汪海珍，張予晉，楊志波*

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410005）

潤(rùn)膚保濕軟膏對(duì)血虛風(fēng)燥證銀屑病皮膚屏障功能干預(yù)作用及機(jī)制的研究

汪海珍，張予晉，楊志波*

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410005）

目的探尋潤(rùn)膚保濕軟膏對(duì)銀屑病血虛風(fēng)燥型皮膚屏障功能的影響及作用機(jī)制。方法60例血虛風(fēng)燥型銀屑病患者隨機(jī)分為兩組，治療組30例使用潤(rùn)膚保濕軟膏治療，對(duì)照組30例使用尿素軟膏治療，4周后依據(jù)PASI評(píng)分法判定療效；使用Soft5.5皮膚六參數(shù)測(cè)試儀，對(duì)用藥前后患者皮損角質(zhì)層含水量、皮膚中油脂水平及pH值進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)薄層層析、BIO-RAD Ge1Doc凝膠成像系統(tǒng)、Quantity One軟件分析及RT-PCR、Western blot的方法檢測(cè)分析治療前、后皮損神經(jīng)酰胺（Cer）、水通道蛋白（AQP-3）的含量；比較分析兩組間及組內(nèi)的臨床療效及各項(xiàng)指標(biāo)變化，探尋潤(rùn)膚保濕軟膏對(duì)血虛風(fēng)燥型銀屑病皮膚屏障功能的干預(yù)作用及機(jī)制。結(jié)果兩組治療后均有一定臨床療效，治療組明顯優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05）；兩組治療后皮脂含量、角質(zhì)層含水量均高于治療前（P＜0.05），而pH值治療組明顯低于治療前（P＜0.05），對(duì)照組pH值無(wú)明顯改變（P＞0.05）；治療后兩組水通道蛋白（AQP-3）、神經(jīng)酰胺（Cer）的含量高于治療前（P＜0.05）；治療組治療后皮脂含量、pH值、AQP-3、Cer較對(duì)照組治療后改善顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論潤(rùn)膚保濕軟膏對(duì)血虛風(fēng)燥型銀屑病患者皮膚的屏障功能有顯著調(diào)節(jié)及修復(fù)作用，有可能是通過(guò)神經(jīng)酰胺和水通道蛋白對(duì)皮膚屏障功能進(jìn)行修復(fù)。

銀屑??；血虛風(fēng)燥型；潤(rùn)膚保濕軟膏；皮膚屏障

〔Abstract〕Objective To investigate the effect of skin-moistening lotion on skin barrier functions of psoriasis patients with blood deficiency and wind dryness syndrome and its mechanism of action.M ethods Sixty psoriasis patients with blood deficiency and wind dryness syndrome were random ly divided into two groups，thirty cases in treatment group were treated by the skin-moistening lotion and the other thirty patients in control group were treated by the urea frost.The healing effect was evaluated according to the PASI method after 4 weeks.The moisture of horny layer of patients'skin injury，fat level and pH value were determined before and after treatments.The Cer and AQP-3 level were analyzed by using the following methods including thin-layer chromatography，BIO-RAD Ge1Doc gelatin imaging system，Quantity One software，RT-PCR and Western blot.The clinical efficacy and indicator changes were compared between the two groups to investigate the intervention action of skin-moistening lotion on skin barrier functions of psoriasis patients with blood deficiency and wind dryness syndrom and itsmechanism of action.Results The clinical efficacy of the two groups is both good after treatments，but the treatment effect for the treatment group is superior to the comparison group（P＜0.05）.Themoisture of horny layer of patients'skin injury and fat levelafter treatment is higher than that of before treatment（P＜0.05）.The pH value for the treatment group is lower than that of before treatment（P＜0.05），while there is no change for the pH value of the comparison group（P＞0.05）.After treatments，the Cer and AQP-3 level of the two groups are higher than that before treatment（P＜0.05），and the fat level，pH value，Cer and AQP-3 level of the treatment group are enhanced more than that of the comparison group.The difference has statistical significance（P＜0.05）. Conclusion The skin-moistening lotion shows distinct regulation and restoration actions on on skin barrier functions of psoriasis patients with blood deficiency and wind dryness syndrome，which may be realized through the ceramide and aquaporin protein.

