蕫 晗， 國(guó) 琦， 郭志恒， 王 哲， 劉松巖

內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病的meta分析

蕫 晗1， 國(guó) 琦2， 郭志恒3， 王 哲1， 劉松巖2

目的 分析內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的相關(guān)性。 方法 本研究檢索時(shí)間從建庫(kù)至2016年10月。納入評(píng)估eNOS多態(tài)性(+894G/T)與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間相關(guān)性的病例對(duì)照研究。初篩得到365篇全文，經(jīng)篩選后最終5篇納入meta分析。異質(zhì)性分析采用I2檢驗(yàn)，文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)估采用英國(guó)牛津循證醫(yī)學(xué)中心文獻(xiàn)嚴(yán)格評(píng)價(jià)項(xiàng)目。結(jié)果 與GG+GT基因型相比，TT基因型增加有先兆偏頭痛(migraine with aura，MA)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.56，95%CI1.11～2.20；I2= 0%，P=0.01)。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2= 0%，P=0.02)。結(jié)論 本研究提示內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間有一定的關(guān)系，并且可能因人群遺傳背景的不同與偏頭痛亞型有一定關(guān)聯(lián)。

內(nèi)皮型一氧化氮合酶； 基因多態(tài)性； 偏頭痛； 易感性

偏頭痛(migraine)是一種常見(jiàn)的慢性神經(jīng)血管性疾病，可伴有惡心、嘔吐、畏聲、畏光等先兆癥狀。根據(jù)2004年國(guó)際頭痛協(xié)會(huì)(International Headache Society，IHS)分類標(biāo)準(zhǔn)，偏頭痛分為有先兆偏頭痛(migraine with aura，MA)和無(wú)先兆偏頭痛(migraine without aura，MO)。研究表明一氧化氮(nitric oxide，NO)與偏頭痛發(fā)病有關(guān)[1，2]，而一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)是催化L-精氨酸生成NO的催化酶，其與偏頭痛發(fā)病的相關(guān)性也受到越來(lái)越多學(xué)者的重視[3，4]。NOS包括三種同工酶，即內(nèi)皮型NOS(endothelial，eNOS)、誘導(dǎo)型NOS(inducible NOS，iNOS)與神經(jīng)元型NOS(neuronal NOS，nNOS)。人類eNOS基因位于第7號(hào)染色體長(zhǎng)臂(7q36)，全長(zhǎng)約21 kb，含26個(gè)外顯子和25個(gè)內(nèi)含子，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)eNOS基因存在多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，其中第7號(hào)外顯子核苷酸894處G被T所代替，導(dǎo)致編碼產(chǎn)物第298位氨酸酸由Glu變?yōu)锳sp(Glu298Asp)，后者可導(dǎo)致NO生成減少[3]。目前有關(guān)eNOS基因894G/T多態(tài)性與偏頭痛關(guān)系的研究結(jié)論不一[3～7]。本研究通過(guò)meta分析探究eNOS基因894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索 本研究以“偏頭痛、一氧化氮合酶、多態(tài)性”為主題詞，計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(CBM)、維普中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(VIP)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)；以“migraine，endothelial nitiric oxide synthase，eNOS，NOS3，polymorphism，migraine disorder”為主題詞檢索Pubmed、Embase、Cochrane、Web of Science等英文數(shù)據(jù)庫(kù)，并手工檢索納入研究的參考文獻(xiàn)。檢索時(shí)間從建庫(kù)至2016年10月。

1.2 文獻(xiàn)納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)包括：(1)公開(kāi)發(fā)表的一氧化氮合酶基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)熱相關(guān)性的病例對(duì)照研究(文種不限)；(2)研究對(duì)象均為偏頭痛患者及對(duì)照人群，民族不限；(3)研究方法均為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)或PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCT-RFLP)技術(shù)；(4)對(duì)照組基因型分布經(jīng)Hardy-Weinberg(H-W)定律檢驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)方法不恰當(dāng)，數(shù)據(jù)不全文，基礎(chǔ)性研究、綜述、病例報(bào)道、單臂研究。

