王改平，倪夢夢，裴香萍，孫 琳，魏孟玲，劉紅鳳

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.山西大醫(yī)院，山西 太原030032）

高效液相色譜法測定清熱止痛膠囊中蒙花苷的含量

王改平1，倪夢夢1，裴香萍1，孫 琳1，魏孟玲2，劉紅鳳2

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.山西大醫(yī)院，山西 太原030032）

●中醫(yī)藥學(xué)在世界上首先發(fā)現(xiàn)了中藥并首創(chuàng)了方劑，醫(yī)方是“除疾保性命之術(shù)”，而劑則有“調(diào)百藥齊，和之所宜”之功。采用現(xiàn)代藥物制劑技術(shù)重新研究并升華古典方劑之術(shù)，開創(chuàng)未來藥物制劑技術(shù)和新劑型藥物研究的全新思維和方向。

目的：研究清熱止痛膠囊的定量控制方法。方法：采用C18柱，流動相為甲醇-水-冰醋酸溶液（26∶23∶1），檢測波長為 334 nm，柱溫為 25 ℃，進樣量 10 μL。結(jié)果：蒙花苷在 0.092 μg~0.736 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 6），平均回收率100.29%，RSD=2.20%（n=6）。結(jié)論：該方法簡便易行，重復(fù)性好，可為清熱止痛膠囊的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

高效液相色譜法；清熱止痛膠囊；蒙花苷

清熱止痛膠囊來源于醫(yī)院制劑，主要由野菊花、延胡索、敗醬草、大血藤、紫花地丁、蒲公英、當(dāng)歸、川芎、小茴香等十二味藥材組成，具有清熱解毒、散寒止痛之功效，主要用于治療急慢性盆腔炎、盆腔炎性包塊（月經(jīng)期和孕婦慎用）。方中野菊花、延胡索為君藥，野菊花清熱解毒，延胡索活血止痛，共奏涼血清熱、活血止痛之功［1］，為盆腔炎熱毒熾盛而設(shè)。臣藥中清熱藥有敗醬草、大血藤、紫花地丁、蒲公英等，其中敗醬草清熱解毒、消癰排膿、祛瘀止痛［2］，大血藤清熱解毒、理氣活血、祛風(fēng)殺蟲、消腫散結(jié)［3］，蒲公英、紫花地丁均具清熱解毒之功，為治療癰瘡疔毒之要藥［4］。方中配伍活血化瘀藥當(dāng)歸以及行氣藥川芎，共奏清熱止痛、活血行氣之功。小茴香散寒止痛、理氣和胃，有助于緩解痙攣、減輕疼痛［5］，佐制以上藥物寒涼太過。全方以清熱止痛作用為主，兼行氣。為了有效控制其質(zhì)量，為其臨床應(yīng)用提供療效保證，實驗采用高效液相色譜法測定清熱止痛膠囊中蒙花苷的含量。

1 儀器與試藥

美國Waters2996高效液相色譜儀；KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；馬頭牌架盤藥物天平BP-Ⅱ型（上海醫(yī)療器械八廠）。

對照品蒙花苷（成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-141221207）；樣品清熱止痛膠囊（醫(yī)院制劑，批號：201501，201502，201503，201504，201505，201506）；甲醇（色譜純，sigma科技有限公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水-冰醋酸（26∶23∶1）為流動相，柱溫為25 ℃，蒙花苷檢測波長為334 nm，理論塔板數(shù)按蒙花苷峰計算應(yīng)不低于3 000。進樣量：10 μL。結(jié)果顯示：陰性對照在蒙花苷保留時間處無干擾峰出現(xiàn)，結(jié)果見圖1~圖3。

圖1 對照品溶液色譜圖（蒙花苷）

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性溶液色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

取蒙花苷對照品（MUST-141221207批）適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1 mL含46 μg蒙花苷的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取清熱止痛膠囊（201501批）粉末（過三號篩）約0.6 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇100 mL，稱重，加熱回流3 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減去的重量，搖勻后經(jīng)孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液制備

分別按處方比例及制劑制備工藝制備不含野菊花的陰性樣品，再按“2.3”項下方法制備，即得。

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密吸取蒙花苷對照品（MUST-141221207批，濃度為 0.046 mg/mL）2μL、4μL、8μL、12μL、16 μL，注入高效液相色譜儀，以進樣量 X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)作圖，并進行線性回歸，得回歸方程為Y=6 000 000X+71 625，r=0.999 6，表明蒙花苷在 0.092 μg～0.736 μg 范圍內(nèi)進樣量與峰面積線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

