何美菁，薛非非，王明芳，張朔生

（山西中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院，山西太原030024）

山泉水與普通水對利口清含漱液煎煮效果影響的研究

何美菁，薛非非，王明芳，張朔生

（山西中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院，山西太原030024）

目的：探討山泉水與普通水對利口清含漱液煎出成分的影響。方法：將金銀花和北豆根用山泉水與自來水分別煎煮得到的單煎及單煎合并液，通過醇沉法得到供試品溶液，采用高效液相色譜法測定綠原酸含量，色譜條件為：C18色譜柱（C18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長 327 nm；柱溫 25 ℃；體積流量 1.0 mL/min；流動相乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）。紫外分光光度法測定北豆根總生物堿含量。結(jié)果：山泉水單煎及單煎合并液的綠原酸煎出率均高于自來水，生物堿煎出率則相反。結(jié)論：山泉水制備利口清含漱液有利于酸性成分的溶出，不利于堿性成分的溶出。

利口清含漱液；山泉水；綠原酸；總生物堿

利口清含漱液，山西華元醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，由金銀花、北豆根兩藥配伍制成，有清熱解毒、消腫祛瘀、祛風(fēng)止痛之功，對胃火熾盛引起的牙齦炎、牙周炎患者的牙齦出血、口臭等癥狀有較好的療效［1-2］。金銀花具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱等病癥。其抑菌的主要成分為綠原酸類化合物，含量測定指標(biāo)成分為綠原酸［3-5］。北豆根具有清熱解毒、祛風(fēng)止痛的功效，用于治療咽喉腫痛、熱毒瀉痢、風(fēng)濕痹痛，主要成分為生物堿［6-7］。明代繆希雍在《炮炙大法》的煎藥則例中提到：“凡湯液，一切宜用山泉之甘冽者，次則長流河水，井水不用?！保?］張仲景的《傷寒雜病論》中也有山泉水煎煮中藥的記載［9］，但山泉水相關(guān)現(xiàn)代研究文獻(xiàn)報道很少。因該制劑以其中的酸堿成分發(fā)揮作用，考慮到不同提取溶劑對成分溶出率的差異，故選擇不同的水作為提取溶劑，探究溶液對其主要成分的影響。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Thermo Fisher Scientific U3000高效液相色譜儀（美國賽默飛公司）；DV215CD型1/100000分析天平（美國奧豪斯儀器公司）；Ultra-3660紫外分光光度計（北京普源精電科技有限公司）；Heal Force超純水儀（NW Ultra-pure Water System）。

1.2 試藥

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花，北豆根為防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauricum DC.的干燥根莖，以上藥材均購自北京同仁堂藥店，經(jīng)山西中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院張朔生教授鑒定為正品。

綠原酸對照品（批號140601，成都普菲德生物技術(shù)有限公司）；蝙蝠葛堿對照品（批號160905，上海融禾醫(yī)藥科技有限公司）；乙腈、磷酸均為色譜純；無水乙醇、甲醇、氯仿均為分析純；水為超純水；山泉水（孝義市麗錦山泉飲料有限責(zé)任公司提供）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

2.1.1 單煎液I的制備 稱取金銀花26.25 g，加入自來水210 mL，浸泡1 h。稱取北豆根26.25 g，加入自來水210 mL，浸泡4 h。兩種藥材分別煎煮3次，第1次40 min，第2次30 min，第3次20 min，合并3次煎液，濾過。將二者水煎液分別減壓濃縮至相對密度為1.15～1.20（50℃）的清膏，加入乙醇至含醇量達(dá)70%，攪勻，靜置過夜。濾過，回收乙醇，分別加水至375 mL，0～4℃放置 48 h，濾過，收集濾液，即得金銀花單煎液I、北豆根單煎液I。

2.1.2 單煎液Ⅱ的制備 稱取金銀花26.25 g，加入山泉水210 mL，浸泡1 h。稱取北豆根26.25 g，加山泉水210 mL，浸泡4 h。兩種藥材分別進(jìn)行煎煮。按照“2.1.1”項(xiàng)下制備方法制得金銀花單煎液Ⅱ、北豆根單煎液Ⅱ。

2.1.3 單煎合并液I的制備 稱取金銀花26.25 g，加自來水210 mL，浸泡1 h。稱取北豆根26.25 g，加自來水210 mL，浸泡4 h。分別煎煮3次，第1次 40 min，第 2次 30 min，第 3次 20 min，合并 3次煎液，濾過。將二者水煎液分別減壓濃縮至相對密度為1.15～1.20（50℃）的清膏，加入乙醇至含醇量達(dá)70%，攪勻，靜置過夜。濾過，回收乙醇，合并兩種水煎液，加水至 375 mL，0～4 ℃放置 48 h，濾過，收集濾液，即得單煎合并液I。

2.1.4 單煎合并液Ⅱ的制備 稱取金銀花26.25 g，加山泉水210 mL，浸泡1 h；稱取北豆根26.25 g，加山泉水210 mL，浸泡4 h，分別進(jìn)行煎煮。按照“2.1.3”項(xiàng)下制備方法制得單煎合并液Ⅱ。

