劉衛(wèi)梅

（河南省焦作市第二人民醫(yī)院 病理科，河南 焦作 454001）

宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）屬于癌前病變，按其累及上皮程度的不同分為3級(jí)：上皮內(nèi)瘤變I級(jí)（CIN I）﹑上皮內(nèi)瘤變II級(jí)（CIN II）及上皮內(nèi)瘤變III級(jí)（CIN III），CIN分級(jí)越高，發(fā)展為浸潤(rùn)性癌的機(jī)會(huì)越多。宮頸癌是目前危害婦女健康的常見病，占所有女性惡性腫瘤的12%左右，在女性生殖道腫瘤中發(fā)病率最高，一般與早婚﹑多產(chǎn)﹑性紊亂﹑人乳頭狀瘤病毒病毒（human papilloma virus, HPV）感染和地理環(huán)境等因素有關(guān)。任何腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移都需要有新生血管的形成，而血管形成又依賴于血管生長(zhǎng)因子[1]。目前已證明許多腫瘤細(xì)胞分泌血管生長(zhǎng)因子。與宮頸癌血管生成相關(guān)的血管因子主要有堿性成纖維生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor, bFGF），血管內(nèi)皮因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）等。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)研究浸潤(rùn)性和非浸潤(rùn)性宮頸癌bFGF及其受體（flg）﹑VEGF及其受體（flt；flk）的表達(dá)，并探討其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集本院2010年‐2015年經(jīng)病理診斷的68 例宮頸癌標(biāo)本，年齡最小38歲，最大76歲，中位年齡為58.2歲。將其分為兩組：一組為浸潤(rùn)性癌44例，另一組為非浸潤(rùn)癌（CIN III）24例。標(biāo)本來源為宮頸活檢或手術(shù)切除病理標(biāo)本。其中手術(shù)切除33例，活檢35例。

1.2 試劑

兔抗人VEGF多克隆抗體和兔抗人bFGF多克隆抗體﹑DAB顯色劑﹑S-P試劑盒均購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 方法

腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度為3 μm，脫蠟﹑水洗，滴加一抗﹑二抗，用已知陽性結(jié)腸癌切片作陽性對(duì)照，用PBS緩沖液做陰性對(duì)照，滅活內(nèi)源性酶用3%雙氧水，滴加復(fù)合消化液，山羊血清封閉，一抗孵化切片（置于濕盒中，4℃冰箱內(nèi)過夜），二抗孵化切片滴加試劑，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片，顯微鏡觀察。

1.4 結(jié)果判斷

腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)含有棕黃色或棕褐色顆粒的為陽性，每張切片在10×20倍視野下連續(xù)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為弱陽性（±），6%～40%為陽性（+），＞40%為強(qiáng)陽性（++），沒著色為陰性（-）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CIN III患者bFGF及其受體、VEGF及其受體的表達(dá)

24例宮頸CIN III患者中VEGF陰性（-）5例，弱陽性（±）7例，陽性（+）6例，強(qiáng)陽性（++）6例；flt陰性（-）5例，弱陽性（±）11例，陽性（+）4例，強(qiáng)陽性（++）4例；flk陰性（-）10例，弱陽性（±）4例，陽性（+）8例，強(qiáng)陽性（++）2例；bFGF陰性（-）4例，弱陽性（±）9例，陽性（+）9例，強(qiáng)陽性（++）2例；flg陰性（-）14例，弱陽性（±）5例，陽性（+）5例，強(qiáng)陽性（++）無。見表1。

2.2 宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者bFGF及其受體、VEGF及其受體的表達(dá)

24例CIN III患者中15例進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為6個(gè)月～54年不等，平均2.9年，其中5項(xiàng)指標(biāo)都陽性的6例，術(shù)后均有復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)時(shí)間8個(gè)月～3.1年，平均12.6個(gè)月，占25.0%，其余19例5項(xiàng)指標(biāo)均有一項(xiàng)或一項(xiàng)以上陰性，且陽性指標(biāo)多為弱陽性。

