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3.0 T BOLD-fMRI評(píng)價(jià)燈盞花素對(duì)大鼠對(duì)比劑急性腎損害的抵制作用

2017-08-07 21:52周懂晶劉玉品陳志遠(yuǎn)汪印強(qiáng)冉鵬程易華
關(guān)鍵詞:花素髓質(zhì)燈盞

周懂晶,劉玉品,陳志遠(yuǎn),汪印強(qiáng),冉鵬程,易華

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院影像科,廣東廣州510120;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室,廣東廣州510120)

3.0 T BOLD-fMRI評(píng)價(jià)燈盞花素對(duì)大鼠對(duì)比劑急性腎損害的抵制作用

周懂晶1,劉玉品1,陳志遠(yuǎn)1,汪印強(qiáng)1,冉鵬程1,易華2

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院影像科,廣東廣州510120;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室,廣東廣州510120)

目的:應(yīng)用3.0 T BOLD-fMRI評(píng)估燈盞花素對(duì)大鼠對(duì)比劑急性腎損害(CI-AKI)的抵制作用。方法:將60只SD大鼠隨機(jī)分為燈盞花素組和對(duì)照組各30只,燈盞花素組于注射對(duì)比劑前后連續(xù)注射燈盞花素注射液7 d(1次/d),對(duì)照組于注射對(duì)比劑前后連續(xù)注射生理鹽水7 d。2組于注射對(duì)比劑前及注射對(duì)比劑后20min、24h、48h、72h和7 d共6個(gè)時(shí)間點(diǎn)行3.0 T BOLD-fMRI掃描,測(cè)量大鼠腎臟外髓部R2*值,取大鼠腎臟病理檢查,HE染色后評(píng)價(jià)外髓部腎小管損傷情況,分析比較2組R2*值及病理?yè)p傷變化。結(jié)果:燈盞花素組注射對(duì)比劑20min后R2*值持續(xù)升高至24 h,48 h回落直至7 d時(shí);對(duì)照組注射對(duì)比劑20min后R2*值升高,持續(xù)至72 h,7 d后回落至注射對(duì)比劑前。注射對(duì)比劑后48、72 h燈盞花素組與對(duì)照組R2*值比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),余時(shí)間點(diǎn)2組R2*值比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。病理結(jié)果表明,對(duì)照組注射對(duì)比劑后20min腎臟外髓部腎小管出現(xiàn)損傷,24~48 h損傷減輕,72 h損傷又加重,但低于20min時(shí),7 d后損傷加重,接近20min組;燈盞花素組注射對(duì)比劑后20min腎臟外髓部腎小管損傷嚴(yán)重,24~48 h損傷減輕,漸低于對(duì)照組損傷程度,72 h損傷又加重,但低于對(duì)照組,7 d后損傷減輕。注射對(duì)比劑后,24 h時(shí)2組損傷差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),余時(shí)間點(diǎn)2組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論:3.0 T BOLD-fMRI可評(píng)估CI-AKI引起的腎髓質(zhì)氧含量的變化,提供定量的R2*值,在一定程度上反映燈盞花素注射液對(duì)大鼠CI-AKI的早期保護(hù)作用。

磁共振成像;燈盞花素;對(duì)比劑急性腎損害;大鼠

對(duì)比劑急性腎損害(contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI)是指對(duì)比劑血管內(nèi)給藥后48~72 h內(nèi)出現(xiàn)、無其他原因的急性腎功能損害性疾病,以血清肌酐較基礎(chǔ)水平升高25%或絕對(duì)值升高0.5mg/dL為診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。自對(duì)比劑應(yīng)用于醫(yī)學(xué)成像以來,因其引起的醫(yī)源性急性腎功能損害也越來越受到關(guān)注,目前已成為醫(yī)源性急性腎功能衰竭的主要原因之一,占急性腎功能衰竭的10%[2-4]。燈盞花素是從菊科飛蓬植物燈盞細(xì)辛中提取的黃酮類成分,主要含燈盞乙素(4,5,6-三羥基黃酮-7葡萄糖醛酸甘)。近年來研究證明,燈盞花素能抑制血小板聚集,改善微循環(huán)障礙,降低血液黏滯度,增加腎血流量,降低腎小球內(nèi)血液高凝狀態(tài),最終起到保護(hù)腎臟的作用[5-6]。但目前應(yīng)用3.0 T BOLD-fMRI探討燈盞花素防治CI-AKI作用機(jī)制的報(bào)道較少,為此本研究探討燈盞花素早期改善CI-AKI方面作用,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料60只雄性SD大鼠,體質(zhì)量260~320 g,隨機(jī)分為燈盞花素組和對(duì)照組各30只。MRI掃描前4 h所有大鼠禁食不禁水,2%戊巴比妥鈉(劑量0.3mL/100 g體質(zhì)量)腹腔麻醉后10~20min行MRI檢查。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審議通過,符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理福利原則。

