蔣艾廷，李寶坤*，金丹，趙利利，喬傳麗

（石河子大學(xué)食品學(xué)院，新疆石河子832000）

PB試驗(yàn)優(yōu)化德氏乳桿菌增殖培養(yǎng)基的研究

蔣艾廷，李寶坤*，金丹，趙利利，喬傳麗

（石河子大學(xué)食品學(xué)院，新疆石河子832000）

試驗(yàn)對(duì)一株來(lái)源于傳統(tǒng)酸奶的優(yōu)良德氏乳桿菌（Lactobacillus delbrueckii）ATx生長(zhǎng)所需的增殖因子進(jìn)行了研究。在MRS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，測(cè)定了菌株ATx的生長(zhǎng)曲線，并選取谷氨酸鈉、磷酸吡哆醛、抗壞血酸、啤酒、乳糖、胡蘿卜汁、番茄汁、pH為增殖因子。采用單因素試驗(yàn)確定每個(gè)因子的最優(yōu)水平，Plackett-Burman試驗(yàn)考察各因子對(duì)菌株ATx細(xì)胞增殖的影響，通過(guò)最陡爬坡與中心組合試驗(yàn)對(duì)增殖因子進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，谷氨酸鈉、啤酒以及pH對(duì)菌株ATx的增殖具有顯著影響（P＜0.05），當(dāng)MRS培養(yǎng)基中添加谷氨酸鈉21.5 g/L、啤酒26.8 mL/L、初始pH值為6.4時(shí)，德氏乳桿菌ATx的活菌數(shù)最大為（7.56±0.23）×109CFU/mL，為高活性發(fā)酵劑的制備提供了理論參考。

德氏乳桿菌；生長(zhǎng)曲線；增殖因子；Plackett-Burman試驗(yàn)

隨著乳酸菌對(duì)人體益生作用的不斷深入研究與揭示，乳酸菌類制品逐漸受到人們的青睞，發(fā)酵乳制品的消費(fèi)量呈快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，各類乳酸菌制品也層出不窮[1]。研究表明[2]，進(jìn)入腸道內(nèi)的乳酸菌必須具備足夠的數(shù)量與充足的活力，才能發(fā)揮其生物功效。GB 7101—2015《食品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)飲料》規(guī)定活菌型乳酸菌飲料中的乳酸菌數(shù)應(yīng)高于106CFU/g（mL）；日本發(fā)酵乳與乳酸菌飲料協(xié)會(huì)規(guī)定發(fā)酵乳中的益生菌數(shù)高于107CFU/mL[3]。此外在發(fā)酵乳制品的加工與生產(chǎn)過(guò)程中，發(fā)酵菌種保持較高的細(xì)胞活力，能夠極大地縮短發(fā)酵時(shí)間、降低能耗，但乳酸菌屬于異養(yǎng)型微生物，需要從外界吸收一些氨基酸、維生素等生長(zhǎng)因子才能維持正常生長(zhǎng)[4]。如何研制出高濃度且活力強(qiáng)的乳酸菌，已經(jīng)成為限制中國(guó)乳品工業(yè)發(fā)展的一個(gè)瓶頸因素。

國(guó)內(nèi)外許多研究人員[5-7]對(duì)乳酸菌增殖培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化分析，大多采用均勻設(shè)計(jì)、正交試驗(yàn)以及響應(yīng)面分析等方法，過(guò)程相對(duì)繁瑣且優(yōu)化效果不明顯[8]。本試驗(yàn)擬以一株產(chǎn)酸快、凝乳時(shí)間短的優(yōu)良德氏乳桿菌（Lactobacillus delbrueckii）為試驗(yàn)菌株，基于軟件Design-Expert，在Plackett-Burman（PB）試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用最陡爬坡與中心組合試驗(yàn)，設(shè)計(jì)從8種增殖因子中快速篩選幾種主要因子，優(yōu)化培養(yǎng)基的配方，具有周期短、回歸方程精度高等優(yōu)點(diǎn)，為德式乳桿菌高密度培養(yǎng)提供理論基礎(chǔ)與實(shí)踐依據(jù)[11-13]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菌株：德氏乳桿菌（Lactobacillusdelbrueckii）ATx，從新疆塔城地區(qū)傳統(tǒng)酸奶中分離，由石河子大學(xué)食品學(xué)院保存。

