朱　峰，衛(wèi)　敏，施點望，薛建平

(1.福建省纖維檢驗局，福建　福州　350026;2.福建省紡織產(chǎn)品檢測技術(shù)重點實驗室，福建　福州　350026)

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定紡織品中4種苯并三唑類紫外穩(wěn)定劑

朱峰1,2*，衛(wèi)敏1,2，施點望1,2，薛建平1,2

(1.福建省纖維檢驗局，福建福州350026;2.福建省紡織產(chǎn)品檢測技術(shù)重點實驗室，福建福州350026)

摘要：建立了快速同時測定紡織品中UV-350，UV-320，UV-328和UV-327 4種苯并三唑類紫外穩(wěn)定劑(BUVSs)的超聲提取/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(USE-UPLC-MS/MS)分析方法。樣品經(jīng)正己烷飽和的乙腈超聲波提取后，采用Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)分離，甲醇-0.01 mol/L甲酸銨水溶液為流動相梯度洗脫，電噴霧離子源電離，正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行定性和定量分析，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，4種BUVSs的線性相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.99，檢出限為0.006 3～0.024 mg/kg，定量下限為0.021～0.081 mg/kg。加標(biāo)回收率為80.0%～102.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.2%～9.9%。將該方法應(yīng)用于紡織品中BUVSs的分析測定，結(jié)果令人滿意。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；苯并三唑類紫外穩(wěn)定劑；紡織品；超聲提取

苯并三唑類紫外穩(wěn)定劑(Benzotriazole UV stabilizers,BUVSs)作為一種紫外吸收劑，已被廣泛用于各種工業(yè)產(chǎn)品和消費產(chǎn)品[1]，如建筑材料、汽車組件、油漆、鞋、化妝品、織物、高分子材料等領(lǐng)域[2-3]。經(jīng)過BUVSs處理的紡織品，不僅可以保護(hù)人體皮膚免受過多紫外線的傷害，還可避免紫外線催化反應(yīng)破壞高分子結(jié)構(gòu)，提高織物上染料、涂料和纖維等的防曬、耐候、抗老化能力[4]。但已有研究表明部分BUVSs為具有持久性、生物蓄積性和毒性的化合物[5]，可能破壞生物體的內(nèi)分泌系統(tǒng)，對生物體的生殖和發(fā)育產(chǎn)生不利影響[6-7]，并可能對人類有致癌作用[8]。早在1970年，Jungclaus等[9]就在污水、河水以及沉積物中發(fā)現(xiàn)了2-(3,5-二叔丁基-2-羥基苯)苯并三唑(UV-320)、2-(3,5-二叔丁基-2-羥苯基)-5-氯苯并三唑(UV-327)、2-(3,5-二叔戊基-2-羥苯基)苯并三唑(UV-328)。2012年，Ruan等[10]首次在中國污水污泥中檢出2-(3-仲丁基-5-叔丁基-2-羥苯基)苯并三唑(UV-350)等苯并三唑類化合物。2014年12月，歐洲化學(xué)品管理局(ECHA)將UV-320，UV-328列入第十二批SVHC清單，并將其歸為持久、生物累積、有毒物質(zhì)(PBT)。2015年8月，ECHA公布包括UV-327，UV-350在內(nèi)的7種潛在SVHC咨詢清單，展開公眾評議。因此，建立紡織品中4種BUVSs的同時檢測方法，對于應(yīng)對貿(mào)易壁壘、提升紡織品質(zhì)量技術(shù)水平和污染控制具有重要意義。

BUVSs的檢測方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[1,11-12]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)[13-14]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[10,15-19]，研究基質(zhì)主要集中在沉積物[9-10,13]、海洋哺乳動物[1]、水體[11,18-19]、土壤[12]、塵埃[14,17]、魚類[15-16]等生物和環(huán)境樣本。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)技術(shù)因具有靈敏度高、檢出限低的特點，可以進(jìn)行多組分定性、定量檢測，是目前報道較多的方法。目前國內(nèi)尚無相關(guān)的國家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，紡織品中4種BUVSs組分的同時測定也未見文獻(xiàn)報道。

