許方敏，薛瑞，葉洪濤，蘇瑞斌，張有志

（1.廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西南寧530021；2.軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京100850）

五味子醇甲對小鼠抑郁樣行為的影響

許方敏1，2，薛瑞2，葉洪濤2，蘇瑞斌2，張有志2

（1.廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西南寧530021；2.軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京100850）

目的研究中藥五味子的木脂素類成分五味子醇甲（SCH）的抗抑郁作用及其機制。方法小鼠單次ig給予SCH 5，10和30 mg·kg-1后1 h，采用小鼠懸尾實驗和強迫游泳實驗評價其抗抑郁活性；采用自發(fā)活動實驗評價其對中樞興奮性的影響；采用利血平拮抗實驗和育亨賓毒性實驗評價其對中樞單胺神經功能的影響。結果在行為絕望模型中，與正常對照組相比，SCH 30 mg·kg-1可顯著縮短小鼠懸尾和強迫游泳的不動時間（P＜0.05）；自發(fā)活動實驗結果顯示，SCH在受試劑量范圍內對中樞神經系統(tǒng)無興奮或抑制作用；在利血平拮抗實驗中，與模型組相比，SCH 30 mg·kg-1可拮抗利血平（2.5 mg·kg-1，ip）引起的小鼠眼瞼下垂和運動不能（P＜0.05），對肛溫下降無顯著影響；在育亨賓毒性實驗中，SCH各劑量對育亨賓閾致死劑量（30 mg·kg-1，sc）引起的小鼠死亡率無顯著影響。結論SCH具有潛在的抗抑郁藥理活性。

抑郁；五味子；五味子醇甲

抑郁癥是一種以顯著而持久的心境低落為主要特征的情感性精神障礙，屬于中醫(yī)郁證、情志病范疇。寧心安神類中藥在中醫(yī)臨床中常配伍用于抑郁癥治療［1］。五味子為木蘭科植物五味子（Schisandra chinensis）的成熟干燥果實，其味酸、甘，性溫，具有補腎寧心、益氣生津和收斂固澀的功效［2］。研究發(fā)現(xiàn)，五味子提取物具有顯著的鎮(zhèn)靜催眠作用，其作用機制可能與提高腦內多巴胺（dopa?mine，DA）、γ-氨基丁酸的含量有關［3］。目前五味子抗抑郁作用研究尚不詳實。文獻報道，五味子復方與化學合成類抗抑郁藥（氟西汀、米氮平和西酞普蘭）聯(lián)用的抗抑郁作用優(yōu)于單用抗抑郁藥［4-7］，而五味子粗提物可顯著縮短小鼠懸尾實驗和強迫游泳實驗的不動時間［8-9］。

目前，從五味子中已分離得到200多種化合物，主要成分組群為聯(lián)苯環(huán)辛二烯木脂素類化合物，包括五味子甲素、乙素和丙素，五味子醇甲（schisan?drin，SCH），五味子酯甲、乙、丙、丁和戊等［10］。其中SCH的生物利用度最高，具有較好的水溶性，可通過血腦屏障［11］，是五味子發(fā)揮中樞鎮(zhèn)靜催眠作用最主要的藥理活性成分［12-15］，但其是否具有抗抑郁作用未見報道。本研究采用行為藥理學方法探討SCH的抗抑郁作用及其機制。

1 材料與儀器

1.1 藥品、試劑和儀器

SCH（中國食品藥品檢定研究院，批號：110857，純度98%）；鹽酸度洛西?。╠uloxetine，DLX）（上海萬代制藥有限公司）。育亨賓（yohim?bine）和利血平（reserpine）（美國Sigma公司）。小鼠自發(fā)活動圖像運動解析儀（JLBehv-LAG-9）（上海吉量公司）；TH-212智能數(shù)字測溫儀（北京海創(chuàng)高科技有限公司）。

1.2 實驗動物

雄性ICR小鼠，SPF級，體質量18～20 g〔斯貝福（北京）實驗動物科技有限公司〕，動物合格證號：SCXK（京）2011-0004。實驗前小鼠適應性飼養(yǎng)7 d，飼養(yǎng)溫度22～24℃，濕度40%～70%，光照時間7∶00-19∶00。