1.2 儀器與方法使用GE 3.0 T Signa/Excite MRI掃描儀,50mm Birdcage動(dòng)物實(shí)驗(yàn)專用線圈。大鼠取仰臥位,頭先進(jìn),腹部位于線圈中央。MRI掃描序列:橫斷位及冠狀位T1WI FSE-XL/90 TR 500 ms,TE 13.3ms,帶寬15.6 kHz,F(xiàn)OV 10.0 cm×7.0 cm,層厚2.0mm,層距0.20mm,層數(shù)8層,矩陣288×192,NEX 4.0。T2WI FSE-XL/90 TR 3500ms,TE 125.8ms,帶寬62.5 kHz,F(xiàn)OV 10.0 cm×7.5 cm,層厚2.0mm,層距0.20 mm,層數(shù)8層,矩陣288×192,NEX 6.0。BOLD-fMRI掃描序列:多次快速梯度回波(MFGRE)序列:冠狀位,TR 100ms,TE 4.0ms,帶寬31.3 kHz,F(xiàn)OV 10.0 cm×10.0 cm,層厚2.2mm,層距0.20mm,矩陣96×96,NEX 8.0。所有大鼠劑量按0.6mL/100 g體質(zhì)量經(jīng)尾靜脈注射對(duì)比劑碘帕醇(370mgI/mL),注射對(duì)比劑前及注射對(duì)比劑后2~7 d,2組大鼠分別給予尾靜脈注射燈盞花素注射液(湖南恒生制藥股份有限公司)和生理鹽水,1次/d(劑量0.625mL/100 g體質(zhì)量)。于注射對(duì)比劑前、注射后20min、24 h、48 h、72 h及7 d每組各5只大鼠行MRI掃描,掃描結(jié)束后過量麻醉處死大鼠取雙腎行病理檢查。

1.3 BOLD-fMRI圖像處理與數(shù)據(jù)分析使用GE ADW 4.3工作站functool軟件進(jìn)行圖像分析及數(shù)據(jù)處理。每只大鼠每側(cè)腎臟測(cè)量外髓部T2*值。R2*值通過公式R2*=1/T2*計(jì)算得到,R2*值增加提示脫氧血紅蛋白濃度升高,組織氧分壓降低。在皮髓質(zhì)分界清晰的層面,采用手繪法放置ROI,同一腎臟測(cè)量ROI大小、形狀完全一致,大小為1.5~2.5mm2,至少包含5個(gè)像素,避開肉眼所見大血管及偽影,盡可能減少噪聲及部分容積效應(yīng)的影響。測(cè)量每個(gè)腎臟的外髓3個(gè)ROI,取平均值。所有數(shù)值均由同一人測(cè)量。

1.4 大鼠腎臟外髓腎小管病理?yè)p傷評(píng)分制備腎臟冠狀面HE染色切片,參照Paller等[7]的病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):①腎小管明顯擴(kuò)張,細(xì)胞扁平為1分;②刷狀緣損傷為1分,脫落為2分;③細(xì)胞膜大泡為1分,細(xì)胞漿空泡為1分;④間質(zhì)水腫為1分;⑤腎小管腔內(nèi)有脫落的壞死細(xì)胞未形成管型或碎片為1分,形成管型或碎片為2分。由高年資腎病??撇±磲t(yī)師對(duì)腎小管損傷情況進(jìn)行評(píng)價(jià),評(píng)分越高,提示外髓部腎小管損傷越嚴(yán)重。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較2組R2*值,方差不齊時(shí)采用非參數(shù)檢驗(yàn);采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)比較2組病理?yè)p傷評(píng)分差異。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組不同時(shí)段大鼠腎臟外髓部R2*值比較2組不同時(shí)段大鼠腎臟外髓部R2*值見表1,BOLD-fMRI圖見圖1a~1c,圖2a~2c,病理圖見圖1d,2d。