〔Keywords〕blood deficiency and wind dryness syndrome；psoriasis；skin-moistening lotion；skin barrier

銀屑病是一種常見(jiàn)的以表皮過(guò)度角化、血管增生和炎癥反應(yīng)為病理特征，多因素參與的頑固難治性慢性皮膚?。?］。其易診難治，給患者帶來(lái)很大的社會(huì)、心理壓力［2］。銀屑病發(fā)病機(jī)制尚不明確，但皮膚屏障功能破壞是其中之一。銀屑病中醫(yī)稱之為“白庀”，血虛風(fēng)燥型大多以皮膚干燥，大量鱗屑，淡紅色肥厚性斑塊為主要臨床癥狀。其病機(jī)多因血虛不能滋潤(rùn)，化燥生風(fēng)，客于肌膚所致。銀屑病的治療主要在于恢復(fù)皮膚的正常屏障功能。我院自主開(kāi)發(fā)研制的中藥潤(rùn)膚保濕軟膏在防治銀屑病方面收到良好的效果。本研究通過(guò)分析血虛風(fēng)燥型銀屑病患者使用潤(rùn)膚保濕軟膏后的皮損消退情況，用藥前后皮膚屏障生理指標(biāo)變化情況以及相關(guān)神經(jīng)酰胺和水通道蛋白的變化，探尋潤(rùn)膚保濕軟膏對(duì)血虛風(fēng)燥型銀屑病患者皮膚屏障功能的影響及作用機(jī)制。

1　病例選擇

1.1病例資料

2014年6月-2015年5月湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院皮膚科門(mén)診及住院患者60例。年齡22～63歲，平均（38.8±18.3）歲，病程1～12年，平均（4.82，±3.8）年，其中男38例，女22例。隨機(jī)分為兩組，治療組和對(duì)照組各30例，兩組的性別、年齡、病程及病損嚴(yán)重程度分級(jí)均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

1.1.1西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照趙辨［3］《臨床皮膚病學(xué)》銀屑病診斷標(biāo)準(zhǔn)。

（1）具有典型的臨床表現(xiàn)，皮損以丘疹、斑丘疹和大小不等的紅色斑塊為主，覆有多層干燥銀白色鱗屑，刮除鱗屑可見(jiàn)一層發(fā)亮的薄膜，薄膜下有點(diǎn)狀出血，且不斷有新皮疹出現(xiàn)。

（2）進(jìn)行期有同形反應(yīng)，好發(fā)于頭皮、四肢伸側(cè)及腰骶部，也可發(fā)生在體表各處。發(fā)于頭皮者，毛發(fā)呈束狀；發(fā)于甲板（指、趾）者，可有頂針樣凹陷或前沿剝離。

（3）依皮損形態(tài)可分為點(diǎn)滴狀、錢(qián)幣狀、地圖狀或混合型；依病程可分為進(jìn)行期、靜止期和退行期。

1.1.2中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)（辨證分型標(biāo)準(zhǔn)）血虛風(fēng)燥狀：皮損淡，部分消退，鱗屑較多，伴口干，便干。舌質(zhì)淡紅，舌苔薄白，脈細(xì)緩。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）符合本病西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)且中醫(yī)辨證分型為血虛風(fēng)燥型；（2）無(wú)其他皮膚病及系統(tǒng)性疾病、內(nèi)臟腫瘤病史；（3）發(fā)病年齡在18～65歲之間，病情程度屬于中、重度；（4）患者自愿受試，并簽署知情同意書(shū)。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）妊娠和哺乳期婦女；（2）發(fā)病年齡小于18歲或大于65歲者；（3）有嚴(yán)重心、肝、腎等內(nèi)科基礎(chǔ)疾病者；（4）近1個(gè)月內(nèi)有系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、維A酸類及PUVA/UVB治療者。

1.4療效判定標(biāo)準(zhǔn)

參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［4］療效標(biāo)準(zhǔn)，以PASI評(píng)分法中皮損消退百分率判定療效。按以下公式計(jì)算PASI變化值。PASI變化值=（治療前PASI總分-治療后PASI總分）/治療前PASI總分× 100%。痊愈：皮損積分消退＞95%；顯效：皮損積分消退70%～95%；有效：皮損積分消退35%～69%；無(wú)效：皮損積分消退＜35%，甚至疾病加重。

2　方法

2.1治療方法

60例血虛風(fēng)燥型銀屑病患者，隨機(jī)分為兩組，試驗(yàn)組30例，外用潤(rùn)膚保濕軟膏（藥物組成：薏苡仁、人參、當(dāng)歸、核桃、桃仁、紅花、甘草等，由我院制劑中心完成批號(hào)：20131102），每日3次，連續(xù)4周，均勻涂抹于患處；對(duì)照組30例，單純外用尿素軟膏（由馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H42022670）每日3次，連續(xù)4周，均勻涂抹于患處。

2.2檢測(cè)指標(biāo)

治療前后療效評(píng)價(jià)采用PASI積分法。

皮膚屏障功能生理指標(biāo)檢測(cè)，使用Soft5.5皮膚六參數(shù)測(cè)試儀，測(cè)試指標(biāo)有：皮膚中油脂水平、水分含量、pH數(shù)值。