1.3 小鼠自發(fā)活動實驗

將小鼠按體質量均衡隨機分為正常對照組、DLX（陽性藥）對照組及SCH 5，10和30 mg·kg-1組，每組10只。各組分別單次ig給予DLX 20 mg·kg-1或SCH 5，10和30 mg·kg-1，正常對照組給予等體積蒸餾水。給藥后1 h，將小鼠放入自發(fā)活動圖像運動解析儀中，記錄15 min內小鼠水平運動距離。

1.4 小鼠懸尾實驗

小鼠分組及給藥同1.3。給藥1 h后，按Steru等［16］建立的方法，將膠帶黏在小鼠尾部距尾尖2 cm處，用夾子夾住膠帶，將小鼠倒懸固定于黑色懸尾箱中，頭部距箱底約5 cm。立即開始觀察6 min，記錄后4 min內累計不動時間。以小鼠停止掙扎、呈基本靜止的垂直懸吊狀態(tài)為“不動”行為判定標準。

1.5 小鼠強迫游泳實驗

小鼠分組與給藥同1.3。給藥后1 h，按Porsolt等［17］建立的方法，將小鼠輕放于高20 cm，直徑12 cm，水深10 cm的圓柱形玻璃游泳缸中，水溫24～26℃。立即開始觀察6 min，記錄后4 min內累計不動時間。以小鼠在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài)、僅有細小的肢體運動以保持頭部浮在水面為“不動”行為判定標準。

1.6 利血平耗竭實驗

小鼠按體質量隨機分為正常對照組、模型組、DLX對照組及SCH 5，10和30 mg·kg-1組，每組10只。正常對照組和模型組小鼠ig給予蒸餾水，DLX對照組和SCH組分別ig給予DLX 20 mg·kg-1或SCH 5，10和30 mg·kg-1；給藥后1 h，正常對照組ip給予生理鹽水，其余各組均ip給予利血平2.5 mg·kg-1。根據(jù)文獻［18-19］，觀察測定以下指標。

1.6.1 眼瞼下垂程度觀察

給予利血平后1 h，將小鼠放于支架上觀察15 s，根據(jù)其眼瞼下垂程度打分：眼瞼完全睜開記為0分，1/4閉合記1分，1/2閉合記2分，3/4閉合記3分，完全閉合記4分。統(tǒng)計各組小鼠眼瞼下垂平均得分。

1.6.2 肛溫測定

將電子溫度計探頭插入小鼠肛門內2 cm處，平衡10 s，待溫度計顯示數(shù)值穩(wěn)定后記錄小鼠肛溫。各組小鼠先后測溫2次：分別為ig給予蒸餾水、DLX或SCH前（T0，℃）和ip給予利血平1 h后（T1，℃）。統(tǒng)計用藥前后各組肛溫下降值△T（△T=T0-T1，℃）。

1.6.3 運動不能測定

給予利血平后1 h，將小鼠放于直徑7.5 cm的圓圈中央進行觀察，以15 s內不走出圓圈記為“運動不能”。計數(shù)各組運動不能小鼠只數(shù)。

1.7 育亨賓毒性實驗

小鼠分組與給藥同1.3。給藥后1 h，根據(jù)文獻［20］方法，各組sc給予育亨賓30 mg·kg-1，觀察記錄24 h內各組小鼠死亡數(shù)。

1.8 統(tǒng)計學分析

實驗結果數(shù)據(jù)采用GraphPad prism 5.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料數(shù)據(jù)（利血平拮抗實驗的運動不能和育亨賓毒性實驗的致死率）采用精確Fisher檢驗；其余計量資料數(shù)據(jù)以x±s表示，采用單因素方差分析，組間比較采用Dunnett t檢驗，以P＜0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 SCH對小鼠自發(fā)活動的影響

與正常對照組相比，DLX對照組和SCH各劑量組小鼠水平運動距離無顯著差異，提示DLX和SCH在受試劑量下不影響小鼠自發(fā)活動（表1）。

2.2 SCH對小鼠懸尾不動時間的影響

與正常對照組相比，DLX對照組（P＜0.01）和SCH 30 mg·kg-1組（P＜0.05）小鼠懸尾不動時間均顯著縮短（表2）。

Tab.1 Effect of schisandrin（SCH）on movement dis?tance in locomotor activity test in mice