表1 不同時(shí)段大鼠腎臟外髓部R2*值(s-1,±s)

表1 不同時(shí)段大鼠腎臟外髓部R2*值(s-1,±s)

組別對(duì)比劑注射前對(duì)比劑注射后20min 24 h 48 h 72 h 7 d燈盞花素組(n=30)30.80±4.44 32.54±5.78 31.39±4.33 29.55±2.43 28.38±2.81 29.90±10.22對(duì)照組(n=30)28.65±8.25 35.09±7.87 32.63±13.46 31.77±2.74 32.78±3.08 28.67±9.12 Z值-0.151-0.680-0.076-1.170 0.000-0.265 P值>0.05>0.05>0.05<0.05<0.05>0.05

燈盞花素組注射對(duì)比劑20min至24 h R2*值持續(xù)升高,48 h回落直至7 d組;對(duì)照組注射對(duì)比劑20min后R2*值持續(xù)升高至72 h,7 d后回落,等于注射對(duì)比劑前。注射對(duì)比劑后48 h和72 h 2組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),余時(shí)間點(diǎn)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

2.2 2組大鼠腎臟外髓部腎小管病理?yè)p傷評(píng)分比較(表2)注射對(duì)比劑前,2組大鼠腎臟外髓部腎小管均未見明顯損傷。燈盞花素組注射對(duì)比劑后20min腎臟外髓部腎小管嚴(yán)重?fù)p傷,24~48h損傷減輕,漸低于對(duì)照組損傷程度,72h損傷又加重,但仍低于對(duì)照組,7d后損傷減輕。對(duì)照組注射對(duì)比劑后20min腎臟外髓部腎小管即出現(xiàn)損傷,24~48h損傷減輕,72h損傷加重,但低于20min時(shí),7d后損傷加重,接近20min組。注射對(duì)比劑后,24h2組損傷差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),余時(shí)間2組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表2 2組大鼠腎臟外髓部腎小管損傷的病理評(píng)分比較(分,±s)

表2 2組大鼠腎臟外髓部腎小管損傷的病理評(píng)分比較(分,±s)

組別對(duì)比劑注射前對(duì)比劑注射后20min24h48h72h7d Z值<0.001-3.10-1.77-2.70-2.26-3.24 P值>0.05<0.05>0.05<0.05<0.05<0.001燈盞花素組(n=30)1.90±0.786.30±0.833.60±1.361.50±0.512.50±0.511.90±0.91對(duì)照組(n=30)1.80±1.054.30±1.263.60±1.362.40±0.673.90±1.614.30±1.47

圖1對(duì)照組72h大鼠腎臟圖像圖1a大鼠腎臟T2*解剖圖圖1b大鼠腎臟T2*功能圖,T2*值為35.188s圖1c大鼠腎臟T2*融合圖圖1d大鼠腎臟病理圖,部分腎小管上皮細(xì)胞變性壞死,并可見管型(HE×100)圖2燈盞花素組72h大鼠腎臟圖像圖2a大鼠腎臟T2*解剖圖圖2b大鼠腎臟T2*功能圖,T2*值為30.938s圖2c大鼠腎臟T2*融合圖圖2d大鼠腎臟病理圖,腎小管上皮細(xì)胞腫脹,部分壞死脫落(HE×100)

3 討論

碘對(duì)比劑所致的CI-AKI目前已經(jīng)成為醫(yī)源性腎功能衰竭的重要原因之一。本研究利用3.0T BOLD-fMRI技術(shù)分別觀察給予生理鹽水和燈盞花素注射液后大鼠腎臟外髓部R2*值變化,對(duì)照病理?yè)p害程度,以評(píng)價(jià)燈盞花素注射液在早期CI-AKI方面的抵制作用。目前認(rèn)為,CI-AKI是由多種機(jī)制協(xié)同作用,如腎血流下降、滲透效應(yīng)及對(duì)腎小管的直接毒性等,核心機(jī)制是對(duì)比劑引起的腎髓質(zhì)損害。