本文建立了同時檢測紡織品中4種苯并三唑類紫外穩(wěn)定劑(見表1)的超聲提取/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(USE/UPLC-MS/MS)分析方法。方法簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確，并用于紡織樣品中4種BUVSs的檢測，為生態(tài)紡織品的檢測及監(jiān)控提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持，為制訂相關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)提供技術(shù)支撐和參考。

表1　4種BUVSs的化學(xué)信息

1實驗部分

1.1儀器與試劑

1290 Infinity超高效液相色譜儀，6410B三重四極桿質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源(ESI)及MassHunter Workstation 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國Agilent公司)；97043-942超聲波發(fā)生器(美國VWR公司)。

標(biāo)準(zhǔn)對照品：UV-350(97.0%，Tokyo Chemical Industry)；UV-320(99.0%，德國Dr.Ehrenstorfer公司)；UV-328、UV-327(98.0%，Tokyo Chemical Industry)；甲醇、正己烷、乙腈(色譜純，德國CNW科技公司)；甲酸銨(98.0%，德國CNW科技公司)；實驗用水為超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解，配成質(zhì)量濃度為200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4 ℃下保存。使用時，用正己烷飽和的乙腈逐級稀釋至所需濃度。

1.3樣品前處理

試樣剪碎至5 mm×5 mm，混勻后，準(zhǔn)確稱取1.0 g樣品(精確至0.000 1 g)，置于25 mL具塞錐形瓶中，加入15 mL正己烷飽和的乙腈，于60 ℃超聲波發(fā)生器中提取15 min。將提取液過濾，殘渣再用15 mL正己烷飽和的乙腈超聲提取15 min，合并濾液于25 mL容量瓶中，以正己烷飽和的乙腈定容，經(jīng)0.22 μm有機濾膜過濾，用UPLC-MS/MS檢測。

1.4色譜及質(zhì)譜條件

1.4.1UPLC條件色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm；美國Agilent公司)；流動相：A為甲醇；B為0.01 mol/L甲酸銨水溶液。洗脫梯度：0～7 min，88%～90% A；7～8 min，90%～100% A；8～10 min，100% A；10～10.5 min，100%～88% A；10.5～12 min，88% A。流速：0.3 mL/min；柱溫：20 ℃；進(jìn)樣體積：5.0 μL。

1.4.2MS/MS條件離子源：ESI；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式；毛細(xì)管電壓：4 000 V；霧化氣(氮氣)壓力：2.41×105Pa；干燥氣(氮氣)溫度：350 ℃；干燥氣流速：12 L/min;其他實驗參數(shù)見表2。

表2　多反應(yīng)監(jiān)測模式下4種BUVSs的串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)及保留時間

*quantitative ion

2結(jié)果與討論

2.1色譜柱的選擇

4種BUVSs分子量接近，結(jié)構(gòu)類似，分離難度較大，而UV-350和UV-320為同分異構(gòu)體，因此兩者的分離是色譜-質(zhì)譜檢測的關(guān)鍵。實驗考察了Zorbax SB-C18柱(2.1 mm×150 mm，3.5 μm)、Poroshell 120 Phenyl Hexyl柱(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)、Poroshell 120 SB-C18柱(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)和Zorbax Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)對4種BUVSs的保留和分離效果，發(fā)現(xiàn)在同等條件下，Zorbax SB-C18柱、Poroshell 120 Phenyl Hexyl柱的分離效果較差，Poroshell 120 SB-C18和Zorbax Eclipse Plus C18柱對4種BUVSs尤其是UV-350和UV-320可實現(xiàn)基線分離，均可采用。由于4種BUVSs在Zorbax Eclipse Plus C18柱上的保留時間更短，分離效率更高，因此實驗選擇Zorbax Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)作為分離柱。

2.2流動相的選擇

為了實現(xiàn)目標(biāo)化合物間良好的色譜分離及響應(yīng)，分別考察了甲醇-水溶液和乙腈-水溶液流動相體系對4種BUVSs分離的影響。結(jié)果表明：甲醇流動相體系和乙腈流動相體系均能較好地實現(xiàn)4種BUVSs中同分異構(gòu)體的分離，但甲醇流動相體系下目標(biāo)化合物的響應(yīng)顯著大于乙腈流動相體系。為了進(jìn)一步改善質(zhì)譜信號響應(yīng)和分離效果，分別在水相中添加0.1%甲酸、0.01 mol/L甲酸銨、0.01 mol/L甲酸銨+0.1%甲酸，發(fā)現(xiàn)水相中添加0.01 mol/L甲酸銨水溶液時，色譜峰的離子化效果最好、響應(yīng)最高，因此實驗選擇甲醇-0.01 mol/L甲酸銨水溶液為流動相。