1.3 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià) 參考英國(guó)牛津循證醫(yī)學(xué)中心文獻(xiàn)嚴(yán)格評(píng)價(jià)項(xiàng)目(Oxford critical appraisal skill program，Oxford CASP，2004)評(píng)價(jià)納入病例對(duì)照研究的文獻(xiàn)質(zhì)量[8]。包括：(1)樣本量是否充足；(2)診斷標(biāo)準(zhǔn)是否清楚；(3)分組情況是否匹配；(4)對(duì)照組與病例組是否可比；(5)基因檢測(cè)方法是否合理；(6)數(shù)據(jù)是否充分。由2名研究者采用統(tǒng)一數(shù)據(jù)表獨(dú)立提取數(shù)據(jù)，而后交叉核對(duì)，必要時(shí)聯(lián)系原文獻(xiàn)作者，以確定試驗(yàn)的具體實(shí)施過(guò)程。在數(shù)據(jù)提取過(guò)程中如有爭(zhēng)議，有第三位研究者一起參考原文討論后上協(xié)商解決。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 對(duì)納入研究的基因型分布進(jìn)行H-W定律檢驗(yàn)，并應(yīng)用Stata軟件(12.0版本)分析敏感性。采用RevMan 5.2軟件進(jìn)行Meta分析。采用卡方檢驗(yàn)對(duì)研究結(jié)果的異質(zhì)性進(jìn)行檢驗(yàn)，用I2評(píng)價(jià)異質(zhì)性大小(I2=0%～25%，無(wú)異質(zhì)性；I2=0%～25%，中度異質(zhì)性；I2=50%～75%，高異質(zhì)性；I2=75%～100%，超高異質(zhì)性)。若I2<50%采用固定效應(yīng)模型，I2≥ 50%采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并，并計(jì)算OR值及95%CI。采用Stata分析發(fā)表偏移。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 入選文獻(xiàn)基本情況 初檢共獲得到395篇文獻(xiàn)，排除綜述、系統(tǒng)評(píng)價(jià)、研究位點(diǎn)非一氧化氮合酶基因G894T、重復(fù)發(fā)表及數(shù)據(jù)不全文獻(xiàn)，最終納入5篇文獻(xiàn)[3～7]，文獻(xiàn)篩選過(guò)程(見(jiàn)圖1)。文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果顯示納入研究的診斷標(biāo)準(zhǔn)明確，樣本量充足，病例組與對(duì)照組匹配具有可比性，采用的基因檢測(cè)方法合理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)明確。納入研究的對(duì)照組基因型分布均符合H-W定律。納入文獻(xiàn)的基本特征(見(jiàn)表1)。本研究共納入偏頭痛患者997例，對(duì)照組805例，基因型分布及基因頻率(見(jiàn)表2)。

2.2 Meta分析 894G/T基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病相關(guān)性(見(jiàn)表3)。GG/GT+TT、TT/GT+GG基因型及G/T等位基因與偏頭痛發(fā)病無(wú)明顯相關(guān)。亞組分析發(fā)現(xiàn)：與GT+GG基因型相比，TT基因型增加MA的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(見(jiàn)圖2)，而GT+TT基因型與偏頭痛及其亞型的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)(見(jiàn)表3)。T等位基因亦與偏頭痛及其亞型的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)(見(jiàn)表3)。

對(duì)人群進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，在高加索(OR=1.32，95%CI0.93～1.86；I2=0%，P=0.12)及非高加索人群(OR=1.98，95%CI0.91～4.31；I2=0%，P=0.91)中，TT基因型與GT+GG基因型相比，并不增加偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2=0%，P=0.02)。

2.3 異質(zhì)性分析 由于本研究初始文獻(xiàn)合并過(guò)程中異質(zhì)性較大，因而需進(jìn)行異質(zhì)性分析。通過(guò)Galbraith圖確定異質(zhì)性來(lái)源(見(jiàn)圖3)，發(fā)現(xiàn)文獻(xiàn)[7]存在異質(zhì)性，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)該研究患者與對(duì)照組性別構(gòu)成有差異。分析T與G等位基因及GT+TT與GG基因型與偏頭痛發(fā)病關(guān)系時(shí)，發(fā)現(xiàn)文獻(xiàn)[7]剔除后，剩余文獻(xiàn)合并時(shí)異質(zhì)性很小。T與G等位基因相比偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)并不增加(OR=1.03，95%CI0.89～1.20；I2=0%，P=0.68)。GT+TT基因型與GG型者相比偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相當(dāng)(OR=1.21，95%CI0.98～1.50；I2=3%，P=0.38)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)GT+TT基因型與MO發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)高有關(guān)(OR=1.31，95%CI1.03～1.68；I2=0%，P=0.03)。

2.4 發(fā)表偏移 Begg’s及Egger’s檢驗(yàn)均未發(fā)現(xiàn)明顯發(fā)表偏移存在，P分別為1.000與0.198。Begg’s檢驗(yàn)漏斗圖(見(jiàn)圖4)。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

