河北省石家莊市第五醫(yī)院

楊 靜 馮 莉△ 張 娟 馮彩霞 杜 婧△△(石家莊 050021)

清熱抗毒口服液穩(wěn)定性研究*

河北省石家莊市第五醫(yī)院

楊 靜 馮 莉△張 娟 馮彩霞 杜 婧△△(石家莊 050021)

目的：研究考察清熱抗毒口服液的穩(wěn)定性。方法：依據(jù)《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》，觀察清熱抗毒口服液的性狀、pH值、相對密度、鑒別、鹽酸小檗堿含量的變化。結(jié)果：在影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長期穩(wěn)定性試驗(yàn)中，清熱抗毒口服液的性狀、pH、相對密度、薄層鑒別均未發(fā)生明顯變化。制劑中的藥效成分鹽酸小檗堿的含量隨存放時(shí)間的延長有所降低。結(jié)論：高溫和強(qiáng)光對本制劑的穩(wěn)定性有一定的影響。故采用深棕色玻璃瓶存放口服液，置于陰涼干燥處保存。本品在室溫下是穩(wěn)定的。

清熱抗毒口服液；穩(wěn)定性；影響因素；加速試驗(yàn)；長期試驗(yàn)；高溫；強(qiáng)光；深棕色

清熱抗毒口服液是石家莊市第五醫(yī)院名中醫(yī)精心研制的中藥復(fù)方制劑，處方由白茅根、鉤藤、生石膏、板藍(lán)根、藿香、黃連等十味中藥組成(本制劑處方已申請專利)。本制劑清肝經(jīng)熱，祛濕解毒、平肝止痛，可用于治療皰疹、抽搐、發(fā)熱等急性感染癥狀。臨床上用于手足口病的治療。制劑的穩(wěn)定性不僅是評價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，而且是臨床用藥安全的重要保證。因此，制劑穩(wěn)定性的考察就顯得尤為重要。筆者根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010年版《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》，[1]以清熱抗毒口服液的性狀、pH、相對密度、鑒別、有效成分含量為指標(biāo)進(jìn)行考察，分別進(jìn)行影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)，通過觀察各指標(biāo)的變化評價(jià)制劑的穩(wěn)定性，[2]以期為該制劑的生產(chǎn)、質(zhì)量控制、儲藏條件等后續(xù)研究提供科學(xué)的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent1260)；微電腦光照箱( 型號:SPX-2501-G，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)；十萬分之一天平(BS124Ssartorius)；電熱恒溫水浴鍋(HHS型，上海東星建材試驗(yàn)設(shè)備有限公司)；超聲清洗儀(KQ-100E型，昆山市超聲儀器有限公司)；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 試藥 對照品：白茅根對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，121145-201003)；鉤藤對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，121190-201204)；黃連對照藥材(石家莊市第五醫(yī)院制劑室提供)；鹽酸小檗堿(中國藥品生物制品檢定所，批號為110713-201212)。清熱抗毒口服液(石家莊市第五醫(yī)院制劑室提供，規(guī)格：10mL/支，批號為140306，140409，140508)。

所用試劑均為分析純；乙腈(德國CNW生產(chǎn)公司)為色譜純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定方法

2.1.1 性狀、pH、相對密度、鑒別:制劑的性狀測定采取在自然光條件下白色背景中通過肉眼進(jìn)行直接觀察；口服液的pH值使用酸度計(jì)測量；口服液的相對密度采用比重瓶法測定；采用薄層色譜法對口服液中白茅根、鉤藤、黃連進(jìn)行鑒別。

2.1.2 含量測定: 本制劑中鹽酸小檗堿的含量采用高效液相色譜法進(jìn)行測定。通過實(shí)驗(yàn)確定的色譜條件：色譜柱為島津C18(4.6×150mm，5μm)；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(25∶75)為流動相；檢測波長為265nm；流速為1.0mL/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積為10μL。按鹽酸小檗堿峰計(jì)算，理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3 000。在此實(shí)驗(yàn)條件下分別進(jìn)行了線性關(guān)系考察、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)等方法學(xué)研究。

