丁衛(wèi)平 李晶

·個(gè)例報(bào)告·

人抗鼠抗體干擾導(dǎo)致獻(xiàn)血者HBsAg、HIV酶免檢測(cè)假陽(yáng)性1例

丁衛(wèi)平 李晶

獻(xiàn)血者 人抗鼠抗體 酶免假陽(yáng)性

采供血機(jī)構(gòu)對(duì)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本采用血清學(xué)技術(shù)和核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、梅毒螺旋體（TP）感染標(biāo)志物的檢測(cè)[1]。目前核酸檢測(cè)尚未全面實(shí)施，國(guó)內(nèi)血站多數(shù)采用2次酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），ELISA自動(dòng)化程度高、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，適用于大批量標(biāo)本測(cè)定，但ELISA實(shí)驗(yàn)原理會(huì)因檢測(cè)試劑批次的不同、獻(xiàn)血者免疫學(xué)狀態(tài)不同或體內(nèi)干擾物質(zhì)等因素干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果[2，3]。現(xiàn)于2015年10月發(fā)現(xiàn)1例因人抗鼠抗體（HAMAs）干擾造成獻(xiàn)血者HBsAg、HIV 雙項(xiàng)ELISA檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性的情況，報(bào)告如下。

對(duì)象與方法

1 對(duì)象 女，45歲，寶雞山區(qū)農(nóng)民。于2015年10月13日首次自愿無(wú)償獻(xiàn)血，經(jīng)健康咨詢，符合獻(xiàn)血要求。獻(xiàn)血者既往健康，體格檢查：體溫36.2℃，血壓125/80 mmHg，心率70次/min，初篩HBsAg金標(biāo)快篩陰性，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）13 U/L，符合《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》GB18467-2011獻(xiàn)血者健康檢查要求。獻(xiàn)血者自愿獻(xiàn)血400 ml，靜脈穿刺順利，獻(xiàn)血過(guò)程中無(wú)不良反應(yīng)。

2 方法 2015年10月14日獻(xiàn)血者EDTA抗凝標(biāo)本在血站實(shí)驗(yàn)室采用全自動(dòng)加樣系統(tǒng)（TECAN EVO-150），全自動(dòng)酶免后處理系統(tǒng)（SIEMENS BEPIII），用兩家酶免試劑檢測(cè)，其中HBsAg 、HIV項(xiàng)目?jī)杉揖鶠殛?yáng)性。HBsAg采用上?？迫A、北京萬(wàn)泰兩步法試劑，HIV采用法國(guó)伯樂(lè)、北京萬(wàn)泰第4代抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑。用HBsAg 、HIV膠體金試驗(yàn)（上?？迫A試劑）均為陰性，羅氏核酸檢測(cè)（PCR）HBV/HCV/HIV聯(lián)合混檢和單檢均為陰性。為驗(yàn)證是否標(biāo)本留取有誤，對(duì)獻(xiàn)血者原袋血漿標(biāo)本也進(jìn)行了酶免、膠體金、核酸檢測(cè)。

結(jié) 果

1 獻(xiàn)血者的標(biāo)本、原袋血漿檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。獻(xiàn)血者標(biāo)本與原袋血漿結(jié)果一致，排除標(biāo)本留取錯(cuò)誤，懷疑獻(xiàn)血者體內(nèi)有非特異性干擾物質(zhì)影響了酶免試驗(yàn)，造成假陽(yáng)性結(jié)果。與獻(xiàn)血者溝通聯(lián)系，證實(shí)其為山區(qū)畜牧戶，飼養(yǎng)羊，羊圈中老鼠較多，獻(xiàn)血者3年前曾被老鼠咬過(guò)。根據(jù)上述信息，初步考慮可能因人抗鼠抗體（HAMAs）干擾造成HBsAg、HIV假陽(yáng)性，HAMAs免疫干擾主要表現(xiàn)在兩步夾心法為原理的免疫分析中[4]，本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HBsAg采用雙抗體夾心法，HIV為ELISA雙抗原及雙抗體夾心法。為驗(yàn)證分析結(jié)論，將獻(xiàn)血者血漿標(biāo)本送至寶雞市疾病預(yù)防控制中心做人抗鼠抗體ELISA試驗(yàn)和HIV確證試驗(yàn)（Western blot）。疾控中心采用R&D systems HAMA ELISA分析試劑盒，測(cè)定該獻(xiàn)血者血漿HAMAs濃度為30.5 ng/ml（正常參考值：5.0～12.5 ng/ml），采用北京萬(wàn)泰HIV1+2型抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果為陰性。2 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。將HBsAg試驗(yàn)第2步所加酶用同廠家HIV的酶替代，HIV試驗(yàn)第2步所加酶用同廠家HBsAg的酶替代，其余陰陽(yáng)性對(duì)照及質(zhì)控孔正常加入。在原本應(yīng)結(jié)果為陰性的試驗(yàn)中出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，簡(jiǎn)單證實(shí)對(duì)酶免試驗(yàn)干擾物質(zhì)的存在。

表2 獻(xiàn)血者HBsAg 、HIV試驗(yàn)酶交叉檢測(cè)結(jié)果

綜上結(jié)果證實(shí)，本例獻(xiàn)血者HBsAg 、HIV項(xiàng)目雙陽(yáng)性結(jié)果是由HAMAs引起，與輸血相關(guān)傳染病無(wú)關(guān)。

