羅汝瓊，唐　亮 ，謝　萍，胡艷梅

(四川省攀枝花市婦幼保健院婦產科，四川 攀枝花 617000)

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HR-HPV在宮頸病變中的表達及不同治療方法的轉陰率分析

羅汝瓊，唐亮 ，謝萍，胡艷梅

(四川省攀枝花市婦幼保健院婦產科，四川 攀枝花 617000)

目的分析高危型人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)在宮頸病變中的表達及不同治療方法對轉陰率的影響。方法選擇2010年至2015年在四川省攀枝花市婦幼保健院就診并經病理檢查確診的400例HR-HPV陽性婦女，根據各患者不同的宮頸病變情況予以相應的治療，其中50例患者未進行任何治療，其余350例患者經單純放置干擾素栓、宮頸錐切術、子宮全切術及宮頸癌根治術等不同治療方法，3個月后復查各HR-HPV亞型轉陰率情況。結果400例HR-HPV患者中，共檢出亞型13種，其中檢出率最高的5個為HPV16 型82例(20.05%)，HPV58型62例(15.50%)，HPV52型50例(12.50%)，HPV53型37例(9.25%)和HPV18型39例(9.75%)；HPV16的檢出率隨著CIN分級逐漸升高(χ2=6.720，P=0.035)；治療后CINⅠ轉陰率為59.39%，CINⅡ～Ⅲ轉陰率為56.47%，宮頸癌轉陰率為69.23%，組間差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.918，P=0.202)；不同宮頸病變治療后HR-HPV亞型轉陰率組間比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=18.625，P=0.001)，宮頸癌根治術后轉陰率高于其他治療方式(χ2=4.443，P=0.038)；HPV16亞型患者未經治療以及經干擾素栓治療、宮頸錐切術治療、子宮全切術治療和宮頸癌根治術治療后轉陰率分別為29.41%、42.86%、81.82%、80.00%、84.00%，組間差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=4.810，P=0.031)，手術治療患者轉陰率高于單純干擾素治療和未經治療者(χ2=6.013，P=0.015)。結論HPV16是各類宮頸病變中為常見的亞型，檢出率隨著CIN分級逐漸升高，手術治療后轉陰率高于保守治療，對宮頸病變篩查以及預后判斷具有積極意義。

高危型人乳頭瘤病毒；宮頸病變；轉陰率；亞型分布

[Abstract]Objective To evaluate the expression of high-risk human papilloma virus (HR-HPV) in cervical lesions and the influence of different therapeutic methods on negative conversion ratio. Methods From 2010 to 2015, 400 cases of HR-HPV-positive diagnosed by pathological examination were selected in Panzhihua City Women and Children Hospital, and appropriate therapeutic methods were given. Fifty patients did not accept any treatment, and the other 350 cases were provided with interferon alone, conization of cervix, total hysterectomy and radical hysterectomy, respectively. Negative rate situation were detected after 3 months. Results Totally 13 kinds of HR-HPV subtypes were detected in 400 patients, of which the highest detection rate were found in HPV16 type in 82 cases (20.05%), HPV58 type in 62 cases (15.50%), HPV52 type in 50 cases (12.50%), HPV53 type in 37 cases (9.25%) and HPV18 type in 39 cases (9.75%). HPV16 detection rate gradually increased with CIN grade increasing (χ2=6.720,P=0.035). After treatment negative rate of CINⅠwas 59.39%, CINⅡ-Ⅲ negative rate was 56.47% and cervical cancer negative conversion rate was 69.23% (χ2=3.918,P=0.202). There was statistical significance in HR-HPV subtypes negative conversion ratio after different therapies (χ2=18.625,P=0.001). Negative conversion ratio of radical hysterectomy was higher than other treatments (χ2=4.443,P=0.038). Negative conversion ratio of HPV16 subtype in patients without treatment, those with interferon therapy, cervical conization, hysterectomy and radical hysterectomy was 29.41%, 42.86%, 81.82%, 80.00% and 84.00%, respectively (χ2=4.810,P=0.031). Patients with surgery had higher negative conversion ratio than interferon therapy alone or no treatment (χ2=6.013,P=0.015).Conclusion HPV16 is a common subtype in cervical lesions and detection rate gradually increases with CIN grading. After surgery negative conversion ratio is higher than conservative treatment, and it is of positive significance for cervical lesions screening and prognosis.