MRS肉湯培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L、蛋白胨10 g/L、牛肉粉5 g/L、結(jié)晶乙酸鈉5 g/L、酵母粉4 g/L、檸檬酸二銨2 g/L、K2HPO4·7H2O 2 g/L、吐溫80 1 mL/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L、MnSO4·4H2O 0.04 g/L，調(diào)節(jié)pH值至6.0～6.6，121℃滅菌20 min。此培養(yǎng)基主要用于活化菌種。

MRS固體培養(yǎng)基：在MRS液體培養(yǎng)基中加入1.8%的瓊脂，煮沸熔化滅菌而成。

增殖培養(yǎng)基：按照單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，向MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加各增殖因子后用蒸餾水補(bǔ)足至所需體積配成。

乳糖、磷酸吡哆醛（維生素B6）、抗壞血酸（維生素C）、谷氨酸鈉（分析純）：上海瑞永生物科技有限公司。

番茄汁：將經(jīng)過(guò)挑選、洗凈的番茄破碎，然后連續(xù)打漿和紗布過(guò)濾分離，濾液8 000 r/min離心后取上清液，4℃保藏備用。胡蘿卜汁：對(duì)胡蘿卜進(jìn)行選料、清洗、切片，放入燒杯加入3倍質(zhì)量的蒸餾水100℃煮30～40 min，冷卻后進(jìn)行打漿，紗布過(guò)濾后于8 000 r/min離心，完成后取上清液4℃保藏備用。啤酒：本試驗(yàn)采用的啤酒均為烏蘇啤酒，麥芽汁濃度為9°P。

1.2 儀器與設(shè)備

LDZX-30KBS型立式高壓蒸汽滅菌鍋：上海申安醫(yī)療器械廠；DNP-9272型電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；XB-3200C型電子天平：上海精科上海天平儀器廠；SW-CJ-2D型超凈工作臺(tái)：蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司；Neoluge 15R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：香港力康發(fā)展有限公司。

1.3 方法

1.3.1 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

將保藏的菌株ATx活化2次，待恢復(fù)活力后，再按3%的接種量接入MRS液體培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)，每3h進(jìn)行一次菌落計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)方法采用平板計(jì)數(shù)法[14]，平行3次，取平均值。

1.3.2 種子液的制備

活化后的乳酸菌按3%的接種量接入培養(yǎng)基中，根據(jù)乳酸菌的生長(zhǎng)曲線，確定合適菌齡的乳酸菌作為種子液。

1.3.3 單因素試驗(yàn)

乳酸菌的增殖需要多種的生長(zhǎng)因子，國(guó)內(nèi)外已有許多研究人員[15-19]通過(guò)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化增殖培養(yǎng)基的組成，有效的提高了培養(yǎng)基中的活菌數(shù)，根據(jù)文獻(xiàn)記載[20-21]，在MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加一定量的磷酸吡哆醛、抗壞血酸、啤酒、胡蘿卜汁、番茄汁、乳糖以及谷氨酸鈉能夠促進(jìn)乳酸菌的生長(zhǎng)，此外改變培養(yǎng)基初始pH對(duì)乳酸菌的增殖也有較大的影響[22]。本試驗(yàn)在MRS肉湯的基礎(chǔ)上，配制成含有不同質(zhì)量濃度的上述增殖因子的培養(yǎng)基，谷氨酸鈉的添加量為10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L；啤酒、胡蘿卜汁、番茄汁的添加量均分別為10 mL/L、30 mL/L、50 mL/L、70 mL/L；磷酸吡哆醛與抗壞血酸的添加量均分別為1 g/L、2 g/L、3 g/L、4 g/L；乳糖的添加量為5 g/L、10 g/L、15 g/L、20 g/L，進(jìn)行單因素試驗(yàn)，試驗(yàn)平行3次，取平均值，通過(guò)平板計(jì)數(shù)法計(jì)算活菌數(shù)。