3.1 CI-AKI病理生理學(xué)機(jī)制CI-AKI病理生理學(xué)機(jī)制主要是注入對(duì)比劑后,影響腎內(nèi)血管活性物質(zhì)分泌,誘導(dǎo)縮血管物質(zhì)分泌增加,舒血管物質(zhì)分泌減少,造成腎內(nèi)血管活性物質(zhì)比例失調(diào),血流重新分布,導(dǎo)致腎髓質(zhì)缺血缺氧,同時(shí),對(duì)比劑自身理化效應(yīng)也起一定作用。腎髓質(zhì)在正常情況下為低氧輸送、高氧耗的易損區(qū)。研究[8]表明,碘對(duì)比劑注入后,可引起腎內(nèi)血流的重新分配,導(dǎo)致腎臟缺血。實(shí)驗(yàn)[9]發(fā)現(xiàn),CI-AKI時(shí)近曲小管受損可導(dǎo)致髓襻升支粗段鈉轉(zhuǎn)運(yùn)增加,同時(shí)導(dǎo)致的滲透性利尿和利鈉,使遠(yuǎn)端腎小管重吸收增加,加重腎組織負(fù)荷,耗氧量增加,使腎髓質(zhì)的氧含量明顯降低,加劇組織缺氧。文獻(xiàn)[10]報(bào)道利用微電極探針發(fā)現(xiàn)注入碘對(duì)比劑后可顯著影響腎臟實(shí)質(zhì)氧化作用,注入離子型高滲透壓碘對(duì)比劑后,腎皮質(zhì)氧分壓從40mmHg(1mmHg=0.133kPa)下降至25mmHg,而髓質(zhì)氧分壓從26mmHg下降至9mmHg,以髓質(zhì)缺氧更顯著。注射碘對(duì)比劑后,大鼠腎臟外髓部腎小管持續(xù)性損傷,上皮細(xì)胞凋亡、壞死,管型形成是CI-AKI特征性病理改變[11]。

3.2 BOLD-fMRI對(duì)腎臟血氧代謝的評(píng)估BOLD-fMRI使用脫氧血紅蛋白作為內(nèi)源性對(duì)比劑,可覆蓋整個(gè)腎臟,并對(duì)腎臟不同區(qū)域行R2*值測(cè)量,其定量指標(biāo)R2*值(R2*=1/T2*)可更加細(xì)化研究腎臟皮質(zhì)、內(nèi)髓及外髓局部氧含量的變化,能有效監(jiān)控、無創(chuàng)性評(píng)價(jià)腎臟髓質(zhì)氧含量變化。R2*值降低提示局部氧含量增加,有助于評(píng)價(jià)生理和(或)病理情況下腎內(nèi)氧含量的變化。2001年P(guān)rasad等[12]利用BOLD-fMRI技術(shù)對(duì)注入碘酞酸鹽對(duì)比劑15min后觀察大鼠腎臟皮髓質(zhì)氧含量的變化。2012年Haneder等[13]利用BOLD-fMRI及DWI行豬腎臟的實(shí)驗(yàn)研究,對(duì)不同滲透壓及黏滯度碘對(duì)比劑優(yōu)維顯和碘克沙醇研究發(fā)現(xiàn),注入碘克沙醇及優(yōu)維顯后R2*值先降低,提示注入碘對(duì)比劑后首先引起腎臟血流增加,氧耗減少,隨后R2*值增加,提示局部血流灌注減少,氧含量減低。劉玉品等[14]利用3.0 T BOLD-fMRI技術(shù)測(cè)得注入對(duì)比劑后大鼠腎臟外髓部R2*值最高,提示脫氧血紅蛋白含量最高,氧合血紅蛋白含量最低,氧含量較低。

本研究中,對(duì)照組大鼠注射對(duì)比劑后20min至72 h,腎臟外髓部R2*值呈持續(xù)升高狀態(tài),病理上大鼠腎臟外髓部間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血,局部腎小管上皮細(xì)胞變性壞死,提示對(duì)比劑導(dǎo)致外髓部腎小管持續(xù)缺血缺氧,大鼠腎臟持續(xù)受損,與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致。