[Key words]high-risk human papilloma virus(HR-HPV); cervical lesions; negative conversion ratio; subtype distribution

高危型人乳頭狀瘤病毒(high-risk human papilloma virus，HR-HPV)是一種嗜上皮病毒，廣泛的存在于人和動物中，已被確定的有多種亞型。相關研究表明，不同地區(qū)的HR-HPV感染亞型感染率存在差異，同時感染率也隨著年齡的變化呈現(xiàn)U型分布[1]。HR-HPV的持續(xù)感染是宮頸上皮癌變重要的高危因素，宮頸上皮內瘤變(CIN)不同病變程度中亞型的分布特點對該病的臨床診治具有重要意義[2-3]。本研究現(xiàn)以我院確診的HR-HPV陽性患者中不同HR-HPV亞型進行檢測及相應的治療，并對其預后狀態(tài)進行觀察。現(xiàn)將研究結果報告如下：

1資料方法

1.1一般資料

病例來源于2010至2015年在四川省攀枝花市婦幼保健院進行體檢和宮頸癌篩查女性，選擇實驗室檢查證實HPV感染陽性，同時陰道鏡檢和組織病理學活檢確診宮頸病變，排除泌尿生殖系統(tǒng)活動性炎癥、妊娠哺乳期女性、陰道腫瘤病史、其他性傳播疾病及嚴重的心肝腎功能障礙者。

1.2方法

1.2.1人乳頭狀瘤病毒檢測

標本的收集：囑患者上婦科專用檢查床擺好體位(膀胱截石位)，用陰道窺器暴露宮頸并擦凈宮頸口或陰道殘端分泌物，將宮頸刷插入宮頸管內或陰道殘端，細胞采樣器的無菌毛刷均勻散布于宮頸移行帶上或陰道殘端，順時針旋轉5圈采樣，停留10秒后緩慢抽出宮頸刷，將其放入細胞保存液的取樣管中，擰緊瓶蓋。做好唯一標識編號，注明患者的姓名、年齡及取樣時間，填寫申請單，-20℃保存，5天內進行檢測。使用美國Digene公司的第二代雜交捕獲技術(HC2)法，利用基因雜交、信號擴大，確定RNADNA雜合體的含量，檢測試劑盒來自上海萊特公司，首先將樣本DNA雙鏈釋放并分解為可以雜交的核苷酸單鏈，然后利用核苷酸DNA單鏈與RNA 探針雜交，并特異抗體捕獲DNA-RNA雜交體并固定，接著偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第2抗體與DNA-RNA雜交體結合，沖洗多次至干燥，最后信號放大，由DML2000微量反應板測量光的強弱，可一次性快速檢測13種HR-HPV(包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型)，同時確定DNA-RNA雜交體的含量，即HR-HPV載量。以標本的相對光單位(RLU)與陽性定標域值(CO)的比值即為HR-HPV載量，<1為陰性，≥1為陽性[4]。

1.2.2組織病理活檢

所有患者治療前均進行組織病理學檢查，采用陰道鏡對患者進行檢測，注意檢查前3天內避免性生活、陰道沖洗上藥、婦科檢查及宮頸刮片等，檢查時應充分暴露宮頸管以免漏診，在表面涂抹醋酸和碘液，在可疑病變區(qū)進行取樣活檢。病理分級標準：CINⅠ級，相當于輕度和輕度不典型增生；CINⅡ級，相當于中度不典型增生；CINⅢ級相當于重度不典型增生和原位癌。