1.3.4 Plackett-Burman試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)中各增殖因子的最佳濃度，對(duì)谷氨酸鈉（A）、磷酸吡哆醛（B）、抗壞血酸（C）、胡蘿卜汁（D）、番茄汁（E）、啤酒（F）、乳糖（G）、初始pH（H）8個(gè)因子進(jìn)行考察，每個(gè)因子分別取低（-1）和高（+1）2個(gè)水平，其中低水平為單因素試驗(yàn)結(jié)果的最佳濃度，高水平取低水平的1.5倍，為了確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，本次試驗(yàn)設(shè)計(jì)含有3個(gè)虛擬項(xiàng)，因此選取N=12的PB設(shè)計(jì)，以活菌數(shù)為響應(yīng)值（Y），篩選對(duì)德氏乳桿菌ATx具有影響顯著的增殖因子，試驗(yàn)平行3次，取平均值。

1.3.5 最陡爬坡試驗(yàn)

根據(jù)PB設(shè)計(jì)的結(jié)果，由各因素效應(yīng)值的大小確定變化的步長(zhǎng)。按一定的梯度增加或者減少各因素的水平值，檢測(cè)增殖培養(yǎng)基中乳酸菌活菌數(shù)的變化，活菌數(shù)最高組的水平值即為中心組合設(shè)計(jì)優(yōu)化分析的中心組。

1.3.6 中心組合設(shè)計(jì)

將PB試驗(yàn)篩選的3個(gè)顯著因素作為試驗(yàn)因素，最陡爬坡試驗(yàn)確定的最佳水平作為中心點(diǎn)，采用Design-Expert 8.05中的中心組合設(shè)計(jì)（central composite design，CCD）對(duì)增殖培養(yǎng)基的成分進(jìn)行優(yōu)化。

2 結(jié)果與分析

2.1 德氏乳桿菌ATx生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

為了解德氏乳桿菌在MRS培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況，測(cè)定了36 h內(nèi)乳酸菌的生長(zhǎng)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖1。以便于準(zhǔn)確地掌握種子液的制備時(shí)間，確保乳酸菌的活性最大。

圖1 德氏乳桿菌ATx的生長(zhǎng)曲線Fig.1 Growth curve ofL.delbrueckiiATx

由圖1可知，德氏乳桿菌ATx從一開(kāi)始菌數(shù)急增，由于菌株活化2次后活力較強(qiáng)，短時(shí)間的延滯期后立即進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（2～18 h），21 h達(dá)到高峰并進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期，此后菌數(shù)基本不再增加并稍有下降的趨勢(shì)，該菌株的生長(zhǎng)符合單細(xì)胞微生物的典型生長(zhǎng)規(guī)律。經(jīng)驗(yàn)證，如果用于接種的種子液處于對(duì)數(shù)后期或穩(wěn)定前期則子代培養(yǎng)物的適應(yīng)期就短，因此為了縮短生產(chǎn)周期，通常都選用處于對(duì)數(shù)后期的種子接種。本試驗(yàn)選用培養(yǎng)16～18h的菌體作為種子液。

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

以培養(yǎng)16 h的菌體為種子液，接種量均為3%，接入含不同濃度增殖因子的培養(yǎng)基中于37℃靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為16 h。通過(guò)菌落計(jì)數(shù)確定各增殖因子的最佳濃度見(jiàn)表1。

表1 單因素試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Results of single factor experiments

2.3 Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果

PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of Plackett-Burman experiments

利用Design-Expert 8.05軟件對(duì)PB試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，其因子影響效果與回歸模型方差分析見(jiàn)圖2與表3。

圖2 各增殖因子對(duì)菌株ATx生長(zhǎng)影響的比較Fig.2 Comparison of effects of proliferation factors on strain ATx growth

