于良富　趙　宇　鮑　旭

（遼寧省撫順市中心醫(yī)院藥劑科，撫順113008）

黃芩回流提取工藝優(yōu)選

于良富趙宇鮑旭

（遼寧省撫順市中心醫(yī)院藥劑科，撫順113008）

目的優(yōu)選最佳黃芩回流提取工藝，為工業(yè)生產(chǎn)提供依據(jù)。方法以黃芩苷提取總量為指標(biāo)，采用單因素考察優(yōu)選出最佳提取溶媒，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察3個(gè)因素(溶媒量A、提取時(shí)間B、提取次數(shù)C)的3個(gè)水平對(duì)提取效果的影響。結(jié)果黃芩最佳提取工藝為：采用12倍量50%乙醇提取3次，每次1 h。結(jié)論該實(shí)驗(yàn)結(jié)果為大規(guī)模提取黃芩苷提供了可靠依據(jù)。

黃芩；黃芩苷；回流提?。桓咝б合嗌V法

黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之功效?？捎糜谥委煗駵?、暑濕，胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動(dòng)不安［1］。

目前國(guó)內(nèi)對(duì)黃芩的提取方法主要由水煎煮［2］、回流提取［3］、超聲提取［4］和微波法［5］等。有研究表明，回流提取較其它提取方法效率更高［6，7］，且相對(duì)超聲提取和微波提取而言，其污染少，更適宜用于規(guī)模性生產(chǎn)。但諸多研究中，只對(duì)提取方法進(jìn)行比較，并未繼續(xù)對(duì)最佳提取方法進(jìn)行詳細(xì)工藝考察。故本實(shí)驗(yàn)中選用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)回流提取黃芩進(jìn)行考察。黃芩中的主要成分為黃芩苷，本實(shí)驗(yàn)采用黃芩苷為指標(biāo)，優(yōu)選黃芩最佳回流提取工藝。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器島津LC-20AD高效液相色譜儀；SPD-20A紫外檢測(cè)器；Sartorius BSA224S電子天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；HWS24型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.2試藥黃芩藥材；黃芩苷對(duì)照品（含量以94%計(jì)，中國(guó)食品藥品檢定研究所，批號(hào)：110715-201016）；甲醇為色譜純，水為去離子水；其它試劑均為分析純。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件色譜柱：Inertsil ODS-SP C18（460 mm× 250 mm，5 μm）；流動(dòng)相:甲醇-3%甲酸水溶液（V/V）（50∶50）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)6∶280 nm；理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2對(duì)照品溶液制備精密稱取黃芩苷對(duì)照品3.98 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻線，搖勻，既得（每1 mL含黃芩苷74.824 μg，10℃以下保存）。

2.3精密度考察精密吸取黃芩苷對(duì)照品（74.824 μg/ mL）10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，結(jié)果黃芩苷峰面積的RSD為0.4965%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　精密度考察結(jié)果表

結(jié)果表明，該儀器精密度良好。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密吸取黃芩苷對(duì)照品（74.824 μg/ mL）2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL，分別置于10mL量瓶中，加甲醇至刻線，混勻，各吸取20 μL注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積。以黃芩苷濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:Y= 84785X-31053，r=0.9998。測(cè)定結(jié)果表明，黃芩苷在0.299296 μg～1.49648 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5穩(wěn)定性考察精密吸取同一供試品溶液20 μL，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h時(shí)進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果黃芩苷峰面積的RSD為1.4475%，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表

結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6單因素考察優(yōu)選提取溶媒稱取藥材，共計(jì)5份，每份10 g，分別加入10倍量30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇、水，回流提取1 h，濾過(guò)，記錄提取液體積。

2.6.1供試品制備分別精密吸取樣品續(xù)濾液10 mL，置于25 mL量瓶中，加提取溶劑至刻線，搖勻。精密吸取1 mL，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻線，搖勻，作為供試品溶液。

2.6.2含量測(cè)定精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL，采用2.1項(xiàng)下條件測(cè)定黃芩苷含量，并計(jì)算黃芩苷提取總量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　單因素考察結(jié)果表

根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，50%乙醇提取的黃芩苷總量最多，故確定提取溶媒為50%乙醇。