Tab.2 Effect of SCH on immobility time in tail suspen?sion test in mice

2.3 SCH對小鼠強迫游泳不動時間的影響

與正常對照組相比，DLX對照組（P＜0.01）和SCH 30 mg·kg-1組（P＜0.05）小鼠強迫游泳不動時間均顯著縮短（表3）。

Tab.3 Effect of SCH on immobility time in forced swimming test in mice

2.4 SCH對小鼠利血平化行為的影響

實驗結果（表4）示，ip給予利血平2.5 mg·kg-11 h后，與正常對照組相比，模型組小鼠出現(xiàn)眼瞼下垂、體溫下降及運動不能的行為反應，提示利血平化模型建立成功。與模型組相比，DLX對照組對利血平化引起的上述行為反應均有顯著拮抗作用（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01）；SCH 30 mg·kg-1可顯著減少小鼠眼瞼下垂得分（P＜0.05），顯著緩解其運動不能（P＜0.05），而SCH 5，10和30 mg·kg-1對利血平化引起的體溫降低均無顯著影響。

Tab.4 Effect of SCH on reserpine-induced eye ptosis，hypothermia and akinesia in mice

2.5 SCH對育亨賓毒性反應的影響

與正常對照組相比，DLX對照組小鼠死亡率顯著增加（P＜0.01），而SCH各劑量組小鼠死亡率無顯著差異（表5）。

Tab.5 Effect of SCH on yohimbine-induced lethality in mice

3 討論

五味子為常用的寧心安神中藥，同時具有斂陰柔肝之功。SCH作為五味子的主要活性成分之一，其鎮(zhèn)靜催眠作用得到較多關注。研究發(fā)現(xiàn)，SCH可逆轉對氯苯丙氨酸引起的動物睡眠時間縮短，并增加5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）含量［12］；增加正常大鼠下丘腦和紋狀體DA含量［21］；提高記憶力及增強膽堿能神經系統(tǒng)功能［22］；改善脂多糖誘導的炎癥損傷［23-24］；改善糖皮質激素誘導的神經損傷［25］。

迄今為止，僅2篇文獻報道了五味子粗提物具有抗抑郁作用［4-5］，尚缺乏對五味子抗抑郁化學物質基礎的深入研究，有關五味子木脂素類單體成分的抗抑郁作用研究亦未見報道。本研究結果顯示，在小鼠懸尾實驗和強迫游泳實驗2種行為絕望模型上，SCH可顯著縮短小鼠懸尾和游泳的不動時間，提示SCH具有抗抑郁作用；自發(fā)活動實驗結果顯示，SCH在受試劑量范圍內對小鼠自發(fā)活動無顯著影響，提示其對中樞神經系統(tǒng)無興奮或抑制作用，排除了行為絕望模型結果存在假陽性的可能。