圖2 內(nèi)皮型一氧化氮合酶多態(tài)性與偏頭痛亞型的相關(guān)性

圖3 Galbraith圖評(píng)估納入研究的異質(zhì)性

圖4 Begg’s漏斗圖評(píng)估發(fā)表偏移

文獻(xiàn)年份地域例數(shù)偏頭痛對(duì)照組年齡(歲)偏頭痛對(duì)照組女性比例偏頭痛對(duì)照組1234520062008201120122014意大利西班牙巴西巴西土耳其1563371781501761253411179912331．4±7．6037．8±15．1##37．5±9．0532．7±9．2037．2±14．135．9±1．1036．0±1．2336．0±10．178．80%73．90%100%100%84．70%58．40%73．40%100%100%61．80%

#該研究分別給出MA與MO患者年齡，與對(duì)照比均無(wú)顯著性差異

3 討 論

雖然有關(guān)偏頭痛的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明了，但NO在偏頭痛發(fā)病中的作用受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的公認(rèn)。應(yīng)用NO供體可誘導(dǎo)偏頭痛患者出現(xiàn)偏頭痛樣頭痛發(fā)作，提示NO與偏頭痛發(fā)作有關(guān)[9]。有研究也證實(shí)偏頭痛患者頭痛發(fā)作時(shí)其腦脊液及血中NO濃度明顯升高，間歇期偏頭痛患者腦脊液及血中NO濃度也高于對(duì)照組[2]。NO是由NOS催化L-精氨酸生成，而eNOS基因第7號(hào)外顯子核苷酸894處G被T所代替，導(dǎo)致編碼產(chǎn)物第298位氨酸酸由Glu變?yōu)锳sp(Glu298Asp)，后者可導(dǎo)致NO生成減少。因此，理論上推測(cè)T等位基因或TT基因型可能與患者偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低有關(guān)，而G等位基因或GG基因型可能與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)高有關(guān)。

然而，Borroni等研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照相比，eNOS基因TT型可使MA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加約2倍。對(duì)于偏頭痛患者，與MO患者相比，eNOS基因GG型可使MA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加約3倍，這與上述推論并不一致[3]。Eroz等也報(bào)道TT基因型與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)[7]。上述結(jié)果提示偏頭痛發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性。但Toriello等并未發(fā)現(xiàn)eNOS的894G/T基因多態(tài)性與偏頭痛及其亞型存在相關(guān)性[4]。Goncalves進(jìn)行的兩項(xiàng)研究亦發(fā)現(xiàn)894G/T基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)[5，6]。

表2 納入研究的基因型分布及基因頻率

MA：有先兆偏頭痛，MO無(wú)先兆偏頭痛

表3 內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

本研究發(fā)現(xiàn)，在全部人群中，TT純合子突變體增加MA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)約1.5倍，而GT+TT基因型增加偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)約1.3倍。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)約1.5倍。由于本研究部分文獻(xiàn)合并過(guò)程中存在一定的異質(zhì)性，因此，我們采用了Galbraith分析潛在異質(zhì)性較大文獻(xiàn)。剔除該文獻(xiàn)后，后續(xù)合并文獻(xiàn)過(guò)程中，異質(zhì)性均較小。Egger’s與Begg’s檢驗(yàn)均提示本研究不存在發(fā)表偏移。

綜上，本研究提示內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態(tài)性與偏頭痛發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間有一定的關(guān)系，并且可能與人群遺傳背景的不同及偏頭痛亞型有一定關(guān)聯(lián)。

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Endothelial nitric oxide synthase(+894G/T)polymorphism and migraine susceptibility：a meta-analysis

DONGHan，GUOQi，GUOZhiheng，etal.

(DepartmentofGeriaficMedicine，theFirstHospitalofJilinUniversity，Changchun130021，China)

Objective Aims：To evaluate the correlations between endothelial nitric oxide synthase(eNOS)polymorphism(+894G/T)and the risk of migraine. Methods A literature search was performed for case-control studies focusing on eNOS polymorphism(+894G/T)and risk of migraine through October 2016.From 395 full-text articles，5 were included in this study. Heterogeneity was assessed with theI2index and quality assessment was performed using Oxford critical appraisal skill program. Results Compared with GG+GT genotypes，TT genotype was associated with migraine with aura(OR=1.56，95%CI1.11～2.20；I2=0%，P=0.01). In non-Caucasian population，GT+TT genotypes increased migraine susceptibility compared with GG genotype(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2=0%，P=0.75). Conclusion This meta-analysis indicated a linkage between eNOS polymorphism(+894G/T)and the risk of migraine，which may be associated with enthicity and migraine subtypes.

Endothelial nitric oxide synthase； Polymorphism； Migraine； Susceptibility

2017-01-10；

2017-03-05

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院老年病科，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春 130033；3.吉林大學(xué)第一醫(yī)院產(chǎn)科，吉林 長(zhǎng)春 130021)

劉松巖，E-mail：yan1966@163.com；王 哲，E-mail：wangzhe1989@me.com

1003-2754(2017)03-0254-04

R747.2

A