3.3 燈盞花素對(duì)CI-AKI大鼠腎臟的影響本研究顯示燈盞花素組于注射對(duì)比劑后20min~24 h,R2*值升高,提示對(duì)比劑致腎臟外髓部氧含量減低,48 h后R2*值開始回落,以72 h降低最明顯,直至7 d,提示燈盞花素可改善腎臟外髓部局部氧含量,以72 h組氧含量增加最明顯,對(duì)大鼠CI-AKI有一定的抵制作用,推測(cè)該作用可能與燈盞花素減輕對(duì)比劑對(duì)Na+/K+-ATP酶活性抑制作用有關(guān)[16]。

本研究表明,3.0 T BOLD-fMRI技術(shù)測(cè)得的R2*值穩(wěn)定、可靠,能客觀、真實(shí)反映腎臟局部氧含量情況,可評(píng)估CI-AKI引起的腎血氧含量水平變化,在監(jiān)測(cè)注入碘對(duì)比劑后腎臟髓質(zhì)氧分壓氧代謝方面具有較高的價(jià)值,能于腎臟形態(tài)發(fā)生改變前了解腎臟的生理功能變化,早期診斷疾病,具有良好的發(fā)展應(yīng)用前景。本研究不足之處:BOLD-fMRI所測(cè)R2*值臨床應(yīng)用僅為初步階段,受多種因素,如耗氧量、血液供應(yīng)、血細(xì)胞比容、氧分壓和成像技術(shù)等的影響,數(shù)值略有偏差,使得本研究的MRI R2*值所反映的變化趨勢(shì)與病理改變并非完全一致。

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Effect of Breviscapine for contrast-induced acute kidney injury in rats assessed by 3.0 T blood oxygen level dependent function magnetic resonance imaging

ZHOU Dongjing,LIU Yupin,CHEN Zhiyuan,WANG Yinqiang,RAN Pengcheng,YI Hua Department of Radiology,the Second Affiliated Clinical Hospital of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou,510120,China.

Objective:To evaluate the protective effect of breviscapine for contrast agent induced acute kidney injury on rats using 3.0T blood oxygen level dependent(BOLD)magnetic resonance imaging technology.M ethods:The 60 SD rats were random ly divided into control group and breviscapine group(each n=30)respectively to the injection of contrast agent before and after continuous injection of Breviscapine and normal saline 7 d(one time everyday),BOLD-fMRI was performed on rats of each before and 20min,24 h,48 h,72 h and 7 d after injection of contrast agent,measuring rats renal outer medullary R2*values,and pathological examination in kidney of rats.After HE staining evaluation outer medullary tubular damage,analyzed and compared two groups of R2*value and pathological changes.Results:Control group rats renal outer medullary RBF value injection of contrast agent after 20 min R2*values increased,continued to 72 h,7 d after dropped to near the injection of contrast agents.Breviscapine group contrast injection 20min R2*values continued to increase to 24,48 after down continued to 7 d.Injection of contrast agent after 48 h and 72 h breviscapine group and control group the difference was statistically significant(P<0.05),the other difference was no statistical significance(P>0.05).Pathological results showed that control group injection of contrast agent after 20min renal outer medullary kidney tubules damaged,reduced 24 h to 48 h after injury,72 h increased,but less than 20min,7 d after the injury was aggravated,similar to the group of 20 min;breviscapine group injection of contrast agent after 20min of renal outer medullary kidney canaliculus serious injury,reduce 24 h to 48 h after injury and gradually lower than that of the control group,the degree of injury,72 h was aggravated,but lower than control group,7 d was alleviated.After contrast injection,there was no significant difference(P>0.05)between the two groups except the 24 h group,and the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion:3.0T BOLD technology can evaluate CIAKI induced renal blood perfusion level,reflect the treatment response of breviscapine injection on renal damage in CIAKI rats to a certain extent.

Magnetic resonance imaging;Breviscapine;Contrast-induced acute kidney injury;Rats

2016-11-30)

10.3969/j.issn.1672-0512.2017.04.002

廣東省中醫(yī)藥局科研項(xiàng)目(20132124);廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B021800170)。

周懂晶,E-mail:56950762@qq.com。

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