張路云，崔閩魯

（1.浙江省仙居中醫(yī)院，浙江臺(tái)州317300； 2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬二院，福建泉州362000）

黃芪對(duì)慢性宮內(nèi)缺氧子代兔非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用

張路云1，崔閩魯2

（1.浙江省仙居中醫(yī)院，浙江臺(tái)州317300； 2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬二院，福建泉州362000）

目的：觀察黃芪對(duì)于慢性宮內(nèi)缺氧誘導(dǎo)的子代兔非酒精性脂肪肝的肝功能、血脂及病理的影響。方法：將健康孕兔隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、黃芪組，建立宮內(nèi)缺氧模型，黃芪組給予黃芪注射液干預(yù)，對(duì)照組、模型組耳緣靜脈注射生理鹽水。待分娩后，檢測(cè)6月齡子代雄兔肝功能、血脂及肝組織病理改變。結(jié)果：與模型組比較，黃芪組脂肪變性程度顯著減輕（P＜0.01）；血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL－C）降低，高密度脂蛋白（HDL－C）增高（P＜0.01）。結(jié)論：黃芪能夠在一定程度上減輕慢性宮內(nèi)缺氧引起的子代兔肝細(xì)胞脂肪變性。

脂肪肝；慢性宮內(nèi)缺氧；黃芪；保護(hù)作用

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的發(fā)生與遺傳－環(huán)境－代謝應(yīng)激密切相關(guān)［1］。宮內(nèi)缺氧會(huì)引起子代在宮內(nèi)生長(zhǎng)過(guò)程中的適應(yīng)性應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致遺傳基因改變和成年后代謝性疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加［2］。已有研究表明，宮內(nèi)缺氧與子代大鼠成年后NAFLD易感性增加有關(guān)［3］。黃芪主要成分有黃芪多糖、皂苷和異黃酮類，能改善機(jī)體缺血缺氧狀態(tài)，增強(qiáng)細(xì)胞代謝，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，提高缺氧時(shí)胎盤血流量，促胰島素生成，廣泛應(yīng)用于缺血缺氧性疾?。?－6］。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)動(dòng)物模型觀察慢性宮內(nèi)缺氧是否與子代兔NAFLD的發(fā)生有關(guān)聯(lián)以及黃芪能否對(duì)子代兔發(fā)生的肝細(xì)胞脂肪變性損傷起到保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 24只孕齡10 d的健康孕兔，體質(zhì)量（3.2+0.3）kg（上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)2007001101678）。

1.1.2 試劑與儀器 ALT、AST、TC、TG 、LDL－C、HDL－C檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上?？菩郎锛夹g(shù)研究所。黃芪注射液（成都地奧泓制藥廠川衛(wèi)藥準(zhǔn)字）。S－450型氧氣監(jiān)測(cè)儀（美國(guó)IST－AIM公司）。由福建省晉江東石東埕制氧廠提供濃度＞99%的壓縮氧氣、氮?dú)狻?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與給藥 將24只孕兔按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、黃芪組，每組8只［7］。模型組和黃芪組孕兔均放于缺氧艙內(nèi)［氧濃度（12±0.1）%］，4 h/d，對(duì)照組孕兔放于等體積艙內(nèi)（O2含量21%），4 h/d。模型組和對(duì)照組給予耳緣靜脈注射生理鹽水約1.5 mL/d，黃芪組給予耳緣靜脈注射黃芪注射液［1 g/（kg·d）］約1.5 mL/d，每日1次，直至分娩。子代兔喂養(yǎng)到6月末（即成年期），隨機(jī)每組每只孕兔的子代中取雄兔1只，按照上述同樣方法分組。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo) ①按照試劑說(shuō)明書測(cè)定子代兔血清 ALT、AST、TC、TG 、LDL－C 、HDL－C 水平。②3%戊巴比妥耳緣靜脈麻醉，打空氣針處死子代兔，取直徑約2 cm的肝組織，常規(guī)脫水、石蠟包埋，蘇木素/伊紅（HE）染色，光鏡下觀察肝組織脂肪變性程度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 黃芪對(duì)子代兔肝功能、血脂的影響

結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 子代兔肝功能參數(shù) （U/L）

表1 子代兔肝功能參數(shù) （U/L）

組別 n ALT AST對(duì)照組 8 48.50±4.07 67.44±6.42模型組 8 49.24±3.23 70.88±2.53黃芪組 8 48.99±2.78 68.25±3.37

表2 黃芪對(duì)子代兔血脂的改善情況 （mmol/L）

表2 黃芪對(duì)子代兔血脂的改善情況 （mmol/L）

注：與對(duì)照組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

組別 n TG TC HDL－C LDL－C對(duì)照組 8 0.94±0.14 2.78±0.20 1.25±0.13 1.01±0.25模型組 8 1.06±0.111） 3.41±0.111） 0.69±0.111） 10.25±2.611）黃芪組 8 0.94±0.081）2） 2.95±0.292） 0.98±0.061）2） 2.05±0.331）2）

由表1可以看出，3組之間，兩兩比較，肝功能ALT、AST 水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由表2可以看出，模型組及黃芪組TG、TC、LDL－C均較對(duì)照組高，HDL－C 降低（P＜0.01）；黃芪組TG、TC、LDL－C 均較模型組降低，HDL－C 升高（P＜0.01）。黃芪組TC較對(duì)照組有增高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.114，P＞0.05）。