抑郁癥的病理生理機制復雜，至今尚未完全明晰，目前較為一致的觀點認為，抑郁癥的發(fā)生與腦內神經突觸間隙5-HT，去甲腎上腺素（norepineph?rine，NE）和DA水平降低引起的單胺神經傳導功能低下有關［26］，現(xiàn)有一線抗抑郁藥物也均以增強單胺神經系統(tǒng)功能為主要作用機制。本研究采用利血平拮抗實驗和育亨賓毒性增強實驗，初步探討了SCH對單胺神經系統(tǒng)功能的影響。利血平作為一種囊泡再攝取抑制劑，可使單胺類神經遞質滯留在囊泡外從而被單胺氧化酶降解，引起一系列行為和生理變化。經利血平處理的動物會出現(xiàn)上眼瞼下垂、體溫下降及運動不能的癥狀，能拮抗眼瞼下垂的藥物，可能具有增強5-HT神經功能的作用；能拮抗體溫下降的藥物，可能具有增強NE神經功能的作用；能拮抗運動不能的藥物，可能具有增強中樞DA神經功能的作用［18-19］。本研究中，通過對利血平拮抗實驗結果的分析發(fā)現(xiàn)，SCH對利血平誘發(fā)的眼瞼下垂和運動不能有良好的改善作用，對體溫下降無拮抗效應，表明SCH對5-HT和DA能神經系統(tǒng)具有增強作用，而對NE能神經系統(tǒng)無增強作用。育亨賓可選擇性阻斷NE神經元突觸前膜α2受體，促進NE釋放，具有增強NE能神經功能作用的抗抑郁藥與育亨賓閾致死劑量（30 mg·kg-1）合用，可增強育亨賓的毒性反應［20］。本實驗結果表明，SCH對育亨賓閾致死劑量的毒性反應無增強作用，進一步證實SCH對NE系統(tǒng)功能無增強作用。抗抑郁陽性藥DLX是5-HT/NE雙重重攝取抑制劑，本研究結果顯示，DLX除對中樞5-HT和NE神經功能具有增強作用外，對DA神經系統(tǒng)亦有增強作用，與Kihara等［27］研究一致。該研究發(fā)現(xiàn)，雖然DLX對DA轉運蛋白親和力較低，但在整體動物水平可同時增加大鼠前額葉皮質5-HT，NE和DA的含量，并認為DLX能夠升高DA含量并非通過阻斷DA轉運，而可能是通過阻斷DA與NE轉運體的結合而發(fā)揮作用的。

綜上所述，本研究采用行為藥理學方法發(fā)現(xiàn)，五味子的木脂素類單體SCH具有潛在的抗抑郁作用，其作用機制可能與增強5-HT和DA神經系統(tǒng)功能有關。

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Antidepressant-like effect of schisandrin in mice

XU Fang-min1,2,XUE Rui2,YE Hong-tao2,SU Rui-bin2,ZHANG You-zhi2
(1.Pharmaceutical College,Guangxi Medical University,Nanning 530021,China;2.State Key Laboratory of Toxicology and Medical Countermeasures,Institute of Pharmacology and Toxicology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China)

OBJECTIVETo explore the antidepressant effect and the underlying mechanisms of schisandrin(SCH),a component of the fruits of Schizandra chinesis.METHODSThe forced swimming test(FST)and tail suspension test(TST)in mice were used to evaluate the antidepressant activity of SCH(5,10,and 30 mg·kg-1)following single administration intragastrically,and the locomotor activity was investigated to exclude its neural excitatory effects.Effects of SCH on neural monoamine systems were studied in two pharmacological models,including reserpine induced monoamine depletion test and yohimbine toxicity potentiation test.RESULTSIn behavioral despair models,SCH(30 mg·kg-1)signif?icantly decreased the immobility time in the TST and FST(P＜0.05)compared with normal control group. Results of the locomotor activity experiment showed that SCH had no excitatory or inhibitory actions on the central nervous system.In the reserpine reversal experiment,SCH(30 mg·kg-1)antagonized thepalpebral ptosis and akinesia symptoms caused by reserpine(2.5 mg·kg-1)treatment(P＜0.05)compared with model group,but had little effect on the drop of the anal temperature.Moreover,SCH did not increase the lethality caused by subcutaneous injection of yohimbine（30 mg·kg-1）at the threshold lethal dosage.CONCLUSIONSCH exerts potential antidepressant-like effect in mice.

depression;Schisandra chinensis;schisandrin

SU Rui-bin,E-mail:ruibinsu@126.com,Tel:(010)66931607;ZHANG You-zhi,E-mail:bcczyz@ 163.com,Tel:(010)66874620

R964

：A

：1000-3002-（2017）03-0244-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2017.03.007

Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China(81274117);and National Natural Science Foundation of China(81302761)

2016-12-09接受日期：2017-03-16）

（本文編輯：趙楠）

國家自然科學基金（81274117）；國家自然科學基金（81302761）

許方敏，女，碩士研究生，主要從事精神藥理學研究；蘇瑞斌，男，研究員，主要從事新藥評價及神經精神藥理學研究；張有志，男，研究員，主要從事精神藥理學研究。

蘇瑞斌，E-mail：ruibinsu@126.com，Tel：（010）66931607；張有志，E-mail：bcczyz@163.com，Tel：（010）66874620