1.2.3治療方法

參照第8版《婦產科學》和患者意愿，對宮頸炎癥及CINⅠ患者采取干擾素治療或單純隨訪；對CINⅡ～Ⅲ患者采取宮頸LEEP刀或宮頸冷刀錐切術；子宮頸癌Ⅱb期以下行廣泛子宮切除及盆腹腔淋巴結切除術。相應治療1年后進行隨訪，采用高危型HPV聯(lián)合細胞檢測的方法，必要時行活檢，以HPV檢測結果載量0.00～1.00為HPV轉陰[5]。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0對數據整理和分析，計數資料用率(%)，計數資料采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1一般情況

共有1 043例女性進行篩查，其中HR-HPV為陽性且確診宮頸病變的患者400例，年齡26～50歲，平均年齡(41.3±4.4)歲。按照國際標準進行CIN分級：CINⅠ級165例，CINⅡ級120例，CINⅢ級50例，宮頸癌65例。其中不予特殊處理50例，單純放置干擾素栓治療115例，宮頸錐切術104例，子宮全切術73例，宮頸癌根治術58例。

2.2 不同宮頸病變HR-HPV亞型檢出情況

在400例患者中HPV16檢出82例，占20.05%，HPV58檢出62例，占15.50%，HPV52檢出50例，占12.50%，HPV53檢出37例，占9.25%，HPV18檢出39例，占9.75%，為檢出率最高的5個HR-HPV亞型。CNIⅠ病變中HPV16、HPV58、HPV52檢出率分別為17.58%(29/165)、15.76%(26/165)、11.52%(19/165)，CINⅡ～Ⅲ病變中HPV16、HPV58、HPV52檢出率分別為18.82%(32/170)、15.88%(27/170)、11.76%(20/170)，宮頸癌病變中HPV16、HPV58、HPV52檢出率分別為32.31%(21/65)、13.85%(9/65)、16.92%(11/65)，其中HPV16的檢出率逐漸升高，在不同的宮頸病變中檢出率差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=6.720，P=0.035)。所有患者經相應治療后，CINⅠ轉陰率為59.39%，CINⅡ～Ⅲ轉陰率為56.47%，宮頸癌轉陰率為69.23%，組間差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.918，P=0.202)，見表1。

表1　　不同宮頸病變HR-HPV亞型檢出情況[n(%)]

2.3不同宮頸病變治療后各HR-HPV亞型轉陰率情況

不同宮頸病變治療后HR-HPV亞型轉陰率組間比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=18.625，P=0.001)，宮頸癌根治術后轉移率高于其他治療方式(χ2=4.443，P=0.038)；HPV16亞型患者未經治療以及經干擾素栓治療、宮頸錐切術治療、子宮全切術治療和宮頸癌根治術治療后轉陰率分別為29.41%、42.86%、81.82%、80.00%、84.00%，組間差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=4.810，P=0.031)，手術治療患者轉陰率高于單純干擾素治療和未經治療(χ2=6.013，P=0.015)，宮頸部分切除術、全子宮切除術及宮頸癌根治術兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2值分別為1.930、2.223、2.017，均P>0.05)，見表2。

表2　　不同宮頸病變治療后各HR-HPV亞型轉陰率情況[n(%)]

3討論

3.1人乳頭狀瘤病毒感染與宮頸病變的關系

人乳頭狀病毒(HPV)是一種DNA病毒，外觀呈球形無包膜，目前該病毒的200余種臨床亞型已經被臨床證實并能進行DNA檢測。國際上根據各種亞型導致疾病的類型和嚴重程度分為低危險型和高危險型[4]。相關資料表明，HR-HPV是宮頸上皮內瘤樣病變發(fā)展為宮頸癌的主要危險因素，在大約83%的宮頸上皮內瘤變與92%的宮頸浸潤癌中存在HR-HPV感染[6]。在對基因亞型分布的研究資料中，發(fā)現(xiàn)不同亞型在宮頸病變的分布中存在著統(tǒng)計學差異，且不同基因亞型HR-HPV在宮頸病變分布與CIN的病情程度有關[7-8]。部分研究資料顯示，通過對高危亞型HPV16基因亞型所占比例分析可以對病情的判斷具有預測意義[9]。臨床HPV亞型的分布可能對病情程度的判斷具有重要的指導作用，本研究發(fā)現(xiàn)隨著宮頸病變級別的升高，HPV16亞型的感染率也隨之上升，與既往Anglesio的研究一致[10]。