2.2 黃芪干預(yù)對(duì)子代兔肝組織的影響

對(duì)照組肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，胞質(zhì)均勻。模型組呈輕中度脂肪變性，肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顯現(xiàn)大小不一的脂滴空泡，無(wú)明顯氣球樣變、炎癥、壞死表現(xiàn)。黃芪組肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂滴數(shù)量較模型組減少。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 肝組織（HE染色×40倍）光鏡下形態(tài)表現(xiàn)

2.3 黃芪干預(yù)對(duì)子代成年兔肝細(xì)胞脂肪變性損傷的影響

對(duì)照組均無(wú)脂肪變性；模型組均出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性，但以輕、中度為主；黃芪組介于兩組之間。3組之間肝細(xì)胞脂肪變性程度采用秩和檢驗(yàn)兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 黃芪的干預(yù)對(duì)子代成年兔肝細(xì)胞脂肪變性的影響

3 討論

成年疾病胎兒起源學(xué)說(shuō)認(rèn)為，胎兒在宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程的關(guān)鍵時(shí)期受到特定損傷和刺激（比如宮內(nèi)缺氧）后，可改變細(xì)胞表型平衡，或誘導(dǎo)妊娠期不適合的基因表達(dá)，引起組織器官結(jié)構(gòu)和功能的改變，這些改變或許永久存在，導(dǎo)致成年后可能產(chǎn)生不同的器官損害［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組 TG、TC、LDL－C 均較對(duì)照組升高，HDL－C 低（P＜0.01）；宮內(nèi)缺氧組肝細(xì)胞脂肪變性程度與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說(shuō)明宮內(nèi)缺氧增加了成年后NAFLD發(fā)生的易感性。其機(jī)制可能是，宮內(nèi)缺氧引起適應(yīng)性應(yīng)激反應(yīng)，誘導(dǎo)子代基因改變，引起成年后腎素－血管緊張素系統(tǒng)（RAS）更易激活［9］。而腎素－血管緊張素系統(tǒng)在胰島素抵抗的發(fā)生中起著重要的作用［10］，胰島素抵抗又是NAFLD發(fā)生的重要因素［11］，進(jìn)而導(dǎo)致成年后NAFLD易感性增加。

黃芪味甘、性微溫，歸脾肺經(jīng)。能補(bǔ)中益氣、升陽(yáng)舉陷，固本以安胎；能補(bǔ)五臟之氣虛，補(bǔ)氣以生血，活血以通調(diào)經(jīng)絡(luò)血脈［12－13］。黃芪用藥歷史悠久，古代胎動(dòng)不安、胎萎不長(zhǎng)者多用黃芪，《景岳全書》《產(chǎn)科發(fā)蒙》中均有記載。黃芪是一種天然的抗氧化劑，廣泛用于治療心腦血管缺血缺氧性疾病、胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩及胎兒窘迫等。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與宮內(nèi)缺氧組比較，黃芪組肝臟脂肪變性程度顯著減輕；血清 TG、TC、LDL－C 降低，HDL－C 增高。這一結(jié)果表明，對(duì)于宮內(nèi)慢性缺氧誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性損傷，黃芪在一定程度上能夠減輕其損傷反應(yīng)。其機(jī)制可能與黃芪能夠減輕代謝紊亂，改善細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌，抗生物氧化等［14－15］多個(gè)途徑有關(guān)，確切機(jī)制尚待進(jìn)一步的深入研究和探討。

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（編輯：張世霞）

Protective effect of Astragalus on nonalcoholicfatty liver induced by chronic intrauterine hypoxia in adult rabbit offspring

Zhang Luyun1，Cui Minlu2
（1.TCM Hospital of Xianju，Taizhou Zhejiang 317300；2.The Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University，Quanzhou Fujian 362000）

Objective：To investigate the effect of chronic intrauterine hypoxia on nonalcoholic fatty liver disease in adult rabbit offspring and the protective function of Astragalus.Methods：The pregnant rabbits were randomly divided into normal control group，Astragalus group and model group.After delivery，one male offspring rabbit per litter was selected and divided into 3 groups respectively.At sixth month of age，serum alanine transaminase（ALT）、aspartate transaminase（AST）、triglyceride（TG）、cholesterol（TC）、low density lipoprotein－cholesterol（LDL－C），high density lipoprotein－cholesterol（HDL－C）were measured.The pathological changes of liver tissue were observed.Results：Compared with model group，the level of serum TG、TC、LDL－C in Astragalus group were significantly decreased，but the level of serum HDL－C was increased in Astragalus group（P＜0.01）.The degree of hepatic steatosis observed under light microscope by HE staining technique was weakened in Astragalus group.Conclusion：Astragalus can reduce the damage of nonalcoholic fatty liver disease in adult rabbit offspring which is caused by chronic intrauterine hypoxia.

fatty liver；chronic disease；Astragalus；protective effect

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0009-03

國(guó)家自然科學(xué)基金（81271587）

張路云，住院醫(yī)師，碩士，E－mail：zhangluyun2006@163.com

崔閩魯，主任醫(yī)師，E－mail：cuiminlu2@126.com