44例宮頸癌患者中VEGF陰性（-）2例，弱陽性（±）3例，陽性（+）13例，強(qiáng)陽性（++）26例；flt陰性（-）2例，弱陽性（±）4例，陽性（+）16例，強(qiáng)陽性（++）22例；flk陰性（-）2例，弱陽性（±）7例，陽性（+）21例，強(qiáng)陽性（++）14例；bFGF陰性（-）2例，弱陽性（±）2例，陽性（+）11例，強(qiáng)陽性（++）29例；flg陰性（-）3例，弱陽性（±）12例，陽性（+）22例，強(qiáng)陽性（++）7例。見表1。44例宮頸癌患者中僅有6 例1﹑2項(xiàng)陰性表達(dá)，占13.6%，其余38例均有不同程度的陽性表達(dá)，且多數(shù)為陽性或強(qiáng)陽性，占86.4%。

表1 CIN III和宮頸癌患者中bFGF及其受體、VEGF及其受體的表達(dá) 例

3 討論

早期腫瘤生長(zhǎng)比較緩慢，主要靠周圍組織的彌散作用提供營養(yǎng)，伴隨著毛細(xì)血管的生成，腫瘤能夠獲得足夠的營養(yǎng)物質(zhì)而迅速生長(zhǎng)，并通過血管發(fā)生轉(zhuǎn)移，表明腫瘤的生物學(xué)行為在一定程度上依賴新血管的形成。VEGF是一種重要的選擇性促血管生成因子，以旁分泌方式作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，具有刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂﹑增殖而促進(jìn)腫瘤血管生成，并誘導(dǎo)產(chǎn)生蛋白水解酶﹑間質(zhì)膠原酶和組織因子來促進(jìn)血管形成的作用；同時(shí)還可提高血管通透性，導(dǎo)致腫瘤間質(zhì)水腫，引起細(xì)胞外基質(zhì)改變，從而為腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移提供合適的基礎(chǔ)。Bamias等[1]研究認(rèn)為腫瘤細(xì)胞因缺氧﹑基因突變及細(xì)胞因子的作用促進(jìn)VEGF的分泌增加致使腫瘤微血管過度增長(zhǎng)。Chen等[2]研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的血管生成是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移所必需的，VEGF可誘導(dǎo)腫瘤組織周圍血管網(wǎng)的形成。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）與各種腫瘤新生血管生成之間的關(guān)系已得到廣泛認(rèn)可，近幾年來，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了一些特異性作用于淋巴管內(nèi)皮的生長(zhǎng)因子及其受體，為探討淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移開辟了新的途徑[2]。既往研究[4]結(jié)果表明：VEGF的分泌增加可促進(jìn)腫瘤微血管增長(zhǎng)，腫瘤的血管生成是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移所必需的，微血管密度作為衡量血管生成的定量指標(biāo)，與腫瘤的發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。bFGF是一種具有廣泛生物學(xué)活性的多肽，通過細(xì)胞表面的受體對(duì)來源于外胚層和中胚層的細(xì)胞發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖﹑細(xì)胞遷移和新生血管生成等作用。近年研究發(fā)現(xiàn)，bFGF在多種惡性腫瘤細(xì)胞中過度表達(dá)，特別是對(duì)腫瘤新生血管生成起著重要作用，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展﹑浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[5-6]。bFGF不僅可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，還可調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，從而影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附遷移及成管過程。除此之外bFGF還與VEGF﹑血小板衍生因子（platelet derived growth factor, PDGF）等細(xì)胞因子相互協(xié)同，組成血管新生的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)[7-8]。作為促進(jìn)血管生成的最重要的因子——血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，在宮頸癌的血管生成中起重要的作用，bFGF也是宮頸癌血管新生的重要而關(guān)鍵的因子，實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)﹑轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)是血管新生[4-5]。有學(xué)者[5]研究表明，宮頸CIN III和浸潤(rùn)性宮頸癌的腫瘤血管生成是通過不同的作用途徑的，宮頸CIN III的血管生成主要是通過VEGF，VEGF在宮頸CIN III中表達(dá)率高，VEGFm RNA可以作為宮頸癌的預(yù)后因子。有學(xué)者[6]報(bào)道，在凋亡抑制基因bcl-2中bFGF高表達(dá)的宮頸癌組織中含量明顯增多，是宮頸癌局部復(fù)發(fā)的早期預(yù)后指標(biāo)。本組研究結(jié)果顯示：①血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）及其受體不但在宮頸CIN III中有陽性表達(dá)，在浸潤(rùn)性癌中也有陽性表達(dá)，并且在宮頸浸潤(rùn)性癌中的陽性表達(dá)率明顯高于宮頸CIN III（P ＜0.05）。②bFGF與VEGF在宮頸腫瘤的促血管生成中可能有相互促進(jìn)作用，共同檢測(cè)bFGF及其受體flg，VEGF及其受體flt﹑flk對(duì)判斷宮頸癌的預(yù)后有非常重要的意義。③宮頸浸潤(rùn)性癌與宮頸CIN III 5項(xiàng)指標(biāo)陽性表達(dá)間非常差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），表明5項(xiàng)指標(biāo)的共同表達(dá)情況與宮頸癌的浸潤(rùn)與生長(zhǎng)密切相關(guān)。④隨訪結(jié)果顯示：5項(xiàng)指標(biāo)在宮頸浸潤(rùn)性癌中的共同表達(dá)或高表達(dá)，提示預(yù)后較差，而5項(xiàng)指標(biāo)在宮頸CIN III患者中的共同表達(dá)可以作為評(píng)估宮頸CIN III早期復(fù)發(fā)的指標(biāo)。轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)是惡性腫瘤的共性，也是宮頸腫瘤生物學(xué)行為特征。筆者通過免疫組織化學(xué)方法（S-P法）探討宮頸浸潤(rùn)性癌與bFGF及其受體﹑VEGF及其受體的表達(dá)及其臨床意義，發(fā)現(xiàn)44例浸潤(rùn)性癌的表達(dá)5項(xiàng)指標(biāo)均為陽性38例，占86.4%，其中僅6例1﹑2項(xiàng)指標(biāo)為陰性表達(dá)，占13.6%。24例非浸潤(rùn)性癌患者中5項(xiàng)指標(biāo)均陽性6 例（為術(shù)后復(fù)發(fā)病例），占25.0%，浸潤(rùn)性宮頸癌與宮頸CIN III表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。有研究顯示，由細(xì)胞外基質(zhì)或由腫瘤細(xì)胞分泌，啟動(dòng)的血管生成活性因子如bFGF﹑轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β﹑VEGF和促血管生長(zhǎng)素等在腫瘤血管新生中有十分重要作用，其中bFGF和VEGF特異性高且最為關(guān)鍵，與腫瘤浸潤(rùn)﹑轉(zhuǎn)移有關(guān)[7]。本組檢測(cè)bFGF及其受體﹑VEGF及其受體等5項(xiàng)指標(biāo)有利于評(píng)估腫瘤預(yù)后。