治療前后水通道蛋白（AQP-3）mRNA含量檢測(cè)通過(guò)RT-PCR及Western blot的方法進(jìn)行檢測(cè)分析。

神經(jīng)酰胺（Cer）含量采用薄層層析、BIO-RAD Ge1Doc凝膠成像系統(tǒng)、Quantity One軟件分析測(cè)定健康志愿者、銀屑病血虛風(fēng)燥型治療前、治療中、治療后皮損皮脂質(zhì)中Cer含量。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行分析處理，組間治療前后療效評(píng)價(jià)的差異比較用秩和檢驗(yàn)；組間和組內(nèi)治療前后皮膚屏障生理指標(biāo)檢測(cè)的差異比較使用多元方差分析檢驗(yàn)；AOP3、Cer之間檢測(cè)使用SNK-q檢驗(yàn)。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)定為α=0.05，P＜0.05為有差異。

3　結(jié)果

3.1治療組與對(duì)照組療效比較

治療組痊愈3例，顯效17例，有效6例，無(wú)效4例，總有效率86.67%。對(duì)照組痊愈1例，顯效8例，有效6例，無(wú)效15例，總有效率50.00%。經(jīng)秩和檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-3.162，P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1　治療組及對(duì)照組療效比較

3.2皮膚屏障功能相關(guān)生理指標(biāo)在各組治療前后的比較

兩組治療前各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療組和對(duì)照組治療后皮脂含量、角質(zhì)層含水量明顯高于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而治療組治療后pH值明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療組治療后與對(duì)照組治療后比較，皮脂含量上升明顯，pH值下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2　皮膚屏障功能生理指標(biāo)治療前后比較（±s）

表2　皮膚屏障功能生理指標(biāo)治療前后比較（±s）

注：與治療組治療前相比，*P＜0.05；與對(duì)照組治療前相比，△P＜0.05；與治療組治療后相比，◇P＜0.05。

組別治療組對(duì)照組治療前治療后治療前治療后皮脂含量（ug/cm2）80.28±42.35 105.66±46.82* 83.26±41.32 93.85±43.30△◇角質(zhì)層含水量（%）11.42±8.48 30.31±10.23* 11.06±9.56 27.92±7.63△pH值6.78±0.42 4.91±0.44* 6.88±0.51 6.16±0.37◇

3.3AQP3蛋白含量的變化

治療組藥物干預(yù)后AQP3蛋白含量比治療前有所上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；對(duì)照組藥物干預(yù)后AQP3蛋白含量比干預(yù)前有所上升（P＜0.05），治療組比對(duì)照組上升更加顯著（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3　AQP3蛋白均數(shù)間兩兩比較SNK-q檢驗(yàn)

3.4Cer含量的變化

治療組藥物干預(yù)后Cer含量比干預(yù)前明顯上升（P＜0.01）；對(duì)照組藥物干預(yù)前后Cer蛋白含量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療組比對(duì)照組上升明顯（P＜0.01）。見(jiàn)表4。

表4　Cer含量均數(shù)間兩兩比較SNK-q檢驗(yàn)

4　討論

皮膚是人體最大的器官，主要起保護(hù)機(jī)體的作用，這種保護(hù)作用就是屏障功能，這種屏障功能的作用機(jī)制要從角質(zhì)細(xì)胞和脂質(zhì)的組成及其生理功能和相互作用方面解釋。角質(zhì)層細(xì)胞正常的細(xì)胞內(nèi)成分已消失，被角蛋白纖維束代替，結(jié)構(gòu)性脂質(zhì)角質(zhì)形成細(xì)胞在不同的分化階段產(chǎn)生的脂質(zhì)和皮脂腺的脂質(zhì)共同構(gòu)成［5］。功能正常的皮膚表面有一層保護(hù)膜，由汗腺，角質(zhì)層蒸發(fā)的水分和各種NMF組成，形成基本的防線。因?yàn)榄h(huán)境或疾病的原因?qū)е逻@種保護(hù)膜破壞，容易受到病原體的入侵，會(huì)引發(fā)或加重病情［6］。而皮膚屏障功能的好壞主要體現(xiàn)在皮脂含量、角質(zhì)層含水量、pH值等幾個(gè)方面［7］。

