溫建英，李文偉，任 蕾，王京康

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

紫外分光光度法測(cè)定晉產(chǎn)白芍芍藥苷含量

溫建英，李文偉，任 蕾，王京康

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

目的：建立晉產(chǎn)白芍中芍藥苷含量的紫外分光光度測(cè)定方法。方法：用芍藥苷為對(duì)照品，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸（40∶10∶5∶0.2）為展開劑，用5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，采用紫外分光光度法對(duì)白芍中芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：在230 nm處測(cè)得白芍中芍藥苷含量為4.230%，回歸方程為y=21.918x+0.059 2，芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品在0.008 176～0.040 880 mg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，加樣回收率為95.42%，RSD為2.65%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可靠、準(zhǔn)確度高，適用于白芍的質(zhì)量控制。

白芍；芍藥苷的含量測(cè)定；紫外分光光度法

白芍（Paeonia lactiflora）是毛茛科植物芍藥去了皮的干燥根。白芍主產(chǎn)于浙江、安徽等地［1-2］，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽等功效，用于治療自汗、血虛萎黃、月經(jīng)不調(diào)、腹痛等［3］。國(guó)內(nèi)外對(duì)白芍的研究應(yīng)用主要集中在化學(xué)成分、質(zhì)量控制、藥理作用、抗氧化應(yīng)用等方面。研究表明白芍主要有效成分為白芍總苷，70%以上為芍藥苷（paeoniflorin），具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈流量、抗急性心肌缺血、降低血壓等藥理作用［4-5］。白芍的藥用價(jià)值高，蘊(yùn)藏著巨大的開發(fā)潛力。近年來，人工種植白芍方法不斷改進(jìn)推廣，在山西也成立了白芍的人工種植基地。本文就山西本地所產(chǎn)白芍的指征性成分芍藥苷的含量進(jìn)行測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

QE-300克粉碎機(jī)（浙江屹立工貿(mào)有限公司），JA4003精密電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），十萬分之一分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：FA224），HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，TU-1810紫外可見分光光度計(jì)，硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠，規(guī)格：50 ×100 mm），定性毛細(xì)管（上海積裕實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，規(guī)格：0.3×100），PHS-4C+智能酸度計(jì)。

1.2 藥材與試劑

白芍，產(chǎn)自山西省靜樂縣杜家村，經(jīng)山西中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室王兵老師鑒定，本實(shí)驗(yàn)所用芍藥為正品。芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院），三吡啶三吖嗪 （tripyridyl-triazine，TPTZ，Aladdin）（上海伊卡生物技術(shù)有限公司），硫酸亞鐵、無水乙醇、三氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、甲酸、香草醛硫酸均為分析純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 白芍中芍藥苷的薄層定性鑒別

取白芍粉末0.5 g左右，加50%乙醇10 mL，超聲15 min，用濾紙濾過，于蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)右掖? mL溶解，作為供試品；再取芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品加50%乙醇制成1 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別用定性的毛細(xì)管各吸2管，交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸（40∶10∶5∶0.2）為展開劑，展開完成取出，晾干，用5%香草醛硫酸溶液噴灑，以吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)熱至有顯色斑點(diǎn)出現(xiàn)。在色譜中，對(duì)照品和供試品在相同的位置上有相同大小的淺藍(lán)色斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

圖1薄層色譜圖

由圖1可見，兩份樣品與對(duì)照品在相同的位置上有相同大小的淺藍(lán)色斑點(diǎn)，說明樣品中含有芍藥苷成分。

2.2 白芍中芍藥苷的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品5.11 mg，以50%乙醇溶液定容至25 mL容量瓶中，配制成0.204 4 mg/mL濃度的對(duì)照品溶液，搖勻，靜置。得芍藥苷對(duì)照品溶液。

2.2.2 最大吸收波長(zhǎng)的確定 取對(duì)照品溶液適量，以 50%（V/V）乙醇溶液為參比，于 200～600 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)。結(jié)果見圖2。芍藥苷在230 nm處有最大吸收波長(zhǎng)。

圖2 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密移取2.2.1項(xiàng)下芍藥苷對(duì)照品 0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2 mL于10 mL于5個(gè)容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，并以其作為參比，在230 nm處測(cè)定各溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)（y），芍藥苷濃度為橫坐標(biāo)（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如圖3。

