袁新敏 青 松

(內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

烏蘭十三味湯散是由土木香、苦參、懸鉤子木、山奈、訶子、川楝子、梔子、茜草、枇杷葉、紫草茸、橡子、紫草、金蓮花等13 味藥組成的復(fù)方蒙藥制劑。梔子為處方中治療熱病的主味藥，文獻(xiàn)記載［1］其中含有梔子苷、羥異梔子甙、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷、山梔苷等8 種以上活性成分，主要為梔子苷。因此本文對(duì)制劑中的梔子苷進(jìn)行了HPLC含量測(cè)定方法研究。經(jīng)方法學(xué)考察及陰性對(duì)照試驗(yàn)，表明此法專屬性強(qiáng)，可作為烏蘭十三味湯散的含量測(cè)定方法。

1 樣品來(lái)源

樣品由內(nèi)蒙古庫(kù)倫蒙藥廠(批號(hào)100315)、烏蘭浩特中蒙制藥有限公司(批號(hào)060304、060505)提供。

2 儀器與試藥

2.1 儀器：島津LC-10ATVP 泵SPD-10A 型檢測(cè)器，SCL-20A 色譜工作站。

2.2 試劑與試藥：梔子苷對(duì)照品(批號(hào)：110749-200714)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇為分析純和色譜純，乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

3 分析方法驗(yàn)證

3.1 色譜條件：色譜柱：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實(shí)驗(yàn)研究采用Phenomenex C18 柱(250mm ×4.6mm，5μ)和Shim-packC18 柱(250 mm × 4.6mm，5μ)兩種品牌色譜柱;流動(dòng)相：乙腈-水(15：85);流速：1mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)不得低于1500。

3.2 供試品溶液的制備：取本品約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50Hz)30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液用0.45μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.3 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL 約含60ug 的溶液，即得。

3.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)：取按處方量并以相同工藝制備的陰性對(duì)照(缺梔子)1g，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法操作，進(jìn)樣量10μl。測(cè)得結(jié)果為：陰性對(duì)照色譜圖中在梔子苷對(duì)照品色譜圖中相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)。表明其它成分對(duì)梔子苷的測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1 ～3。

圖1 陰性對(duì)照色譜圖

圖2 對(duì)照品色譜圖

圖3 供試品色譜圖

3.5 線性關(guān)系考察：精密稱取梔子苷對(duì)照品3.35mg，置25mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(濃度為0.134mg/mL)。分別精密吸取2、5、10、15、20μL 進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果梔子苷在242.8ng ～2428ng 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y =1515.7X-9962，r=0.99998。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h、進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明梔子苷在24h 內(nèi)的面積積分值基本穩(wěn)定不變。RSD 為0.2(%)。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)(批號(hào)100315)供試品6 份，各取約1.0g，分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定每份含量，結(jié)果平均含量為6.1985mg/g，RSD 為0.7%。

3.8 加樣回收試驗(yàn)：取供試品(批號(hào)100315，含量6.1985mg/g)6 份，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別依次精密加入梔子苷對(duì)照品3.00mg，再精密加入甲醇50 mL，搖勻，稱定重量，分別按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

4 樣品含量測(cè)定

取本品按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［含量測(cè)定］項(xiàng)下的方法處理并測(cè)定，3 批樣品的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中梔子苷含量測(cè)定結(jié)果

5 討 論

5.1 提取效率：取5 份樣品分別超聲處理(功率為400w，頻率為40KHZ)10 min 、20 min、30 min、40 min、50 min，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果超聲處理30min 后，梔子苷的總含量基本不再增加，故確定超聲時(shí)間為30min。

5.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL 含0. 060mg 的溶液，通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器，自190nm ～700nm 進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果梔子苷在238nm 處有最大吸收并無(wú)干擾。結(jié)合《中國(guó)藥典》2010 年版一部梔子藥材項(xiàng)下含量測(cè)定方法，采用238nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

5.3 換不同廠家、不同型號(hào)的色譜柱，按確定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果分離效果好，測(cè)的結(jié)果一致。

5.4 運(yùn)用HPLC 法測(cè)定烏蘭十三味湯散中梔子苷的含量，方法簡(jiǎn)便、分離良好、結(jié)果準(zhǔn)確，為全面客觀地建立烏蘭十三味湯散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

［1］常全新，丁麗霞.中藥活性成分分子手冊(cè)［M］.下冊(cè).學(xué)苑出版社，2002：1997.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］. 一部.2010.