討 論

自動(dòng)化、信息化程度較高的酶免全自動(dòng)分析系統(tǒng)被絕大多數(shù)采供血機(jī)構(gòu)使用，但ELISA測(cè)定會(huì)受諸多因素干擾，如試劑批次不同、免疫狀態(tài)不同、標(biāo)本內(nèi)源性或外源性干擾物質(zhì)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，造成假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。內(nèi)源性干擾因素一般包括類(lèi)風(fēng)濕因子（RF），補(bǔ)體，高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體，某些自身抗體，人抗鼠抗體（HAMAs）等。HAMAs是針對(duì)特定免疫原的高親和力、特異性多克隆抗體，包括IgG、IgA、IgM及少部分IgE，有動(dòng)物免疫球蛋白刺激產(chǎn)生的獨(dú)特型及抗同種型兩種抗體，對(duì)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾作用是在雙位點(diǎn)夾心免疫測(cè)定中，標(biāo)本中存在的HAMAs在鼠Ig捕獲抗體與鼠Ig標(biāo)記物之間起橋聯(lián)作用而對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾進(jìn)而導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。有報(bào)道HAMAs可干擾疾病診斷，影響藥物療效監(jiān)測(cè)及免疫制劑的治療，在患者標(biāo)本的發(fā)生率為30%～40%[5]，在獻(xiàn)血者標(biāo)本為1%～2%[6]。本例酶免檢測(cè)HBsAg、HIV假陽(yáng)性結(jié)果源于獻(xiàn)血者體內(nèi)有HAMAs。我站規(guī)定，HIV初篩陽(yáng)性標(biāo)本送市疾控中心做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)前須做膠體金快篩試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)酶免與膠體金實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符，隨后進(jìn)行核酸檢測(cè)，從而發(fā)現(xiàn)此例獻(xiàn)血者假陽(yáng)性。

綜上所述，建議血站應(yīng)對(duì)輸血相關(guān)傳染病血清學(xué)檢測(cè)反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，確認(rèn)方法分兩類(lèi)：一是特異性抗原確認(rèn)的中和試驗(yàn)如HBsAg，二是特異性抗體確認(rèn)的免疫印跡或熒光抗體試驗(yàn)，如抗-HCV，抗-HIV和梅毒抗體。當(dāng)酶免檢測(cè)出現(xiàn)雙項(xiàng)或多項(xiàng)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用另一種檢測(cè)方法來(lái)驗(yàn)證是否存在干擾因素，若兩種方法檢測(cè)結(jié)果不符，懷疑存在HAMAs干擾時(shí)，可采?。孩倥c獻(xiàn)血者溝通是否存在接觸史，送檢標(biāo)本有無(wú)檢測(cè)懷疑抗體；②樣本梯度稀釋試驗(yàn)：樣本系列稀釋后測(cè)得的數(shù)值不成比例，呈非線性關(guān)系，提示存在干擾物；③酶免單克隆抗體試劑大多使用鼠抗體來(lái)標(biāo)記，可將同一品牌試劑不同項(xiàng)目的酶交叉使用，看是否存在干擾。

HAMAs是臨床較常見(jiàn)的人抗動(dòng)物循環(huán)抗體，會(huì)對(duì)免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生重大影響[7]。建議試劑廠家在研制夾心法免疫測(cè)定試劑盒時(shí)應(yīng)采取相應(yīng)措施，減少HAMAs干擾，如使用鼠單克隆抗體，并在試劑說(shuō)明書(shū)中對(duì)HAMAs干擾進(jìn)行說(shuō)明。

1 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 血站技術(shù)操作規(guī)程[S] .2015.

2 段友斌，寸偉.ELISA實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控失控的回顧性分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2014，16（1）：72-74.

3 李金明.感染性疾病血清學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)重視對(duì)弱反應(yīng)性標(biāo)本的確認(rèn)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（7）：577-580.

4 龔躍云，歐陽(yáng)芳，吳豫 .新兩步法和一步法檢測(cè)乙肝表面抗原的比較[J]. 臨床輸血與檢驗(yàn)，2012，14（3）：241-243.

5 楊嫣鵲.HIV酶免試劑在獻(xiàn)血者標(biāo)本重點(diǎn)監(jiān)測(cè)效果分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2015，17（4）：370-371.

6 陳會(huì)強(qiáng).人抗鼠抗體HAMAs干擾導(dǎo)致BNP假陽(yáng)性一例[D].浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院 浙江大學(xué)，2010（碩士論文）.

7 王志剛，曹浩強(qiáng).人抗鼠抗體效應(yīng)對(duì)臨床免疫學(xué)檢測(cè)的影響[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30（1）：68-70.

（本文編輯：姚萍）

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1671-2587（2017）04-0404-02

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.04.027 作者單位：721006 陜西省寶雞市中心血站 作者簡(jiǎn)介：丁衛(wèi)平（1979–），女，陜西寶雞人，主管檢驗(yàn)師，主要從事血液檢測(cè)工作，（Tel）13571183542。

ELISA檢測(cè) 膠體金檢測(cè)核酸檢測(cè)ALT（U/L）科華試劑混檢單檢結(jié)果S/CO值結(jié)果S/CO值結(jié)果S/CO值結(jié)果S/CO值HBsAg HIV HBsAgHIV HBV/HCV/ HIV萬(wàn)泰試劑 科華試劑伯樂(lè)試劑 萬(wàn)泰試劑科華試劑酶免標(biāo)本陽(yáng)性12.0陽(yáng)性2.19陽(yáng)性6.76陽(yáng)性16.65陰性陰性 陰性 陰性 14原袋血漿陽(yáng)性11.5陽(yáng)性2.15陽(yáng)性6.58 陽(yáng)性15.59陰性 陰性 陰性 陰性 16

2016-09-30）