由圖2可知，因子A、B、C、D、F、G、H對(duì)德氏乳桿菌ATx有負(fù)效應(yīng)，即在一定濃度范圍內(nèi)，菌體濃度隨著增殖因子濃度降低而增大。因子E則具有正效應(yīng)，即在一定濃度范圍內(nèi)，菌體濃度隨著增殖因子濃度增大而增大。這8個(gè)因子對(duì)德氏乳桿菌ATx生長(zhǎng)的影響順序依次為F＞A＞H＞C＞G＞B＞D＞E，其中E對(duì)ATx生長(zhǎng)的影響最小為0.21%，C、G、B、D的影響較大，為4%～12%，F(xiàn)、A、H對(duì)菌株ATx生長(zhǎng)的影響最大。

表3 PB試驗(yàn)回歸模型方差分析Table 3 Variance analysis of regression equation of PB experiments

由表3可知，所得的回歸方程達(dá)到顯著（P＜0.05），決定系數(shù)R2=0.967 8，這表明有96.78%的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可用此回歸模型來(lái)解釋。本次試驗(yàn)的8個(gè)因子中，啤酒（P＜0.05）、谷氨酸鈉（P＜0.05）、培養(yǎng)基的初始pH（P＜0.05），對(duì)德氏乳桿菌ATx生長(zhǎng)的影響最大，其置信度分別為98.34%、98.24%、97.31%，其他因子對(duì)菌株ATx增殖在95%的概率水平上差異均不顯著。因此，選擇谷氨酸鈉、啤酒及培養(yǎng)基的初始pH作為ATx生長(zhǎng)的增殖因子。

2.4 中心組合試驗(yàn)結(jié)果與分析

由最陡爬坡試驗(yàn)結(jié)果（表4）可知，第3組試驗(yàn)中乳酸菌的活菌數(shù)最高，故將其水平作為CCD試驗(yàn)的中心點(diǎn)，以第二組的試驗(yàn)結(jié)果作為高（+1）水平，第三組試驗(yàn)結(jié)果作為低（-1）水平。采用CCD試驗(yàn)設(shè)計(jì)確定德氏乳桿菌的最佳培養(yǎng)基配方。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析見(jiàn)表6。對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果進(jìn)行回歸擬合分析，得到二次多元回歸模型：

Y=74.21-2.52A+3.73B-3.62C-3.50AB+2.40AC+0.50BC-3.41A2-9.92B2-7.30C2

由表6可知，該模型（P＜0.001）極其顯著，失擬項(xiàng)（P= 0.793 3＞0.05）不顯著，說(shuō)明模型的擬合性較好。模型的決定系數(shù)R2=0.983 1，調(diào)整決定系數(shù)R2adj=0.967 9，表明響應(yīng)面的96.79%的變化可以由此模型解釋，預(yù)測(cè)決定系數(shù)R2pred= 0.9430接近R2adj，表明模型與實(shí)際情況擬合得較好。變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）為3.55%，說(shuō)明試驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠、分析結(jié)果可信，可用此模型對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。

表4 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 Design and results of the steepest ascent experiments

表5 中心組合設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 5 Design and results of central composite experiments

表6 中心組合試驗(yàn)回歸模型方差分析Table 6 Variance analysis of regression equation of central composite design

利用Design-Expert8.05軟件對(duì)回歸模型進(jìn)行響應(yīng)面分析，得到各因素交互作用的響應(yīng)面和等高線（見(jiàn)圖3）。用此回歸模型預(yù)測(cè)啤酒與谷氨酸鈉的添加量分別為26.81 mL/L、21.46g/L，初始pH值為6.37時(shí)，德氏乳桿菌的活菌數(shù)最大預(yù)測(cè)值為7.68×109CFU/mL。為方便實(shí)際操作，修改條件為啤酒與谷氨酸鈉的添加量分別為26.8 mL/L、21.5 g/L，初始pH值為6.4，此時(shí)德氏乳桿菌ATx的活菌數(shù)為7.56×109CFU/mL，與預(yù)測(cè)值相近，可見(jiàn)該模型能較好地預(yù)測(cè)實(shí)際培養(yǎng)基中德氏乳桿菌的活菌數(shù)，與基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比活菌數(shù)提高了約6.8倍。