3.2不同宮頸病變分期與人乳頭狀病毒感染的關系

相關資料研究顯示，在CINⅠ期的患者在發(fā)生HR-HPV感染的時候一般病情較輕，大多數的患者能夠自行轉陰，而對于發(fā)生了HR-HPV感染的CIN各級患者，機體的免疫應答不能有效清除宮頸上皮細胞內感染的HR-HPV，導致該病毒持續(xù)感染，可能進一步發(fā)生宮頸上皮內瘤變，甚至導致宮頸癌的發(fā)生。持續(xù)病毒感染在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中有多方面的作用，可誘導基因的不穩(wěn)定性，導致基因不適當表達，增強細胞增殖，抵抗細胞凋亡，促進腫瘤新生血管生成，侵犯腫瘤相關基底膜并發(fā)生轉移。同時病毒感染持續(xù)存在還可引起宮頸上皮高級別病變，這時病毒基因組可能與宿主基因組整合，而不是單純感染的病毒粒子狀態(tài)，故不易清除，HR-HPV一般也不會自動轉陰，一般需要臨床治療改善宮頸病變的微環(huán)境和減少HR-HPV宿主，以及術后的自身免疫力恢復會使HR-HPV轉陰，HR-HPV在CIN發(fā)生宮頸癌變的過程中起到了重要的作用。本次研究400例HR-HPV患者中，共計檢出亞型13種，其中HPV16、HPV58、HPV52、HPV53、HPV18為檢出率最高的五個HR-HPV亞型，且HPV16、HPV58、HPV52、HPV53及HPV18亞型在同一宮頸病變中檢出率差異具有統(tǒng)計學意義。CNIⅠ、Ⅱ、Ⅲ病變中，HPV16檢出率逐漸升高，在不同的宮頸病變中檢出率差異具有統(tǒng)計學意義。

3.3不同宮頸病變治療方式與HPV感染的關系

目前，臨床對于宮頸病變的治療多以其病變程度為依據，依次采取藥物治療、宮頸錐形切除術、全子宮切除術以及宮頸癌根治術。本研究結果提示，對于宮頸HR-HPV感染而言，依據病情而采取的治療方式均有一定療效，但干擾素藥物治療相對較弱，這可能是由于藥物抗病毒作用的發(fā)揮主要是通過激活宮頸細胞本身抗病毒蛋白基因，而無手術治療則主要通過將病灶組織進行切除可較大限度祛除發(fā)生病變殘留或者復發(fā)有關[11]。在本次研究中，不同宮頸病變分期患者經相應治療后，HPV轉陰率存在明顯組間差異，提示不同程度宮頸病變與HPV感染程度有明顯相關性。本次研究4種治療方式都有的亞型中，HPV16在宮頸癌根治術后轉陰率最高，猜測可能由于全部病灶及更大HR-HPV感染得到清除，故而殘留及復發(fā)的可能性小，進而其預后較好有關[12-13]。

綜上所述，不同亞型HR-HPV感染對不同宮頸病變的發(fā)展以及不同治療方式的預后均有一定影響，HPV16亞型是各類宮頸病變中為常見的亞型之一，不但與宮頸病變的進展以及嚴重程度有關，還影響著患者的轉陰情況，HPV16亞型感染的檢測對于宮頸病變的篩查以及治療后轉歸的預測具有積極意義。

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[專業(yè)責任編輯：安瑞芳]

Analysis of the expression of high-risk human papilloma virus in cervical lesions and negative conversion ratio of different therapeutic methods

LUO Ru-qiong, TANG Liang, XIE Ping, HU Yan-mei

(Department of Obstetrics and Gynecology, Panzhihua City Women and Children Hospital, Sichuan Panzhihua 617000, China)

2016-02-15

羅汝瓊(1969-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事婦科臨床工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.08.039

R711.32

A

1673-5293(2016)08-1018-04