為進(jìn)一步改善同分異構(gòu)體間的分離度，選擇梯度洗脫方式，優(yōu)化梯度條件，并對柱溫和流速進(jìn)行了優(yōu)化，實現(xiàn)了UV-350和UV-320同分異構(gòu)體的基線分離。按“1.4.1”所述UPLC條件設(shè)置，分離效果最佳、響應(yīng)最高。

2.3質(zhì)譜條件的選擇

采用三通閥自動進(jìn)樣方式優(yōu)化質(zhì)譜條件，對5 mg/L單一目標(biāo)化合物的乙腈溶液進(jìn)行ESI正、負(fù)離子全掃描檢測。結(jié)果表明，各紫外穩(wěn)定劑在負(fù)離子模式下的質(zhì)譜響應(yīng)較弱，而在正離子模式下的分子離子峰響應(yīng)較高，因此選擇在ESI正離子掃描模式下對4種BUVSs進(jìn)行分析。

在該模式下，所有分析物經(jīng)ESI電離生成特征離子峰[M+H]+，將其選為母離子峰。對選定的母離子進(jìn)行子離子掃描，選取豐度較強且干擾較少的子離子用于定性定量計算，通過多反應(yīng)監(jiān)測掃描(MRM)對碰撞能量、碎裂電壓、儀器干燥氣溫度、干燥氣流速、霧化氣壓力以及毛細(xì)管電壓等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，使特征碎片的離子強度達(dá)到最大，確定最佳的質(zhì)譜參數(shù)如“1.4.2”所述。

圖1為4種BUVSs的LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖。

圖1　4種BUVSs的MRM色譜圖Fig.1　Chromatograms of 4 BUVSs in MRM modepeak numbers denoted are the same as those in Table 2

2.4前處理方法的優(yōu)化

超聲波萃取常用于紡織品中有毒有害物質(zhì)的提取，本文對影響超聲波萃取效率的主要因素(提取溶劑種類、提取溫度、提取時間、提取溶劑體積)進(jìn)行了考察。

由于苯并三唑類化合物溶于乙腈、甲醇、二氯甲烷等有機溶劑，因此考察了乙腈、甲醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯5種溶劑的提取效果。稱取1.0 g(精確至0.000 1 g)代表性自制紡織品陽性樣品，分別加入15 mL提取溶劑，在30 ℃下超聲提取30 min，收集濾液于50 mL濃縮瓶中，于40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至近干，用乙腈溶解并定容至2.0 mL，經(jīng)有機濾膜過濾后進(jìn)樣分析，平行測定3個樣品，計算4種BUVSs的回收率。結(jié)果表明：乙腈對4種BUVSs的萃取回收率最佳，均高于90%，且乙腈和正己烷作為提取溶劑時回收率最為穩(wěn)定，其標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3.5%。為改善提取溶劑的極性和對4種BUVSs萃取的選擇性，進(jìn)一步考察了正己烷飽和的乙腈為提取溶劑時的效果，發(fā)現(xiàn)4種BUVSs的回收率和穩(wěn)定性均較好，且ESI全掃描結(jié)果顯示其提取液基底干擾較少。因此，實驗選擇正己烷飽和的乙腈作為提取溶劑。

進(jìn)一步優(yōu)化提取溫度、提取時間、提取溶劑體積等參數(shù)。結(jié)果顯示：隨著提取溫度從常溫升至60 ℃、提取時間從10 min增至30 min、提取溶劑體積從10 mL增至30 mL，萃取回收率逐漸增加，此后繼續(xù)增加上述參數(shù)值，回收率均無明顯增加。因此，實驗選擇最佳萃取溫度為60 ℃，萃取時間為30 min，萃取溶劑體積為30 mL。

