馮麗霞 楊靜

含氯消毒液對(duì)全自動(dòng)酶免檢測(cè)結(jié)果影響的分析

馮麗霞 楊靜

目的：驗(yàn)證含氯消毒液對(duì)全自動(dòng)酶免檢測(cè)結(jié)果的影響，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，消除影響因素。方法：控制變量法，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下使用未經(jīng)含氯消毒液處理的板架和經(jīng)含氯消毒液處理的板架比較分析，得出結(jié)論。結(jié)果：酶免試驗(yàn)過程中由于各種因素的影響，均會(huì)造成結(jié)果的異常。使用含氯消毒液浸泡過的板架對(duì)ELISA方法中以TMB做底物的試驗(yàn)有假陽性干擾。結(jié)論：對(duì)含氯消毒液消毒后重復(fù)使用的微板架流水沖洗干凈后用蒸餾水沖洗三次，再晾干使用可有效避免了酶免試驗(yàn)過程的花板現(xiàn)象發(fā)生。

含氯消毒劑；全自動(dòng)酶免；花板；分析

1 材料與方法

1.1 一般資料及設(shè)備 選用我站無償獻(xiàn)血者樣本。全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)為Uranus120AE，洗板機(jī)和酶標(biāo)儀均為進(jìn)口配置。手工檢測(cè)所用洗板機(jī)為TECAN. COLU.MBUS，酶標(biāo)儀為WellscanMK3。

1.2 消毒液 消毒片劑，生產(chǎn)商為德州安捷高科消毒制品有限公司，批號(hào)為20150102。

1.3 試劑 HBsAg（北京萬泰,批號(hào):B20141031），抗HCV（北京萬泰,批號(hào)C20150407）HBsAg室內(nèi)質(zhì)控血清（北京康徹斯坦生物，批號(hào):201411003），抗HCV室內(nèi)質(zhì)控血清（北京康徹斯坦生物，批號(hào):201411003）。試劑和質(zhì)控血清均批檢合格，在有效期內(nèi)使用。

1.4 環(huán)境 采用空調(diào)和加濕器控制溫濕度，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后按照清潔消毒操作規(guī)程用500mg/L含氯消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作臺(tái)及地面進(jìn)行消毒，同時(shí)對(duì)當(dāng)次實(shí)驗(yàn)中的板架及板條流水沖洗3次后，用3000mg/L含氯消毒液浸泡90分鐘，再用流水沖洗3次，晾干備下次實(shí)驗(yàn)用。

1.5 方法

1.5.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備。準(zhǔn)備未經(jīng)含氯消毒液處理的板架（簡(jiǎn)稱正常板架）和使用3000mg/L含氯消毒液浸泡消毒處理過的板架（簡(jiǎn)稱消毒板架）。

1.5.2 對(duì)照實(shí)驗(yàn)。先使用消毒板架，采用全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)與手工法進(jìn)行獻(xiàn)血者樣本檢測(cè)。然后對(duì)花板的項(xiàng)目用在不更換試劑和洗液的情況下，立即使用正常板架再次上機(jī)檢測(cè)，同時(shí)手工法使用消毒板架進(jìn)行檢測(cè)，膠紙封板。實(shí)驗(yàn)過程中，為便于雙排洗滌，對(duì)非整條及非偶數(shù)板條給予對(duì)應(yīng)補(bǔ)孔。（補(bǔ)孔板條有含氯消毒液處理與未處理兩種）操作方法按說明書進(jìn)行，全自動(dòng)酶免系統(tǒng)由工程師維護(hù)檢測(cè)，確保加樣、洗板等過程均未存在交叉污染。

1.5.3 控制變量消除其他干擾因素。對(duì)出現(xiàn)花板的檢測(cè)項(xiàng)目不更換試劑和洗液，立即使用正常板架再次檢測(cè)，全自動(dòng)酶免系統(tǒng)未出現(xiàn)花板。同時(shí)用浸泡過的微板架進(jìn)行手工法檢測(cè)，膠紙封板也未出現(xiàn)花板，說明未存在試劑、洗液和樣品之間的交叉污染。

1.6 統(tǒng)計(jì)處理 采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 全自動(dòng)酶免系統(tǒng)兩種類型板架檢測(cè)花板情況 使用消毒板架和正常架檢測(cè)同一批獻(xiàn)血員樣本抗HCV出現(xiàn)明顯差異，經(jīng)卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，χ2=19.26，P＜0.05。結(jié)果見表1。

