and Utilization of Hainan Province, Hainan Tropical Ocean University, Sanya Hainan 572022, China;2.Sanya Xin Hailong Industry and Trade Co.Ltd., Sanya Hainan 572000, China;3.Hannan University, Haikou 570228, China)

In the study, various active substances were tested for their antibacterial activity against tail-rot disease pathogenPseudoalteromonasspongiaeHL11 ofHippocampuskuda. The results indicated that 5 active substances—tea polyphenols, lactic acid, gallic acid, allicin and polylysine had antibacterial effect, while other 13 kinds of bioactive substances had no bacteriostatic effect.And then, the optimal antibacterial formulas gained by single factor experiment and orthogonal experiment are as follows:tea polyphenols 27.5 mg.L-1, gallic acid 10 mg.L-1, lactic acid 10 mg.L-1, allicin 30 mg.L-1， and polylysine 100 mg.L-1.Under optimal conditions, the maximum diameter of the inhibition zone was 31.6 mm.The aim of this study is to provide a non-toxic side effect, no drug residue, healthy and environmentally friendly culture mode for the control of tail-rot disease of seahorses in the actual production.

Hippocampuskuda;Pseudoalteromonasspongiae; antibacterial test; orthogonal experiment; bioactive substances

格式：姜芳燕,楊寧,馮慧敏,等.不同活性物質(zhì)對(duì)大海馬爛尾病病原菌的體外抑菌作用研究[J].海南熱帶海洋學(xué)院學(xué)報(bào),2017,24(5):14-20.

2017-06-06

海南省重大科技項(xiàng)目(ZDKJ2016009);海南省應(yīng)用技術(shù)研發(fā)與示范推廣專(zhuān)項(xiàng)(ZDXM2015006);海南省科技興海專(zhuān)項(xiàng)(XH201403);三亞市專(zhuān)項(xiàng)科研試制(2014CZ09);三亞市院地科技合作項(xiàng)目(2015YD07)

姜芳燕(1984-),女,浙江衢州人,海南熱帶海洋學(xué)院生命科學(xué)與生態(tài)學(xué)院副教授,博士,研究方向?yàn)樗a(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病害防治．

武耀廷(1962-),男,河南駐馬店人,海南大學(xué)研究員,博士,研究方向?yàn)樯锷鷳B(tài)和農(nóng)業(yè)科學(xué).

S9

A

2096-3122(2017) 05-0014-07

10.13307/j.issn.2096-3122.2017.05.03

(編校李由明)