另外角質(zhì)層與皮膚屏障功能相關(guān)的蛋白主要有Cer，AQP3、Caspas14、Filaggrin等，它們與皮膚屏障功能水分代謝、保濕相關(guān)。存在于人體皮膚的細(xì)胞膜上表達(dá)最多的一種水通道蛋白亞型主要是水通道蛋白3（AQP3），AQP3的主要作用是跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)水分、甘油、尿素等物質(zhì)以調(diào)節(jié)皮膚的水平衡，起保濕作用。有研究發(fā)現(xiàn)AQP3在銀屑病皮損中表達(dá)下降，且分布的部位發(fā)生異常，散在的分布于細(xì)胞質(zhì)中［8］。AQP3在銀屑病患者皮膚的降低導(dǎo)致皮膚屏障功能下降，皮膚水分丟失，干燥脫屑。神經(jīng)酰胺有防止水分散發(fā)和防護(hù)外界刺激的作用，皮膚疾病如銀屑病、異位性皮炎等的發(fā)生與角質(zhì)層神經(jīng)酰胺的改變密切相關(guān)［9］。神經(jīng)酰胺在細(xì)胞的增殖、分化、生長(zhǎng)抑制、衰老、凋亡及細(xì)胞分泌等生理病理過(guò)程中起重要作用，其含量的減少可使角化細(xì)胞排列紊亂、錯(cuò)位，水分丟失，導(dǎo)致皮膚干燥、脫屑，呈鱗片狀［10］。

中藥潤(rùn)膚保濕軟膏藥物組成有：薏苡仁、人參、當(dāng)歸、核桃、桃仁、紅花、甘草等，其中薏苡仁、人參為君健脾益氣潤(rùn)膚；當(dāng)歸、核桃為臣養(yǎng)血潤(rùn)膚以增強(qiáng)潤(rùn)膚之效；桃仁、紅花為佐活血養(yǎng)血以助君臣，甘草為使以調(diào)和諸藥［11］。在本研究中，課題組發(fā)現(xiàn)中藥潤(rùn)膚保濕軟膏在治療銀屑病血虛風(fēng)燥證有一定的臨床療效的同時(shí)，與單純的尿素軟膏相比，能顯著提高皮膚油脂含量，降低皮膚pH值。并且對(duì)治療前后皮損中AQP-3、Cer進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果表明，潤(rùn)膚保濕軟膏對(duì)AQP-3、Cer的提升作用明顯。這說(shuō)明潤(rùn)膚保濕軟膏治療銀屑病血虛風(fēng)燥證有一定的臨床療效，并且對(duì)血虛風(fēng)燥證銀屑病的皮膚屏障功能有一定的恢復(fù)作用，其作用機(jī)制可能與對(duì)AQP-3、Cer的調(diào)節(jié)有關(guān)，但具體作用靶點(diǎn)和機(jī)制尚不能完全確定，以后的研究方向可以結(jié)合蛋白組學(xué)進(jìn)行研究。

［1］黃英舉，鄭小帆，劉卉，等．銀屑病治療研究新進(jìn)展［J］．中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（4）：180-181．

［2］韓兵.不同程度銀屑病對(duì)患者生活質(zhì)量的影響［J］.大家健康，2015，9（23）：97-98.

［3］趙辨.臨床皮膚病學(xué)［M］.第3版.南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001：759-765.

［4］鄭筱萸．中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則［S］．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社出版，2002：201．

［5］Lane EB，Mclean WH.Keratins and skin disorders［J］.J Pathol，2004，204（4）：355-366.

［6］Hesse M，Zimek A，Weber K，et al.Comprehensive analysis ofkeratin gene clusters in humans and rodents［J］.Eur J Cell Biol，2004，83（1）：19-26.

［7］汪海珍，黃盼，楊志波.當(dāng)歸飲子配方顆粒對(duì)血虛風(fēng)燥型銀屑病患者皮膚屏障功能的影響［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，35（4）：41-43.

［8］Voss KE，Bollag R J，F(xiàn)ussell N，et al．Abnormal aquaporin-3 protein expression in hyperproliferative skin disorders［J］．Arch Dermatol R es，2011，303（8）：591-600．

［9］Denecker G，Hoste E，Gilbert B，et al．Caspase-14 protects against epidermal UVB photodamage and water loss［J］．Nat Cell Biol，2007，9（6）：666-674．

［10］Voss KE，Bollag R J，F(xiàn)ussell N，et al．Abnormal aquaporin-3 protein expression in hyperproliferative skin disorders［J］．Arch Dermatol R es，2011，303（8）：591-600．

［11］朱傳美，許斌，汪海珍，等.潤(rùn)膚保濕乳膏治療血虛風(fēng)燥型銀屑病［J］.吉林中醫(yī)藥，2015，35（3）：268-271.

（本文編輯李杰）

Effect of Skin-M oistening Lotion on Skin Barrier Functions of Psoriasis Patients w ith Blood Deficiency and W ind Dryness Syndrome and its M echanism of Action

WANG Haizhen，ZHANG Yujin，YANG Zhibo*
（The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410005，China）

R256

B

doi：10.3969/j.issn.1674－070X.2016.06.020

2015-11-26

湖南省中醫(yī)藥管理局科研項(xiàng)目（201363）。

汪海珍，女，在讀博士研究生，副主任醫(yī)師，研究方向：皮膚病的中醫(yī)藥防治。

*楊志波，男，教授，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：491476130@qq.com。