劉曉蕓, 彭胡丹

(1. 江蘇省南京市紅十字醫(yī)院 病理科, 江蘇 南京, 210000;

2. 江蘇省南京金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司, 江蘇 南京, 210000)

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人乳頭瘤病毒DNA聯(lián)合液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查在宮頸病變?cè)\斷中的應(yīng)用

劉曉蕓1, 彭胡丹2

(1. 江蘇省南京市紅十字醫(yī)院 病理科, 江蘇 南京, 210000;

2. 江蘇省南京金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司, 江蘇 南京, 210000)

摘要：目的探討人乳頭瘤病毒(HPV)DNA聯(lián)合液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查在宮頸病變?cè)\斷中的應(yīng)用。方法663例行宮頸癌前病變篩查的女性，分別進(jìn)行HPV-DNA和TCT檢測(cè)，所有HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性和TCT檢測(cè)分級(jí)≥非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASCUS)者在陰道鏡下取組織樣本進(jìn)行病理檢查。結(jié)果組織學(xué)病理檢查顯示，慢性炎癥201例、宮頸內(nèi)上皮瘤變(CIN)1級(jí)167例、CIN2級(jí)125例、CIN3級(jí)114例、宮頸癌56例。聯(lián)合檢測(cè)對(duì)≥CIN2級(jí)病理的診斷敏感度、特異度、陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值分別為90.85%、76.90%、75.92%和91.29%，單獨(dú)HPV-DNA檢測(cè)對(duì)≥CIN2級(jí)病理的診斷敏感度、特異度、陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值分別為80.68%、85.60%、81.79%和84.68%，單獨(dú)TCT檢測(cè)對(duì)≥CIN2級(jí)病理的診斷敏感度、特異度、陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值分別為81.69%、82.88%、79.28%和84.96%，其中聯(lián)合檢測(cè)對(duì)病理分級(jí)≥CIN2的診斷敏感度高于單獨(dú)檢測(cè)；不同病理分級(jí)HPV-DNA陽(yáng)性率和負(fù)荷量比較，CIN3級(jí)與宮頸癌間無(wú)顯著差異(P>0.05), 其余各級(jí)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。此外，TCT結(jié)果分級(jí)與HPV陽(yáng)性率二者間呈正相關(guān)(r=0.56, P<0.01)。結(jié)論HPV-DNA和TCT檢測(cè)均是篩查宮頸癌前病變的有效方法，聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷敏感度，病變?cè)絿?yán)重者HPV陽(yáng)性率和病毒負(fù)荷量越高。

關(guān)鍵詞:人乳頭瘤病毒; 液基薄層細(xì)胞學(xué); 病理檢查; 宮頸病變

宮頸癌是臨床發(fā)病率較高的婦科腫瘤，人乳頭瘤病毒(HPV)感染是其主要發(fā)病原因，其中HPV16、58、52、33等基因亞型的感染與癌前病變密切相關(guān)[1-2]，因此HPV-DNA檢測(cè)在宮頸癌前病變的診斷中具有重要意義[3]。宮頸具有易暴露、易觀察及易取樣等解剖學(xué)特征，及時(shí)發(fā)現(xiàn)病變對(duì)于病情逆轉(zhuǎn)和治療具有重要意義。液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查可提高對(duì)異常細(xì)胞的診斷率，其診斷準(zhǔn)確率較傳統(tǒng)的巴氏染色法高[4]。本研究以組織學(xué)病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，探討HPV-DNA和TCT在宮頸癌前病變?cè)\斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月—2015年1月在南京市紅十字醫(yī)院行宮頸癌前病變篩查的女性663例，年齡21～60歲，平均(42.57±3.16)歲，排除急性生殖道炎癥、有子宮頸錐切或子宮切除史者。

1.2方法

1.2.1HPV-DNA檢測(cè)：以宮頸刷取得足量分泌物和脫落細(xì)胞，置于洗脫管中送檢。采用核酸擴(kuò)增儀檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行PCR檢測(cè)，基本步驟如下：洗脫液離心后棄上清，裂解懸浮沉淀，加熱后離心，保留上清液。按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行擴(kuò)增，再以雜交法對(duì)基因進(jìn)行分型檢測(cè)，經(jīng)洗膜、顯色，1 h內(nèi)觀察結(jié)果。

1.2.2TCT檢測(cè)：將收集到的細(xì)胞經(jīng)自動(dòng)制片系統(tǒng)處理后制成涂片，行HE染色后，閱片。采用TBS分類法[5]分為: ① 正?；蜓装Y; ② 非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASCUS)及腺細(xì)胞(AGSU); ③ 不排除高度病變的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(ASC-H); ④ 低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL); ⑤ 高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL); ⑥ 鱗狀細(xì)胞癌(SCG)和腺癌。