圖3 啤酒添加量、谷氨酸鈉添加量、初始pH值交互作用對(duì)乳酸菌活菌數(shù)影響的響應(yīng)面和等高線Fig.3 Response surface plots and contour line of effects of beer addition,sodium glutamate addition and initial pH on viable counts of lactic acid bacteria

3 結(jié)論

本試驗(yàn)通過(guò)Plackett-Burman試驗(yàn)得出，啤酒、谷氨酸鈉與培養(yǎng)基的初始pH值是影響德氏乳桿菌生長(zhǎng)的關(guān)鍵因子。通過(guò)回歸模型確定增殖培養(yǎng)基的配方為在MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入26.8mL/L的啤酒、21.5g/L的谷氨酸鈉，初始pH值為6.4，最終德氏乳桿菌活A(yù)Tx菌數(shù)為（7.56±0.23）×109CFU/mL，比優(yōu)化前提高了約6.8倍，為德氏乳桿菌高密度培養(yǎng)確定了適宜的培養(yǎng)基組成，進(jìn)而為其工業(yè)化生產(chǎn)奠定良好的基礎(chǔ)。針對(duì)德氏乳桿菌高密度培養(yǎng)技術(shù)，如補(bǔ)料分批培養(yǎng)、細(xì)胞循環(huán)培養(yǎng)、透析培養(yǎng)等還需要后續(xù)深入研究。

[1]張和平.中國(guó)益生乳酸菌及益生發(fā)酵乳研究開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J].乳業(yè)科學(xué)與技術(shù)，2009，32（2）：51-54.

[2]陳健凱，陳健旋，林洵，等.養(yǎng)樂(lè)多飲料中影響干酪乳桿菌代田株活菌數(shù)因素的研究[J].中國(guó)釀造，2008，27（22）：34-36.

[3]易文芝，唐雯倩，劉成國(guó)，等.基于高活菌數(shù)的益生發(fā)酵乳發(fā)酵技術(shù)研究進(jìn)展[J].食品與機(jī)械，2014，30（4）：252-256.

[4]周德慶.微生物學(xué)教程[M].北京：高等教育出版社，2011：41-50.

[5]KHOSHAYAND F,GOODARZI S,SHAHVERDI A R,et al.Optimization of culture conditions for fermentation of soymilk usingLactobacillus caseiby response surface methodology[J].Probiot Antim Prot,2011, 3(4):159-167.

[6]ZHAO X,HAN Y,JIN W,et al.Optimization of antifungal lipopeptide production fromBacillussp.BH072 by response surface methodology[J]. J Microbiol,2014,52(4):324-332.

[7]熊亞，李敏杰.雞樅菌菌絲體基礎(chǔ)培養(yǎng)基的優(yōu)化[J].食品與機(jī)械，2013，29（4）：185-189.

[8]王菲菲.乳酸乳球菌乳脂亞種BTQY-112增殖培養(yǎng)基的優(yōu)化[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2016，37（12）：159-162.

[9]UNGUREANU C P,FAVIER L,BAHRIM G,et al.Response surface optimization of experimental conditions for carbamazepine biodegradation byStreptomycesMIUG 4.89[J].New Biotechnol,2015,32(3):347-357.

[10]DAYANA P S,BAKTHAVATSALAM A K.Optimization of phenol degradation by the microalgaChlorella pyrenoidosausing Plackett-Burman design and response surface methodology[J].Bioresource Technol,2016,207:150-156.

[11]劉鵬，賈曉強(qiáng)，楊春燕，等.德氏乳桿菌發(fā)酵生產(chǎn)乳酸工藝條件優(yōu)化[J].化工進(jìn)展，2011，30（6）：1332-1340.

[12]符恒，袁爽，陳杰，等.保加利亞乳桿菌在酸奶制品中的應(yīng)用及其研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2014，35（9）：360-367.