2.5線性關(guān)系與檢出限

在優(yōu)化的色譜-質(zhì)譜條件下進(jìn)行測定，以4種BUVSs在MRM模式下定量離子的峰面積(y)對相應(yīng)的質(zhì)量濃度(c,μg/L )進(jìn)行線性回歸計算，得到線性方程和相關(guān)系數(shù)(r2)。分別以信噪比S/N=3和S/N=10時的質(zhì)量濃度確定方法的檢出限(LOD)和定量下限(LOQ)，結(jié)果見表3。4種BUVSs的相關(guān)系數(shù)均大于0.99，UV-350，UV-320，UV-328和UV-327的LOD分別為0.023，0.024，0.006 3，0.021 mg/kg，LOQ分別為0.078，0.081，0.021，0.072 mg/kg。

表3　UPLC-MS/MS方法的分析性能

2.6回收率與精密度

以陰性棉、錦綸為樣品，分別添加1倍LOQ、2倍LOQ、10倍LOQ 3個濃度水平的BUVSs，進(jìn)行加標(biāo)回收率和精密度實驗，每個濃度平行測定6次，結(jié)果如表4所示。在3個濃度水平下，不同基底紡織品中目標(biāo)化合物的平均回收率為80.0%～102.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.2%～9.9%，方法的準(zhǔn)確度和精密度能滿足紡織品中BUVSs的測定要求。

表4　方法的回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

圖2　樣品中UV-328的MRM圖Fig.2　UPLC-MS/MS chromatograms for UV-328 found in sample

2.7樣品分析

采用本方法對13個防紫外線紡織品樣品中4種BUVSs進(jìn)行篩查測定，其中1個樣品定性檢出UV-328(見圖2)，但其含量低于LOQ(0.021 mg/kg)，其它樣品均未檢出4種BUVSs。這可能是因為樣品來源單一并集中在少數(shù)防紫外線紡織品樣品的緣故。

3結(jié)論

本文建立了超聲提取/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定紡織品中4種BUVSs的分析方法。該方法以正己烷飽和的乙腈為提取溶劑，超聲提取樣品中的待測組分，萃取液經(jīng)過濾后進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法多反應(yīng)監(jiān)測模式測定。方法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，可用于紡織品中4種BUVSs的實際檢測，并可為制定相關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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Simultaneous Detection of Four Benzotriazole UV Stabilizers in Textiles by Ultra-high Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

ZHU Feng1,2*，WEI Min1,2，SHI Dian-wang1,2，XUE Jian-ping1,2

(1.Fujian Provincial Fiber Inspection Bureau,Fuzhou350026,China；2.Fujian Provincial Key Laboratory of Textiles Inspection Technology，F(xiàn)uzhou350026,China)

Abstract：A method was developed for the simultaneous determination of four benzotriazole UV stabilizers(BUVSs) including UV-350,UV-320,UV-328 and UV-327 in textiles by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS) combined with ultrasonic extraction(USE).The samples were extracted with acetonitrile saturated with n-hexane under ultrasonic assistance.The separation was performed on an Eclipse Plus C18column(2.1 mm×50 mm,1.8 μm) using 0.01 mol/L ammonium formate-methanol as mobile phase.Identification and quantification were achieved by UPLC-MS/MS coupled with electrospray ionization(ESI) source in positive ion mode and multiple reactions monitoring(MRM) mode,and the concentration of each analyte was calibrated by the external standard method.The result indicated that the calibration curves of four BUVSs showed good linear relationships between peak areas and certain concentration ranges with correlation coefficients(r2) greater than 0.99.The limits of detection for UV-350,UV-320,UV-328,UV-327 were 0.023,0.024,0.006 3,0.021 mg/kg,respectively.The limits of quantitation were 0.078,0.081,0.021,0.072 mg/kg,respectively.The recoveries at three spiked concentration levels were in the range of 80.0%-102.9% with relative standard deviations(RSDs) of 1.2%-9.9%.The developed method was successfully applied in the determination of BUVSs in textiles.

Key words：ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS);benzotriazole UV stabilizers(BUVSs);textiles;ultrasonic extraction(USE)

收稿日期：2015-09-29；修回日期：2015-11-06

基金項目：福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局科技項目(FJQI2014020)

*通訊作者：朱峰，碩士，工程師，研究方向：有毒有害物質(zhì)色譜質(zhì)譜分析及其質(zhì)量控制，Tel:0591-83595610,E-mail:zhufengdr@163.com

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.04.007

中圖分類號：O657.63;TQ047.4

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

文章編號：1004-4957(2016)04-0414-06