1.2.3組織病理檢查：所有HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性和TCT檢測(cè)分級(jí)≥ASCUS的女性均進(jìn)一步行陰道鏡檢查，在圖像異常區(qū)域和碘試驗(yàn)陰性區(qū)域取組織，制片，行HE染色，閱片。檢查結(jié)果分為慢性炎癥，宮頸內(nèi)上皮瘤變(CIN)1級(jí)、2級(jí)、3級(jí)及宮頸癌。

1.3觀察指標(biāo)

① 記錄3種檢查方法的結(jié)果，以組織學(xué)病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分別計(jì)算HPV-DNA、TCT及聯(lián)合檢測(cè)的診斷敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。② 觀察不同程度宮頸病變與HPV-DNA負(fù)荷量的關(guān)系。③ 觀察不同程度TCT結(jié)果與HPV感染的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1HPV-DNA、TCT及聯(lián)合檢測(cè)的診斷結(jié)果

663例樣本中，組織學(xué)病理檢查結(jié)果：慢性炎癥201例、CIN1級(jí)167例、CIN2級(jí)125例、CIN3級(jí)114例、宮頸癌56例，其中≥CIN2級(jí)295例，其余分級(jí)368例。單獨(dú)HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果：陽(yáng)性291例，陰性372例，其中對(duì)≥CIN2級(jí)病理檢測(cè)陽(yáng)性238例，陰性57例；TCT檢測(cè)結(jié)果：陽(yáng)性(分級(jí)≥ASCUS)304例，陰性(正常或炎癥)359例；其中對(duì)≥CIN2級(jí)病理檢測(cè)陽(yáng)性241例，陰性54例；聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果：陽(yáng)性353例，陰性310例，其中對(duì)≥CIN2級(jí)病理檢測(cè)陽(yáng)性268例，陰性27例。

單獨(dú)HPV-DNA檢測(cè)對(duì)≥CIN2級(jí)病理的診斷敏感度80.68%(238/295)，特異度85.60%(315/368)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值81.79%(238/291)，陰性預(yù)測(cè)值84.68%(315/372)；單獨(dú)TCT檢測(cè)對(duì)≥CIN2級(jí)病理的診斷敏感度81.69%(241/295)，特異度82.88%(305/368)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值79.28%(241/304)，陰性預(yù)測(cè)值84.96%(305/359)；HPV-DNA聯(lián)合TCT檢測(cè)對(duì)≥CIN2級(jí)病理的診斷敏感度90.85%(268/295)，特異度76.90%(283/368)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值75.92%(268/353)，陰性預(yù)測(cè)值91.29%(283/310)。聯(lián)合檢測(cè)的診斷敏感度高于單獨(dú)檢測(cè)。

2.2不同程度宮頸病變與HPV感染的關(guān)系

隨著病變程度分級(jí)的增加，HPV陽(yáng)性率及負(fù)荷量均隨之增加。CIN3級(jí)與宮頸癌HPV陽(yáng)性率、負(fù)荷量無(wú)顯著差異(P>0.05)，其余各級(jí)間HPV陽(yáng)性率、負(fù)荷量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1　不同程度宮頸病變與HPV感染的關(guān)系

與慢性炎癥比較, *P<0.05, **P<0.01;

與CIN1級(jí)比較, ##P<0.01;

與CIN2級(jí)比較, △P<0.05, △△P<0.01。

2.3不同程度TCT結(jié)果與HPV感染的關(guān)系

TCT陽(yáng)性病例中，ASCUS/AGSU分級(jí)40例，HPV陽(yáng)性率30.00%(12/40)；ASC-H分級(jí)54例，HPV陽(yáng)性率33.33%(18/54)；LSIL分級(jí)81例，HPV陽(yáng)性率51.85%(42/81)；HSIL分級(jí)104例，HPV陽(yáng)性率73.08%(76/104)；SCG/腺癌25例，HPV陽(yáng)性率96.00%(24/25)。經(jīng)Spearman等級(jí)秩相關(guān)分析，TCT結(jié)果分級(jí)與HPV陽(yáng)性率二者間呈正相關(guān)(r=0.56，P<0.01)，即隨著TCT結(jié)果分級(jí)的增加，HPV陽(yáng)性率也隨之增加。

3討論

宮頸癌發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中居于第2位，早期檢查和確診對(duì)提高治療效果，降低死亡率具有重要意義[6]。宮頸細(xì)胞學(xué)檢查最初始于巴氏涂片，但該方法假陰率較高，TCT技術(shù)的出現(xiàn)較好地解決了涂片質(zhì)量問(wèn)題，使檢查結(jié)果更加精確[7]。

