蔣洪昆　呂程　呂桂樺

(廣西壯族自治區(qū)柳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 柳州　545000)

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艾滋病患者經(jīng)HAART治療前后免疫狀態(tài)比較分析

蔣洪昆呂程呂桂樺

(廣西壯族自治區(qū)柳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 柳州545000)

目的：檢測艾滋病患者經(jīng)高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(Highly active antiretroviral therapy，HAART)前后外周血CD4、CD8、CD3、NK、B細(xì)胞的表達(dá)情況，比較分析艾滋病患者治療前后免疫狀態(tài)。方法：采用流式細(xì)胞分析方法檢測艾滋病患者CD4、CD8、CD3、NK、B細(xì)胞的表達(dá)情況，所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。結(jié)果：在艾滋病患者外周血中，CD4+細(xì)胞比例、B細(xì)胞比例、CD4+/CD8+比值明顯低于正常人(P<0.01)，CD8+細(xì)胞比例、CD3+細(xì)胞比例明顯高于正常人(P<0.05)，NK細(xì)胞比例與正常人無顯著性差異。治療后CD4、 CD8、CD3絕對計(jì)數(shù)也較治療前明顯升高(P<0.05)，治療前后NK、CD4/CD8變化不明顯，治療后的B細(xì)胞百分比明顯低于治療前(P<0.05)。結(jié)論：艾滋病患者的免疫力明顯低于正常人，經(jīng)HAART治療后免疫力有所升高，但仍處于較低的水平。

艾滋?。幻庖郀顟B(tài)；HARRT

從艾滋病出現(xiàn)以來，國內(nèi)外的學(xué)者都對艾滋病做了大量的研究，CD4細(xì)胞的數(shù)量和功能的降低是引起人體免疫功能缺陷的主要原因, 它在維持機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫中具有樞紐作用。CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)作為直接測定免疫功能的方法是提供感染者免疫系統(tǒng)損害最明確的指標(biāo)[1]。CD8免疫細(xì)胞在防御、感染和控制HIV復(fù)制方面起著重要的作用，它可以直接通過裂解HIV感染的細(xì)胞，也可以通過分泌一些因子來抑制HIV的復(fù)制[2]。

HAART全稱Highly active antiretroviral therapy，高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療?，F(xiàn)在我們比較艾滋病患者經(jīng)HAART治療前后的各項(xiàng)免疫指標(biāo)變化，來監(jiān)測HAART的治療效果。

1　臨床資料與方法

1.1研究對象

1.1.1住院艾滋病患者

住院的艾滋病患者共123例，男97例，女26例，年齡18-82歲，平均年齡42歲，經(jīng)過免疫印跡法(Western Blot)確診為HIV感染，HIV抗體陽性，根據(jù)美國1993年修訂的HIV感染分類系統(tǒng)及AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)為C3期，平均CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)94·μl-1。

1.1.2門診HIV感染者

HIV感染者69例，男40例，女29例，年齡20-78歲，平均年齡36歲，經(jīng)過免疫印跡法(Western Blot)確診為HIV感染，HIV抗體陽性，未發(fā)病，平均CD4淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)280·μl-1。

1.1.3正常對照

正常健康志愿者共30例，男19例，女11例，年齡24-48歲，平均年齡36歲。

1.2方法

采用配對設(shè)計(jì)觀察33例艾滋病患者經(jīng)HAART治療前后各項(xiàng)指標(biāo)的變化情況。

用EDTA-K2抗凝的真空采血管收集外周血，48 h內(nèi)完成測定。CD4、CD8絕對計(jì)數(shù)采用FACSCount 流式細(xì)胞儀極其配套試劑。每份標(biāo)本收集30000個(gè)細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞亞群的測定采用FACSCalibur流式細(xì)胞儀極其配套試劑進(jìn)行檢測。