2.2 綠原酸含量測定

2.2.1 色譜條件 C18色譜柱（C18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長327 nm；柱溫25℃；體積流量1.0 mL/min；流動相乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；理論塔板數(shù)按綠原酸計算，應(yīng)不低于1 000。色譜圖見圖1、圖2。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取五氧化二磷真空干燥24 h的綠原酸對照品4.20 mg，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成含綠原酸0.084 mg/mL的溶液，即得對照品溶液（10℃以下密封保存）。

圖1 綠原酸對照品HPLC圖譜

圖2 綠原酸供試品HPLC圖譜

2.2.3 供試品溶液的制備 依次精密量取“2.1”項(xiàng)下制備的金銀花單煎液Ⅰ、Ⅱ以及單煎合并液Ⅰ、Ⅱ各10 mL，濾過。精密量取續(xù)濾液1 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。

2.2.4 供試品含量測定 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下所制得的對照品溶液以及“2.2.3”項(xiàng)下所制得的4份供試品溶液各 10 μL，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下，分別平行測定2次，計算綠原酸含量的平均值。測定結(jié)果見表1。組間采用LSD法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果顯示供試Ⅰ與Ⅱ之間、Ⅲ與Ⅳ之間綠原酸的含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 綠原酸含量測定結(jié)果

由表1可知，山泉水單煎金銀花綠原酸含量高于自來水單煎液，并且單煎合并液亦是山泉水煎煮綠原酸含量較高，由此可見山泉水有利于酸性成分的溶出。

2.3 北豆根總生物堿含量測定

2.3.1 對照品溶液的制備 稱取干燥至恒重的蝙蝠葛堿對照品12.5 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即得濃度為0.5 mg/mL的對照品溶液。

2.3.2 溴甲酚綠緩沖液的制備 精密稱取溴甲酚綠0.125 g，加入0.05 mol/L的NaOH溶液50 mL使溶解；精密稱取鄰苯二甲酸氫鉀2.55 g，置100 mL燒杯中，加入50 mL蒸餾水?dāng)嚢枋蛊涑浞秩芙?。將上述兩種溶液混合，移入250 mL容量瓶中，蒸餾水定容至刻度，pH4.05，備用。

2.3.3 測定波長的選擇 精密量取對照品溶液和北豆根單煎液I、Ⅱ各2 mL，分別置于內(nèi)有15 mL氯仿的分液漏斗中，加入溴甲酚綠緩沖液4 mL，振搖，靜置30 min，取氯仿層測定吸光度，以溴甲酚綠緩沖液飽和的氯仿液為空白對照。在200～500 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描，結(jié)果顯示在415 nm處均有最大吸收峰，故以415 nm作為測定波長。

2.3.4 線性關(guān)系的考察 精密量取“2.3.1”項(xiàng)下制備的蝙蝠葛堿對照品溶液 1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分別置于 10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，制成一系列濃度的對照品溶液。各精密量取2 mL分別按照“2.3.3”項(xiàng)下制備并測定吸光度，以溶液濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A=5.794C+1.142 9，R2=0.999 1（n=6，包括原濃度）。結(jié)果表明，在0.05～0.5 mg/mL濃度范圍內(nèi)，蝙蝠葛堿濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見圖3。

圖3 蝙蝠葛堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.5 精密度試驗(yàn) 取“2.3.1”項(xiàng)下制備的對照品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，測定含量，吸光度RSD為1.05%，表明精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一批北豆根單煎液Ⅱ2 mL，按“2.3.3”項(xiàng)下方法于 0 、1 h、2 h、8 h、24 h分別進(jìn)行測定。結(jié)果測得吸光度RSD為1.76%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批北豆根藥材飲片，按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備5份北豆根樣品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，結(jié)果吸光度RSD為0.57%（n=5），表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的北豆根單煎液Ⅱ9份，每份1.0 mL，分別精密加入2.3.1項(xiàng)制備的對照品溶液1.0 mL（三個濃度各3份，分別為 0.1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.5 mg/mL），精密稱定。按“2.3.3”項(xiàng)下方法測定吸光度，計算回收率。結(jié)果蝙蝠葛堿平均回收率為99.54%，RSD為0.93%（n=9），表明方法準(zhǔn)確。

2.3.9 生物堿含量測定 精密量取按照“2.1”項(xiàng)下方法制備的北豆根單煎液I、Ⅱ，以及單煎合并液I、Ⅱ各2 mL，按照“2.3.3”項(xiàng)下方法分別測定吸光度，計算含量。含量測定結(jié)果見表2。

表2 北豆根總生物堿含量測定結(jié)果 （μg/g，±s）

表2 北豆根總生物堿含量測定結(jié)果 （μg/g，±s）

注：與單煎液Ⅰ比較，1）P＜0.05；與單煎合并液Ⅰ比較，2）P＜0.05

樣品 生物堿含量單煎液Ⅰ 6.28±0.21單煎液Ⅱ 6.03±0.181）單煎液Ⅲ 4.60±0.19單煎液Ⅳ 4.08±0.202）

由表2可知，北豆根山泉水單煎液總生物堿含量低于自來水單煎，單煎合并液結(jié)果同上，可見山泉水對生物堿的提取率較低。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