[13]李瑞，侯改鳳，黃其永，等.德氏乳桿菌對(duì)哺乳仔豬生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、免疫和抗氧化功能的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2013，25（12）：2943-2949.

[14]宋繼宏，王記成，其木格蘇都，等.發(fā)酵乳中乳酸菌計(jì)數(shù)方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)乳品工業(yè)，2014，42（12）：27-31.

[15]華寶珍，李莎，徐愛(ài)才，等.植物乳桿菌ST-Ⅲ脫脂乳的發(fā)酵工藝優(yōu)化[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2014，30（11）：276-284.

[16]ANNADURAI G,LEE J F,LING L Y.Statistical optimization of medium components and growth conditions by response surface methodology to enhance phenol degradation byPseudomonas putida[J].J Hazard Material,2008,151(1):171-178.

[17]SENTHILKUMAR S,PERUMALSAMY M,PRABHUY H,et al.Response surface optimization for efficient dye removal by isolated strain Pseudomonassp.[J].Open Eng,2012,2(3):425-434.

[18]SERUGA P,KRZYWONOS M.Screening of medium components and process parameters for sugar beet molasses vinasse decolorization by Lactobacillus plantarumusing Plackett-Burman experimental design[J]. Polish J Environ Stud,2015,24(2):683-688.

[19]楊杰，谷新晰，李晨，等.響應(yīng)面法優(yōu)化植物乳桿菌綠豆乳增殖培養(yǎng)基[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2015，15（12）：84-89.

[20]王慕華，潘佩平，趙玉明，等.嗜熱鏈球菌抗噬菌體菌株的富集培養(yǎng)[J].中國(guó)乳品工業(yè)，2015，45（5）：12-15.

[21]李用芳，李學(xué)梅，單英芳，等.嗜熱鏈球菌和乳桿菌最佳促生長(zhǎng)劑的選擇[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，1998，24（3）：50-52.

[22]黃麗金，陸兆新，袁勇軍.響應(yīng)面法優(yōu)化德氏乳桿菌保加利亞亞種增殖培養(yǎng)基[J].食品科學(xué)，2005，26（5）：103-107.

Optimization of proliferation medium forLactobacillus delbrueckiiby PB experiments

JIANG Aiting,LI Baokun*,JIN Dan,ZHAO Lili,QIAO Chuanli
(College of Food Engineering,Shihezi University,Shihezi 832000,China)

The proliferative factors required for the growth of a high quality strainLactobacillus delbrueckii,named ATx,which isolated from the traditional yogurt was studied.On the basis of MRS medium,the growth curve of strain ATx was determined and sodium glutamate,pyridoxal phosphate,ascorbic acid,beer,lactose,fresh carrot juice,tomato juice and pH were selected as proliferative factors.The optimal level of each factor was determined by single factor experiments,the effects of various factors on the proliferation of strain ATx cells was investigated by Plackett-Burman experiments,and the optimal proliferative factors were optimized by the steepest ascent and central composite tests.The results showed that sodium glutamate,beer and pH had a significant effect on the proliferation of strain ATx(P＜0.05).When the MRS medium components were monosodium glutamate 21.5 g/L,beer 26.8 ml/L,and when the initial pH was 6.4,the maximum viable count of strain ATx was(7.56±0.23)×109CFU/ml,which provided theoretical references for production of starter culture with high viability.

Lactobacillus delbrueckii;growth curve;proliferative factor;Plackett-Burman experiment

Q93-335

0254-5071（2017）07-0032-05

10.11882/j.issn.0254-5071.2017.07.008

2017-04-20

國(guó)家自然科學(xué)基金（31560444）；石河子大學(xué)重點(diǎn)科技攻關(guān)（gxjs2014-zdgg07）

蔣艾廷（1993-），男，碩士研究生，研究方向?yàn)槿槠肺⑸铩?/p>

*通訊作者：李寶坤（1979-），男，副教授，博士，研究方向?yàn)槿槠肺⑸铩?/p>