淋巴細(xì)胞亞群的測定采用FACSCalibur流式細(xì)胞儀極其配套試劑進(jìn)行檢測。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，陽性細(xì)胞率以均數(shù)表示，采用t檢驗(yàn)、方差分析、方差齊性檢驗(yàn)、相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2　結(jié)果

2.1艾滋病患者、無癥狀HIV感染者與正常對照組淋巴細(xì)胞亞群、T細(xì)胞亞群的比較

經(jīng)t檢驗(yàn)，艾滋病患者與無癥狀HIV感染者CD4+細(xì)胞比例、CD4+/CD8+比值明顯低于正常人(p=0.000)；而他們兩者CD8+細(xì)胞比例明顯高于正常人(p=0.000)；艾滋病患者CD3+細(xì)胞比例明顯高于正常人(P<0.05)，但無癥狀HIV感染者CD3+細(xì)胞與正常對照無顯著性差異(P>0.05)；三者NK細(xì)胞比例無顯著性差異(P>0.05)；艾滋病患者B細(xì)胞比例明顯低于正常人(P<0.05)，但無癥狀HIV感染者B細(xì)胞與正常對照無顯著性差異(P>0.05)。艾滋病患者CD4+細(xì)胞比例、CD4/CD8、明顯低于無癥狀HIV感染者(P<0.01)；其CD8+細(xì)胞比例明顯高于無癥狀HIV感染者(P<0.01)，而兩者在CD3細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞百分比上無明顯差異(P>0.05)，見表1。

表1　艾滋病患者、無癥狀HIV感染者與正常對照組比較

注：與正常對照相比，*P<0.05，**P<0.01；與無癥狀HIV感染者相比，△△P<0.01。

2.2艾滋病患者經(jīng)HAART治療前后各項(xiàng)指標(biāo)的比較

33例艾滋病患者經(jīng)HAART治療3個(gè)月后，得到的數(shù)值進(jìn)行配對檢驗(yàn)。治療后CD4絕對計(jì)數(shù)明顯高于治療前(P=0.021)，治療后CD8絕對計(jì)數(shù)也較治療前明顯升高(P=0.000)；治療前后CD4/CD8變化不明顯(P=0.710)，治療后CD3絕對計(jì)數(shù)明顯高于治療前(P=0.000)，治療前后NK細(xì)胞變化不大(P=0.116)，B細(xì)胞則變化較大，治療后的百分比明顯低于治療前(P=0.025)，治療后CD8+CD3+百分比明顯高于治療前(P=0.001)，見表2。

表2　艾滋病患者經(jīng)HAART治療前后各項(xiàng)指標(biāo)的比較

注：與治療前相比，*P<0.05。

3　討論

艾滋病是獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的簡稱，1981年才被人們認(rèn)識的一種新的性傳播疾病。是由人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)引起的人體細(xì)胞免疫功能缺陷，導(dǎo)致一系列條件致病微生物感染和腫瘤發(fā)生的致命性綜合征。AIDS的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但病毒和宿主因素相互作用的復(fù)雜過程是其主要原因。AIDS的最主要的特征之一是CD4 T細(xì)胞的逐漸丟失。人體內(nèi)CD4 T淋巴細(xì)胞是HIV的主要受體，在HIV直接和間接作用下，細(xì)胞大量被破壞和功能受損，導(dǎo)致細(xì)胞免疫缺陷。同時(shí)其他免疫細(xì)胞均不同程度受損，促進(jìn)并發(fā)各種嚴(yán)重的機(jī)會性感染和腫瘤發(fā)生，導(dǎo)致死亡。當(dāng)CD4細(xì)胞低于200個(gè)·μl-1時(shí)，逐漸出現(xiàn)臨床癥狀[3]。