在本制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立中，對此方法進(jìn)行了詳細(xì)的描述，在此不再贅述。

2.2 影響因素試驗(yàn)

2.2.1 方法:按照《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》中對口服液穩(wěn)定性的考察要求，重點(diǎn)考察的項(xiàng)目包括性狀、pH、相對密度、鑒別以及含量，分別進(jìn)行高溫試驗(yàn)與強(qiáng)光試驗(yàn)。

2.2.1.1 高溫試驗(yàn):取供試品20支除去包裝后開口置于潔凈容器中，在(60±2)℃恒溫箱中放置10d，分別于第0、5、10d各取5支進(jìn)行檢測。結(jié)果見表1。

2.2.1.2 強(qiáng)光試驗(yàn)：取供試品20支除去包裝后開口置于光照箱內(nèi)，在光照強(qiáng)度4 500Lx條件下放置10d，分別于第0、5、10d各取5支進(jìn)行檢測。結(jié)果見表2。

2.2.2 結(jié)果：在高溫和強(qiáng)光的影響下，清熱抗毒口服液的性狀、pH、相對密度、鑒別未發(fā)生明顯變化，而鹽酸小檗堿的含量有所降低。

表1 高溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 強(qiáng)光實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 加速試驗(yàn)

2.3.1 方法:取清熱抗毒口服液3批樣品，在40℃±2℃、相對溫度75%±5%條件下放置6個(gè)月，并對真實(shí)溫度與濕度進(jìn)行監(jiān)測。在試驗(yàn)期間第1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月末分別取樣1次，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測。

2.3.2 結(jié)果：在該試驗(yàn)條件下，3批口服液的性狀、pH、相對密度、鑒別均未發(fā)生明顯變化。制劑中有效成分的含量隨存放時(shí)間的延長有所降低。詳見表3。

表3 加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表3 加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 長期試驗(yàn)

2.4.1 試驗(yàn)方法：清熱抗毒口服液3批樣品，在30℃±2℃、相對濕度65%±5%的條件下放置12個(gè)月，每3個(gè)月取樣1次，分別于0、3、6、9、12個(gè)月取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目并檢測。

2.4.2 試驗(yàn)結(jié)果：在30℃±2℃、相對濕度65%±5%的條件下放置12個(gè)月，3批口服液的性狀、pH、相對密度、鑒別均未發(fā)生明顯變化。制劑中有效成分的含量隨存放時(shí)間的延長有所降低。詳見表4。

表4 長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

清熱解毒類抗病毒復(fù)方中藥大多有抗病毒、抗炎雙重作用。[3]根據(jù)中醫(yī)辨證施治的原則，在不同類型的抗病毒治療中，發(fā)揮著自己獨(dú)特的作用。清熱抗毒口服液中白茅根具有利尿與抗菌作用以及增強(qiáng)肌體的非特異性免疫作用。[4]黃連味苦性寒，具有清熱燥濕，瀉火解毒之功，同時(shí)具有抗炎、抗病毒、解熱等多重功效，黃連中的鹽酸小檗堿為含小檗堿中藥中主要抑菌成分，其抗菌譜廣，對革蘭氏陽性、陰性菌均有抑制作用。[5]升麻有發(fā)表透疹，清熱解毒，升陽舉陷的功效。本制劑內(nèi)外兼治，從根本上針對手足口病的各證加以治療，達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。近年來研究發(fā)現(xiàn)手足口病患兒體內(nèi)的Treg/Th17較正常值明顯降低，存在Treg/Th17平衡紊亂。而Treg/Th17平衡在肌體免疫中發(fā)揮著不可忽視的作用。這可能是手足口病的發(fā)病機(jī)制之一。中藥對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用逐漸為人們所認(rèn)可。通過研究發(fā)現(xiàn)[6]清熱抗毒口服液可通過抑制Th17細(xì)胞及其相關(guān)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生，調(diào)整患兒體內(nèi)Treg/Th17平衡紊亂，從而抑制體內(nèi)炎癥的進(jìn)一步擴(kuò)展，這可能是本制劑治療手足口病的作用機(jī)制之一。