表1 蒙花苷對照品溶液線性關(guān)系結(jié)果

2.6 精密度試驗

取0.046 mg/mL蒙花苷對照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進樣6次，測定峰面積，結(jié)果RSD=0.22%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品（201501批）溶液，按含量測定方法，分別在 0 h、2 h、4 h、8 h、12 h 進樣測定，RSD=1.13%。結(jié)果表明，蒙花苷在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批號（201501批）樣品6份，按“2.3”項下方法制備，精密吸取10 μL，按給定的色譜條件進樣分析，測得平均含量2.536 mg/g，RSD=1.29%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

稱取（201501批）樣品6份，每份約0.3 g，精密稱定，另精密吸取對照品溶液（0.046 mg/mL）16 mL置錐形瓶中，依“2.3”項方法制備。平均回收率100.29%，RSD=2.20%。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗

2.10 樣品含量測定

取樣品6批，按“2.3”項方法操作，分別制備供試品溶液，按上述色譜條件測定含量，結(jié)果見表3。

由表3可知，每粒膠囊蒙花苷的平均含量為2.568 mg/g，考慮大生產(chǎn)的因素，向下浮動20%，暫規(guī)定每粒膠囊蒙花苷的含量不得低于2.054 mg/g。

3 討論

實驗中流動相選擇曾采用乙腈-0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液-磷酸（30∶70∶0.06）溶液［6］，色譜峰未達到基線分離。后經(jīng)多次實驗摸索，采用甲醇-水-冰醋酸（26∶23∶1）為流動相，色譜峰分離效果較好，無前延和拖尾現(xiàn)象。

表3 樣品含量測定

實驗中對供試品溶液進行了提取比較，采用甲醇、70%甲醇、50%甲醇等不同提取溶劑，并考察了超聲提取 30 min、45 min、60 min 以及回流 1 h、2 h、3 h的不同提取方法，最終確定文中的制備方法。

在對樣品進行含量測定時，樣品中蒙花苷含量不均，推測可能與原料的產(chǎn)地、藥材二次提取、工藝等有關(guān)。

蒙花苷為清熱止痛膠囊中野菊花中的主要成分，本實驗研究表明，以蒙花苷為指標(biāo)的含量測定方法專屬性高，精密度及重復(fù)性良好，簡單易行，可作為清熱止痛膠囊的含量測定方法。

［1］尹耀東.微波聯(lián)合紅藤湯灌腸治療盆腔炎 75 例［J］.陜西中醫(yī)，2012，33（11）：1 448-1 449.

［2］高學(xué)敏.中藥學(xué)［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2002：140-142.

［3］中華本草編委會.中華本草［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1998：571-574.

［4］王倩.五味消毒飲臨床應(yīng)用研究［J］.中國民康醫(yī)學(xué)，2012，24（24）：2 988-3 007.

［5］付起鳳，張艷麗，許樹軍，等.小茴香化學(xué)成分及藥理作用的研究進展［J］.中醫(yī)藥信息，2008，25（5）：24-26.

［6］盧丹，呂高榮，鄒節(jié)明.HPLC 測定玉葉解毒顆粒中蒙花苷含量［J］.中國中藥雜志，2005，30（3）：32-33.

（編輯：張世霞）

Determination of linarin in Qingre Zhitong capsules by HPLC

Wang Gaiping1，Ni Mengmeng1，Pei Xiangping1，Sun Lin1，Wei Mengling2，Liu Hongfeng2
（1.Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan Shanxi 030024；2.Shanxi Dayi Hospital，Taiyuan Shanxi 030032）

Objective：To establish a method for determination of linarin in Qingre Zhitong capsules.Methods：The analysis was performed on a Diamonsil-C18column with a mobile phase of methanol-water-glacial acetic acid （26∶23∶1）solution at a detection wavelength of 334 nm，column temperature was 25 ℃，injection volumes of sample were 10 μL.Results：The content of linarin showed a good linear relationship in the range of 0.092 μg~0.736 μg（r=0.999 6）.The average recovery rate was 100.29%，RSD=2.20%（n=6）.Conclusion：This method is simple，sensitive，accurate and reproducible.It can provide the experimental basis for quality control of Qingre Zhitong capsules.

HPLC；Qingre Zhitong capsules；linarin

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0012-03

王改平，主管中藥師，在職研究生，E-mail：122514746@sohu.com

裴香萍，副教授，碩士，E-mail：peixp69@163.com