我們對艾滋病患者、無癥狀HIV感染者、正常人做兩兩比較，CD4、CD4/CD8大大低于正常水平，而CD8則由于機(jī)體對HIV的免疫反應(yīng)而升高，這說明艾滋病患者的免疫功能極其低下，國內(nèi)有報(bào)道稱艾滋病患者NK細(xì)胞明顯低于健康對照組，而它與HIV感染組則無明顯差異[4]，國外也提出NK細(xì)胞在人感染HIV后數(shù)量降低[5]，并且與疾病進(jìn)展相關(guān)[6,7]，我們的實(shí)驗(yàn)得出艾滋病患者、HIV感染者、正常人三者NK細(xì)胞在總淋巴細(xì)胞中的百分比無明顯差異，這是由于報(bào)道的是NK細(xì)胞絕對計(jì)數(shù)而我們試驗(yàn)測出的是它占總淋巴細(xì)胞的百分比，這會受到T細(xì)胞和B細(xì)胞的影響，從表1我們可以看出NK的百分比從艾滋病患者到無癥狀HIV感染者再到正常人是有上升趨勢的。無癥狀的HIV感染的免疫功能較艾滋病患者高，但仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于正常人的水平。

對艾滋病的治療目前國內(nèi)通常使用包括蛋白酶抑制劑在內(nèi)的兩種或多種藥物的聯(lián)合療法被稱為高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)，可以延長病人的壽命，使病死率降低[8]。艾滋病治療的原則是早診斷、早治療。采用抗病毒、抗機(jī)會性感染、抗腫瘤及全身支持治療的綜合療法。自1990年國內(nèi)治療艾滋病以來，尚無統(tǒng)一的治療方案和評價(jià)指標(biāo)。目前比較常用方法是強(qiáng)效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)，通過抑制 HIV復(fù)制，重建機(jī)體免疫系統(tǒng)，降低AIDS的發(fā)病率和死亡率[9]。本試驗(yàn)標(biāo)本來源龍?zhí)夺t(yī)院所用的HAART治療方法為2個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑+1個(gè)非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑包括齊多夫定、司他夫定、拉米夫定、去羥基苷、阿吧卡韋；非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑為奈韋拉平、依非韋倫；常用齊多夫定+拉米夫定+依非韋倫(奈韋拉平)，蛋白酶抑制劑因?yàn)槠涓弊饔煤艽?，會引起脂肪異常，在臨床上不常用。

CD4 T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)是艾滋病診斷、疾病分期、制定抗病毒治療和預(yù)防機(jī)會性感染方案的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)，CD4 T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)也是與病毒載量相配合預(yù)測疾病進(jìn)程的可靠指標(biāo)，這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)可以相互獨(dú)立預(yù)測艾滋病臨床過程和生存期。檢測 CD4細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法是流式細(xì)胞儀。本試驗(yàn)臨床上以CD4細(xì)胞絕對計(jì)數(shù)均<200個(gè)·μl-1并結(jié)合臨床表現(xiàn)為用藥標(biāo)準(zhǔn)，給予HAART治療。并以監(jiān)測CD4 T淋巴細(xì)胞上升程度為觀察治療的效果的指標(biāo)。

我們選取了33例患者，并觀察他們經(jīng)HAART治療后免疫狀況的改變情況，治療后CD4、CD8、CD3的絕對計(jì)數(shù)較治療前都有很大升高，這個(gè)結(jié)果與其它一些作者的報(bào)道一致[10]，CD4、CD8、CD3細(xì)胞數(shù)量的回升表面了機(jī)體免疫功能的恢復(fù)，說明高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)是治療艾滋病有效的治療方案[11,12]，能夠有效抑制HIV的復(fù)制，重建機(jī)體的免疫系統(tǒng)[13]。

1葉景榮,孫偉東,趙月娟,等 2006年北京市人類免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者免疫狀況分析[J]. 疾病監(jiān)測, 2007, 20(9): 591-593.

2LiebeRman J, Shankar P, Manjunath N, et al. Dressed to kill a review of why antiviral CD8 T lymphocytes fail to prevent progressive immunodeficiency in HN-I infection[J]. Blood, 2001, 98(6): 1667-1677.