目前研究[8-9]表明，HPV感染是宮頸病變的主要因素，尤其是高危型HPV與CIN的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。大多數(shù)女性一生中均會(huì)發(fā)生至少一次的HPV感染，但這種感染大多為“一過(guò)性”，可自行清除，但年齡在30歲以上的女性，發(fā)生持續(xù)性感染的可能性增加，如HPV亞型為高危型，應(yīng)高度重視。HPV檢測(cè)方法有細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查、免疫組化、PCR法等，本研究采用PCR法，獲得了較高的診斷敏感度、特異度及陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外已普遍開展TCT和HPV-DNA檢查，兩者聯(lián)合應(yīng)用可大大提高宮頸病變的檢出率，篩查出更多高危患者[10-11], 一旦出現(xiàn)較高級(jí)別的病變，立即在陰道鏡下行組織病理學(xué)檢查，及時(shí)確診病情。

本研究結(jié)果表明，HPV-DNA聯(lián)合TCT檢測(cè)診斷宮頸癌前病變的敏感度較單純采用一種方法高，臨床上可根據(jù)患者實(shí)際情況靈活選用檢測(cè)方法。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，TCT結(jié)果分級(jí)越高，HPV陽(yáng)性率也越高，與劉國(guó)忠等[12]報(bào)道一致。同時(shí)，CIN級(jí)別越高，患者HPV陽(yáng)性率越高，也證實(shí)了HPV感染在CIN進(jìn)展中的作用，與國(guó)外相關(guān)報(bào)道[13-14]一致。鑒于大多數(shù)女性都可能“一過(guò)性”感染HPV，而在6～12個(gè)月內(nèi)復(fù)查的成本較高，患者的依從性也無(wú)法保證，因此單純以HPV陽(yáng)性來(lái)篩選宮頸癌的高危人群可能存在諸多局限，部分學(xué)者[15-18]嘗試分析HPV病毒載量與宮頸疾病的關(guān)系，但目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)病毒載量是否與宮頸病變程度相關(guān)仍存在爭(zhēng)議。本研究結(jié)果表明，隨著病變程度分級(jí)的增加，HPV-DNA負(fù)荷量與HPV陽(yáng)性率同步增加，提示病毒載量的檢測(cè)可能會(huì)作為宮頸病變程度的參考指標(biāo)之一[19-20]。

綜上所述, HPV-DNA和TCT檢測(cè)均是篩查宮頸癌前病變的有效方法，聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷敏感度，病變?cè)絿?yán)重，HPV陽(yáng)性率和病毒負(fù)荷量越高。

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Application of human papillomavirus DNA combined with thinprep cytologic test in the diagnosis of cervical lesions

LIU Xiaoyun1, PENG Hudan2

(1.PathologyDepartment,NanjingRedCrossHospital,Nanjing,Jiangsu, 210000;

2．NanjingKingmedDiagnosticsCo.,Ltd,Nanjing,Jiangsu, 210000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the application of human papilloma virus (HPV) DNA combined with thinprepcytologictest (TCT) in the diagnosis of cervical lesions. MethodsA total of 663 women underwent screening of cervical precancerous lesion were given HPV-DNA and CTC detections. The sample tissues of all the patients with positivity of HPV-DNA detection and grading ≥atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS) detected by TCT were collected for pathological examination under colposcope. ResultsHistopathological examination revealed that there were 201 cases of chronic inflammation, 167 cases of grade 1 cervical intraepithelial neoplasia (CIN), 125 cases of grade 2 CIN, 114 cases of grade 3 CIN and 56 cases of cervical cancer. The diagnostic sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of combined detection in grade 2 CIN were 90.85%, 76.90%, 75.92% and 91.29% respectively, which were respectively 80.68%, 85.60%, 81.79% and 84.68% by HPV-DNA detection alone in grade 2 CIN and respectively 81.69%, 82.88%, 79.28% and 84.96% by TCT detection alone in grade 2 CIN. Among them, the sensitivity of combined detection in grade 2 CIN was higher than that of HPV-DNA detection alone and TCT detection alone. There was no significant difference between grade 3 CIN and cervical cancer by comparison to the HPV-DNA positive rates and load capacity in patients with different pathological gradings (P>0.05), and significant differences were presented among other gradings (P<0.05 or P<0.01). Additionally, there was a positive correlation between grading of TCT Resultsand the positive rate of HPV (r=0.56, P<0.01). ConclusionBoth HPV-DNA and TCT detections are effective methods in the screening of cervical precancerous lesion, and combined detection can improve the diagnostic sensitivity. The more serious the lesions are, the higher the positive rate of HPV and viral load capacity are.

KEYWORDS:human papilloma virus; thinprepcytologictest; pathological examination; cervical lesion

基金項(xiàng)目:中國(guó)高校醫(yī)學(xué)期刊臨床專項(xiàng)資金(11523958)

收稿日期:2015-11-13

中圖分類號(hào):R 711.74

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2016)03-091-04

DOI:10.7619/jcmp.201603028