清熱抗毒口服液采用加權(quán)評分法優(yōu)化水提制備工藝，祛除傳統(tǒng)煎劑的弊端，選取最佳制備工藝，真正發(fā)揮藥物的最大作用。中藥制劑劑型選擇遵循首選口服，后選注射的治療原則。[7]本制劑采取口服液劑型，是由于患者多為嬰幼兒，口服液較煎劑用量小，服用方便，以便增強(qiáng)患兒用藥的依從性。清熱抗毒口服液為棕褐色的液體，通過白茅根、鉤藤、黃連的薄層鑒別和鹽酸小檗堿的含量測定以控制制劑的質(zhì)量。穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的是考察藥物制劑在溫度、光線等因素的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，通過加速實(shí)驗(yàn)及長期實(shí)驗(yàn)的觀察，對制劑穩(wěn)定性進(jìn)行進(jìn)一步考察，為制劑的生產(chǎn)、包裝、貯藏條件的合理性提供參考依據(jù)，并通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析進(jìn)一步確定藥品的有效期。[8-9]在影響因素試驗(yàn)中本應(yīng)考察高溫、強(qiáng)光和高濕因素對制劑穩(wěn)定性的影響，由于本制劑為口服液劑型，含水量較大，故高濕不作為考察因素。

在本課題中，分別選取不同廠家的藥材，采用相同的工藝對清熱抗毒口服液進(jìn)行提取濃縮，并對制劑中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測定。以此來判斷不同廠家的藥材對制劑中鹽酸小檗堿含量的影響。同時(shí)也為本課題中清熱抗毒口服液的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。測定結(jié)果表明，不同廠家藥材提取的制劑中鹽酸小檗堿的含量存在不同程度的差異。其中選自樂仁堂藥材廠家提取的制劑中鹽酸小檗堿的含量最高，表明質(zhì)量較好；選自其它廠家的藥材提取的制劑中鹽酸小檗堿含量均低于樂仁堂廠家，故本實(shí)驗(yàn)采用選自樂仁堂藥材廠家的藥材作為實(shí)驗(yàn)原料。通過該制劑3批樣品含量測定的結(jié)果以及穩(wěn)定性試驗(yàn)研究，暫定制劑中鹽酸小檗堿的含量不低于2 mg/10 mL。

通過穩(wěn)定性試驗(yàn)的各項(xiàng)研究，結(jié)果表明清熱抗毒口服液的性狀、pH值(4.4～4.6)、相對密度(1.06～1.08)未發(fā)生明顯變化，說明在高溫、強(qiáng)光條件下，口服液的性狀、pH、相對密度、薄層鑒別的變化不明顯，比較穩(wěn)定。但影響因素試驗(yàn)中鹽酸小檗堿的含量呈下降趨勢，并且下降趨勢較明顯，說明鹽酸小檗堿在高溫[10]和強(qiáng)光條件下容易分解。在加速實(shí)驗(yàn)中，第1個(gè)月口服液中鹽酸小檗堿的含量下降明顯，而后仍呈下降趨勢，但是下降較緩慢。說明在一定實(shí)驗(yàn)溫度下，有效成分含量會隨存放時(shí)間的延長而降低，而且溫度越高有效成分含量下降得越快。說明高溫和強(qiáng)光是影響本制劑穩(wěn)定性的主要因素。因此，在工藝生產(chǎn)過程中應(yīng)注意對溫度和時(shí)間的控制，以及儲存運(yùn)輸中應(yīng)注意避高溫、避強(qiáng)光保存。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，擬采用深棕色玻璃瓶存放口服液，存放于陰涼干燥處。本品在室溫下是穩(wěn)定的。故暫定清熱抗毒口服液的有效期為12個(gè)月。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部) [S]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.附錄

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(2016-11-08 收稿)

*河北省石家莊市科技局科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目：No.151461523

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1007-5615(2017)02-0040-04

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