孝義麗錦山泉水為天然碳酸氫鈉（小蘇打）泉水，就是我們常說的堿性水，經(jīng)檢測PH值約為7.82，屬真正的堿性水，用該山泉水煎煮中藥有利于酸性活性成分的煎出。另外，該山泉水HCO3-含量高達(dá)233 mg/L。重碳酸鹽（小蘇打）具有促進(jìn)消化、加快腸胃蠕動、中和胃酸等作用。另外，還能夠中和肌肉代謝產(chǎn)生的乳酸，有利尿作用，對慢性胃炎、胃酸過多、胃液分泌過少、便秘等有顯著功效。

3.2 含量測定指標(biāo)成分的選擇

大量研究表明，金銀花具有抑菌抗炎的作用。

金銀花中主要含有有機(jī)酸、揮發(fā)油和黃酮類物質(zhì)，其中有機(jī)酸類約占6%，以綠原酸和異綠原酸為主［10］，是金銀花的主要有效成分［11-12］，而且藥典上金銀花的含量測定也是以綠原酸為標(biāo)準(zhǔn)，因此該實(shí)驗(yàn)以綠原酸為金銀花的含量測定指標(biāo)成分。而北豆根的主要抑菌抗炎成分為生物堿類，其中蝙蝠葛堿含量較多［4］，因此本實(shí)驗(yàn)以蝙蝠葛堿為對照測定總生物堿含量。

3.3 含量測定方法的確立

本文參照前期做過的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，利用HPLC法對該制劑指標(biāo)成分綠原酸進(jìn)行含量測定［13］。并且通過查閱文獻(xiàn)，制定了上述通過紫外分光光度法［4，14-15］測定總生物堿含量的方法。經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，該方法精密度高、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確可靠、簡便易行，可以作為北豆根總生物堿成分含量的測定方法。

［1］秦立芳，李林可.局部應(yīng)用牙周抑菌劑治療急性牙齦炎、牙周炎療效觀察［J］.中國實(shí)用口腔科雜志，2009，2（10）：606-608.

［2］姜秋，馮延民，趙玉春，等.利口清含漱液治療牙周病的臨床研究［J］.白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2000，26（3）：275.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：99，221.

［4］楊倩茹，趙媛媛，郝江波，等.金銀花與山銀花化學(xué)成分及其差異的研究進(jìn)展［J］.中國中藥雜志，2016，41（7）：1 204-1 211.

［5］趙國玲，劉佳佳，林丹，等.金銀花化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.中成藥，2002，24（12）：973-976.

［6］吳美仙，金立群.北豆根的研究進(jìn)展［J］.中國現(xiàn)代中藥，2007，9（9）：35-38.

［7］鄭艷春，秦婷，崔雅慧，等.北豆根化學(xué)成分及其藥理作用的研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，8（13）：9-10，33.

［8］繆希雍撰述；胡曉峰校注.炮炙大法［M］.北京：中國書店，1992：63.

［9］卞華.傷寒雜病論［M］.北京：中醫(yī)古籍出版社，2012：308.

［10］賀偉.金銀花的化學(xué)成分及藥理作用研究［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2007，4（24）：8-9.

［11］趙國玲，劉佳佳，林丹，等.金銀花化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.中成藥，2002，24（12）：973-976.

［12］于生蘭，張龍，孫玲等.金銀花的研究進(jìn)展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2002，13（8）：498-499，500.

［13］薛非非，李坤，王明芳，等.合煎對利口清含漱液穩(wěn)定性的影響［J］.中成藥，2016（6）：1 402-1 404.

［14］楊靜偉，楊晶凡，李二林.紫外分光光度法測定北豆根總生物堿的含量［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2013，13（7）：7-8.

［15］陳志歆，張怡，王愛華，等.北豆根氣霧劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中草藥，2002，33（11）：999-1 000.

（編輯：張世霞）

Effect of spring water and normal water on components in decoction of Likouqing mouthwash containing

He Meijing，Xue Feifei，Wang Mingfang，Zhang Shuosheng
（Shanxi University of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To explore effect of spring water and normal water on components in decoction of Likouqing mouthwash containing.Method：Single and mixed decoction of lonicera japonica，rhizome menispermi were prepared by spring water and normal water respectively.The contents of Chlorogenic acid and Alkaloids in rhizome menispermi were detected by HPLC，ultraviolet spectroscopy respectively.Result：The outcome of Chlorogenic acid in single decoction and mixed decoction prepared by spring water was higher than that decoction prepared by normal water.The result of Alkaloids was opposite to that of Chlorogenic acid.Conclusion：Spring water is helpful for dissolution of acid ingredient，but it is against to dissolution of alkaline composition.

Likouqing mouthwash containing；spring water；Chlorogenic acid；Alkaloids

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0017-04

何美菁，碩士，E-mail：928988088@qq.com

張朔生，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail：zhangshuosheng@aliyun.com