腫瘤的轉(zhuǎn)移﹑復(fù)發(fā)與浸潤(rùn)密切相關(guān)。通過本次實(shí)驗(yàn)顯示：①宮頸浸潤(rùn)性癌組bFGF及其受體﹑VEGF及其受體表達(dá)明顯高于非浸潤(rùn)性癌（宮頸CIN III）組，提示5項(xiàng)指標(biāo)高表達(dá)和宮頸癌組織浸潤(rùn)能力密切相關(guān)。②非浸潤(rùn)性癌（宮頸CIN III）組中bFGF及其受體﹑VEGF及其受體高表達(dá)可作為評(píng)判腫瘤是否有復(fù)發(fā)傾向及浸潤(rùn)的重要指標(biāo)。③密切隨訪，定期檢查（如3～6個(gè)月復(fù)查一次宮頸液基薄層細(xì)胞檢測(cè)），以早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)病例，采取更為有效措施。臨床醫(yī)師對(duì)此類非浸潤(rùn)性癌（宮頸CIN III）的患者應(yīng)高度重視，對(duì)VEGF及其受體﹑bFGF及其受體高表達(dá)者應(yīng)采取更為積極的措施，選擇適當(dāng)?shù)氖中g(shù)方式。④病理醫(yī)生肩負(fù)的責(zé)任重大，不應(yīng)滿足于腫瘤分化程度和有無浸潤(rùn)的診斷，而應(yīng)檢測(cè)多項(xiàng)血管生成因子及其受體，以對(duì)臨床更有指導(dǎo)意義。

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