芍藥苷回歸方程為y=21.918x+0.059 2，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5。由圖3可知，芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品在0.008 176～0.040 880 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖3 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.4 供試品溶液的制備 白芍飲片粉碎，過80目篩。精密稱取白芍粉末1.000 g于250 mL錐形瓶中，加入50%乙醇50 mL，采用超聲提取法，提取33 min。減壓抽濾，50%乙醇定容至100 mL，搖勻，吸取1 mL原溶液于50 mL容量瓶中，50%乙醇定容至刻度，得樣品溶液，即供試品溶液。將一定量的白芍供試品溶液全波長(zhǎng)掃描，來確認(rèn)最大吸收波長(zhǎng)。結(jié)果白芍的供試品溶液在230 nm處有最大吸收波長(zhǎng)。結(jié)果見圖4。

圖4 白芍供試品溶液的光譜圖

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取適量的供試品溶液，以50%（V/V）乙醇溶液為參比，于230 nm處測(cè)定吸光度，平行測(cè)定5次代入回歸方程計(jì)算芍藥苷含量。結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果：該RSD值為0.27%，證明儀器精密度良好。2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取適量的供試品溶液于試管中，分別在 0 h，2 h，4 h，8 h，12 h 測(cè)定吸光度值。結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果：該RSD值為0.64%，證明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 稱白芍粉末5份，每份1 g，精密稱定，用2.2.4法制備供試品溶液，在230nm下測(cè)定其相應(yīng)的吸光度值，并計(jì)算芍藥苷含量。結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果：含量的RSD值為2.88%，證明該實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取5份已知含量的樣品，每份約50 mg，精密稱定，分別加入定量芍藥苷對(duì)照品溶液（0.204 4 mg/mL）10 mL，在 230 nm處檢測(cè)吸光度值，計(jì)算平均回收率。結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果：平均回收率為95.42%，RSD為2.65%，證明本法回收率良好，測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確。

2.2.9 含量測(cè)定 平行精密稱定白芍粉末5份，各約1.000 g，依照2.2.4制備供試品溶液，以50%乙醇溶液為參比，于230 nm處測(cè)定吸光度值，計(jì)算白芍飲片中芍藥苷含量。結(jié)果見表5。經(jīng)測(cè)定吸光度均值為0.245 2，代入回歸方程，求得白芍芍藥苷含量為0.008 461 mg/mL，占白芍藥材粉末百分比為4.230%。

表5 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

通過紫外分光光度法對(duì)山西本地所產(chǎn)白芍飲片中的芍藥苷的含量進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)測(cè)定芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品在0.008 176～0.040 88 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，白芍芍藥苷含量為4.230%，符合《中國(guó)藥典》的規(guī)定。經(jīng)相應(yīng)的方法學(xué)考察，結(jié)果均較為理想。用紫外分光光度法測(cè)定白芍中芍藥苷的含量，該方法穩(wěn)定可靠，準(zhǔn)確度高，且操作簡(jiǎn)便，可用于白芍中芍藥苷含量的測(cè)定。

［1］中國(guó)藥材公司，測(cè)繪科學(xué)研究院.中國(guó)藥材資源地圖集［M］.北京：科學(xué)出版社，1994：14-15，35-36.

［2］胡世林.中國(guó)道地藥材原色圖說［M］.濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1998：112，246.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：6.

［4］張曉燕，工金輝，李銑.白芍的化學(xué)成分研究［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，18（1）：30-32.

［5］劉鷹翔，馬玉卓.白芍的化學(xué)成分和藥理研究進(jìn)展［J］.中草藥，1995，26（8）：437-440.

（編輯：張世霞）

Content determination of Paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba from Shanxi by ultraviolet spectrophotometry

Wen Jianying，Li Wenwei，Ren Lei，Wang Jingkang
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To establish a method for determination of Paeoniflorin in Radix Paeonian Alba of Shanxi Province.Methods：The content of peony paeoniflorin was detected by UV with paeoniflorin as reference substance.The solvent system trichloromethane-methanol-ethyl acetate-formic acid（40∶2∶5∶0.2）was used as a developer and 5%vanillin aldehyde sulfuric acid as the spray reagent.Results：The content of Paeoniflorin in the samples was 4.230%.On the basis of statistical analyseso，a regressive equation between concentration（x）and absorbance（y）was established as below：y=21.918x+0.059 2.The standard curve of Paeoniflorin was linear in the concentration range of 0.008 176 to 0.040 88 mg/mL.The average recovery was 95.42%with the relative standard deviation（RSD）2.65%.Conclusion：The method is simple，stable and reliable，accurate and suitable for the quality control of Radix Paeoniae Alba.

Radix Paeonian Alba；determination of the content of the Paeoniflorin；ultraviolet spectrophotometry

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0014-03

溫建英，助教，碩士，E-mail：50285213@qq.com