3孫傳正. CD4、CD8細(xì)胞與艾滋病治療免疫評價(jià)及實(shí)踐[J]. 中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2005, 11(8): 633-644.

4劉瑛,尚紅,張子寧,等. 自然殺傷細(xì)胞表面抗原在無癥狀人免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者中的表達(dá)[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2003. 26(6): 365-367.

5Hu PF, Hultin LE, Hultin P, et al. Natural killer cell innunodeficiency in HIV disease is manifest by profoundly decreased numbers of CD16+CD56+cells and expansion of a population of CD16dimCD56-cells with low lytic activity[J]. J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol, 1995, 10(3): 331-340.

6Sondergaare SR, Ullum H, SkinhoJ P, et al. Epinephrine-induced mobilization of natural killer(NK) cells and NK-like T cells in HIV-infected patients[J]. Cell Immunology, 1999, 197(2): 91-98.

7Ullum H, Cozzi Lepri A, Aladdin H, et al. Natural immunity and HIV disease progression[J]. AIDS, 1999, 13(5): 557-563.

8孫蕾,李倩如,楊璇,等. HAART對人類免疫缺陷病毒感染者淋巴細(xì)胞亞群的影響[J]. 現(xiàn)代免疫學(xué), 2007, 27(4): 306-309.

9張景祥,徐振源,吳有煒,等. 細(xì)胞與艾滋病治療免疫評價(jià)的研究[J]. 疾病控制雜志, 2007, 8(4): 339-341.

10阮桂仁,邱志峰,李太生,等. 高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療12個(gè)月后艾滋病患者的免疫重建觀察[J]. 中華內(nèi)科雜志, 2006, 45(7): 569-572.

11Panel on clinical practices of HIV infection. Guidelines for the use of antiretroviral agents in HIV-infected adults and adolescents[S]. Washington D.C: Government Printing Office, 2005.

12Severe P, Leger P, Charle M, et al. Antiretroviral therapy in a thousand patients with AIDS in Haiti[J]. N Engl J Med, 2005, 353(22): 2325-2334.

13Li TS, Tuviana R, Katlama C, et al. Long-lasting recovery in CD4+ T-cell function and viral-load reduction after highly active antiretroviral therapy in advanced HIV-1 disease[J]. Lancet, 1998, 351(6): 1682-1686.

Comparation of immune status in patients with AIDS before and after the treatment with HAART

Jiang Hong-kun, Lv Cheng, Lv Gui-hua

(Department of Clinic Laboratory, Liuzhou People’s Hospital,Guangxi Liuzhou 545000)

Objective： To investigate the changes of CD4, CD8, CD3, NK, B lymphocytes in peripheral blood of patients with AIDS, and compare the immune status in patients with AIDS before and after the treatment with highly active antiretroviral therapy (HARRT). Methods: CD4, CD8, CD3, NK, B lymphocytes in blood were detected using flow cytometry in patients with AIDS. All of the numerical data is analyzed with SPSS13.0 statistics software. Results: The percentage of CD4+, B cell and CD4+/CD8+in patients with AIDS was lower than that of healthy adults (P<0.01). The percentage of CD8+and CD3+cell was higher than that of healthy adults (P<0.05). NK cell was approached that of healthy adults. After three months treated with HAART, we collected the results and handled it with paired-samples t test. CD4, CD8, CD3 count in patients treated with HAART was significant increased than those in untreated (P<0.05), but the changes on NK, CD4/CD8 were not significantly，the percentage of B after therapy was lower than that of before (P<0.05). Conclusion: Patients with AIDS have lower immune activity than that of healthy population. After HAART therapy，the immune activity had reversed but still lower than healthy population.

AIDS; Immune Status; HARRT

蔣洪昆，女，主管技師，主要從事臨床免疫生化檢驗(yàn)，Email：JHK_MAO@163.com。

2016-3-25)