2.7正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選提取工藝

2.7.1供試品制備記錄每份提取液提體積，精密吸取續(xù)濾液10 mL，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻線，搖勻。精密吸取1 mL，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻線，搖勻，作為供試品溶液。

2.7.2含量測(cè)定精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL，采用2.1項(xiàng)下條件測(cè)定黃芩苷含量，并計(jì)算黃芩苷提取總量。

2.7.3確定因素水平與考察指標(biāo)以50%乙醇為溶劑，選取加醇量（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）為考察因素，以黃芩苷提取總量為指標(biāo)，采用L9（34）正交表安排試驗(yàn)，提取工藝優(yōu)選因素水平見(jiàn)表4。

表4　提取工藝因素水平表

2.7.4正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析稱取藥材，共計(jì)9份，每份5 g，按正交表安排試驗(yàn)。以黃芩苷提取總量為指標(biāo)，采用2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定黃芩苷含量，結(jié)果及直觀分析結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析結(jié)果見(jiàn)表6。

表5　正交試驗(yàn)結(jié)果及直觀分析表

表6　方差分析結(jié)果

由正交試驗(yàn)的直觀分析和方差分析結(jié)果可知，三種因素對(duì)黃芩提取所得的黃芩苷含量影響效果依次為：C（提取次數(shù)）＞A（加醇量）＞B（提取時(shí)間），且三種因素對(duì)提取量均無(wú)顯著性影響。確定最佳提取工藝為A2B1C3，即加12倍50%乙醇提取3次，每次1小時(shí)。

3　結(jié)果與討論

黃芩中的黃酮類是其主要成分，該類成分易溶于乙醇。由正交試驗(yàn)結(jié)果可知，回流提取黃芩藥材時(shí)，采用12倍50%乙醇提取3次，每次1小時(shí)為最佳提取工藝。結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，在單因素考察優(yōu)選提取溶媒時(shí)發(fā)現(xiàn)，黃芩苷在稀醇中的溶解效果較好。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果為工業(yè)中的放大生產(chǎn)提供了依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010版[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：282-283.

[2]胡上達(dá)，唐彩泉，劉霞.黃芩提取工藝優(yōu)化[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2002，21(7)：438-439.

[3]梁英，韓魯佳，任成才，等.黃芩中黃芩苷醇提方法的優(yōu)化[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2009，30(1)：52-54.

[4]王勝男，徐源梅，李紅玉.超聲循環(huán)提取黃芩中黃芩苷的工藝研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26(6)：1332-1333.

[5]賈艷萍，張春玲，鞠振國(guó)，等.微波輔助提取黃芩苷[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2008，27(3)：57-59.

[6]周芳，池汝安，吳元欣，等.黃芩中黃芩苷浸取工藝優(yōu)化[J].中藥材，2007，30(3)：332-335.

[7]趙越平，雷其云，蘇永芝，等.黃芩中黃芩甙不同提取方法的比較[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，17(6)：475-476.

[8]于千，張楊.正交設(shè)計(jì)法對(duì)黃芩提取工藝的研究[J].沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，13(3)：171-172.

The Optimization on the Reflux Extraction Processes of Scutellaria Baicalensis Georgi

YU Liangfu，ZHAO Yu，BAO Xu
（Department of Pharmacy，F(xiàn)ushun City Central Hospital，Liaoning Province，F(xiàn)ushun 113008，China）

Objective To oPtimize the best reflux extraction Processes of Scutellaria baicalensis Georgi，and to Providea basis for industrial Production.Methods The content of baicalin was taken as the indexe，single factor was used to choose the best extraction solvent，and orthogonal exPerimental design was adoPted to examine 3 levels of 3 factors（the amount of solvent-A，the extraction time-B，the extraction times-C）on the extraction effect.Results The oPtimum extraction Process of Scutellaria baicalensis Georgi as follows:with an amounts of 12 times 50%ethanol extracted three times and 1h each time.Conclusion The exPerimental results Provided a reliable basis for large-scale extraction of baicalin.

Scutellaria baicalensis Georgi；baicalin；reflux extraction；HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.17.060

1672-2779（2016）-17-0138-02

（本文編輯：張文娟本文校對(duì)：趙宇2016-05-17）