表1 全自動(dòng)酶免系統(tǒng)兩種類型板架檢測(cè)花板情況

2.2 全自動(dòng)酶免檢測(cè)方法HBsAg陰性對(duì)照（N）、陽性對(duì)照（P）檢測(cè)值 更換檢測(cè)項(xiàng)目做陰陽性對(duì)照試驗(yàn)，使用兩種板架檢測(cè)HBsAg陰性對(duì)照血清樣品（N）和陽性血清樣品(P)，將所得s/co進(jìn)行比對(duì)分析，陽性對(duì)照（P）：t=2.64＞2.26，P＜0.05，陰性對(duì)照（N）：t=25.64＞2.26，P＜0.05，同樣存在差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 全自動(dòng)酶免檢測(cè)方法HBsAg陰性對(duì)照（N）、陽性對(duì)照(P)檢測(cè)值

3 討論

酶免試驗(yàn)過程中由于各種因素的影響，會(huì)造成結(jié)果的異常?；鶎友疽驒z測(cè)樣本數(shù)量少，用ELISA進(jìn)行獻(xiàn)血者樣本檢測(cè)時(shí)，存在板架重復(fù)使用的情況，為防止實(shí)驗(yàn)室感染，實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)重復(fù)使用的板架用“84”液進(jìn)行浸泡消毒處理。由于氯離子是鹵素元素，化學(xué)性質(zhì)活潑，具有氧化性質(zhì)，它與酶分子中的氨基或羧基起反應(yīng)，使得酶活性受到抑制[1]。不能完全催化底物顯色，致使OD值、S/CO值降低，因此使用84消毒液浸泡處理的板架進(jìn)行全自動(dòng)酶免檢測(cè)可使HBsA?gOD值及S/CO值降低，處于臨界值標(biāo)本檢測(cè)呈假陰性這與報(bào)道一致[2]。

含氯消毒液最顯著的優(yōu)勢(shì)是殺菌效果明顯，但殺菌的同時(shí)會(huì)殘留在空氣中，并污染洗滌液。我們所用的顯色劑“B”，主要成分是四甲基聯(lián)苯胺（TMB）,而酶標(biāo)記物中的酶為辣根過氧化物酶。實(shí)驗(yàn)中所使用的消毒片主要成分為氯，分解后的游離氯能取代TMB上的氫，使其呈藍(lán)色[3]，全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)出現(xiàn)花板是因板架及補(bǔ)孔的板條上含大量氯離子引起。手工法未出現(xiàn)花板，主要是因?yàn)榉跤^程中有膠粘封板，微孔與微孔間、微孔與外界空氣之間相對(duì)隔離，有效避免氯離子對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

同時(shí)，微板孵育過程中，加熱散發(fā)致孵育蓋上殘留一定量的氯離子以及使用流水沖洗板架的力度和時(shí)間不一，使板架中殘留的氯離子濃度不同，等因素，都均造成酶反應(yīng)孔的顏色變化,酶標(biāo)儀比色時(shí)樣本吸光度上升[4],造成HBsAg陰性對(duì)照血清樣品呈不同程度顯色。

我們通過調(diào)查和各種對(duì)照試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，“84”消毒液對(duì)ELISA方法中以TMB做底物的試驗(yàn)有假陽性干擾，尤其是使用“84”液浸泡過的板架，對(duì)全自動(dòng)酶免檢測(cè)結(jié)果存在嚴(yán)重的實(shí)驗(yàn)污染。為此，我們采取了一系列方法，如：實(shí)驗(yàn)前后開窗通風(fēng)，實(shí)驗(yàn)中工作人員不接觸84消毒液，對(duì)重復(fù)使用的微板架用流水沖洗干凈后用蒸餾水沖洗三次再晾干使用等系列措施，有效避免了酶免實(shí)驗(yàn)過程的花板現(xiàn)象發(fā)生。

[1]潘文干.生物化學(xué)[M].第5版.北京:人民出版社,2008:50-51.

[2]賢永娥.含氯消毒劑對(duì)酶聯(lián)免疫法結(jié)果的影響[J].中國(guó)健康月刊, 2011,30(4):377.

[3]朱勝.對(duì)一起含氯消毒劑影響酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2010,23(13):1896.

[4]劉忠倫,劉波,劉繼來.84消毒液對(duì)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)結(jié)果的影響[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2004,19(3):27-28.

A

1004-2725（2016）11-0845-02我站實(shí)驗(yàn)室在近期使用全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)對(duì)獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行HBsAg、抗HCV、抗-TP、抗HIV檢測(cè)的過程中，經(jīng)常發(fā)生各檢測(cè)項(xiàng)目不同程度花板的現(xiàn)象?；ò迨且蛳窗宀粡氐?、孵育時(shí)間過長(zhǎng)等多種因素造成的假陽性。為探究造成假陽性的原因,我們?cè)谥鹨慌懦渌蛩睾蠓治隽撕认疽簩?duì)全自動(dòng)酶免檢測(cè)結(jié)果影響，結(jié)果如下。

737100甘肅 金昌，金昌市中心血站檢驗(yàn)科

馮麗霞，E-mail:903696543@qq.com