高夕英， 張英豪， 張榮杰

論 著

鈣磷脂結合蛋白Ⅱ在食管鱗癌組織中的表達及臨床意義

高夕英， 張英豪， 張榮杰

目的 研究鈣磷脂結合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在食管鱗癌及癌旁組織中的表達，分析其與食管鱗癌臨床病理特征間的關系。方法 應用免疫組化法檢測AnnexinⅡ在41例食管鱗癌組織及配對的癌旁組織、10例正常胃組織中的表達。 結果 AnnexinⅡ蛋白在食管鱗癌組織中的表達明顯高于癌旁組織及正常組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。食管鱗癌組織中Annexin Ⅱ的表達水平與腫瘤分化程度及淋巴結是否轉移相關(P<0.05)，而與年齡、性別、浸潤深度、臨床分期無關(均P>0.05)。結論AnnexinⅡ的表達在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，有望作為食管鱗癌診治的新靶點。

鈣磷脂結合蛋白Ⅱ； 食管鱗癌； 淋巴結轉移； 腫瘤分化

食管癌在我國是較常見的消化道惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率逐年提高[1]。以手術為主的綜合治療雖改善了食管鱗癌患者的生活質量和遠期生存，但往往治療后仍會發(fā)生復發(fā)或轉移，預后較差，總5年生存率不到30%[2]。鈣磷脂結合蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)是Annexins超家族中A亞家族的重要成員，具有鈣離子介導的磷脂結合特性，其在人體內皮細胞、單核/巨噬細胞、骨髓細胞和某些腫瘤細胞中表達豐富，在人體細胞中的作用主要是參與細胞膜的形成、細胞的轉運活動、吞吐、增殖、信號轉導、分化以及凋亡等重要的生命過程[3]。近年來的報道AnnexinⅡ的表達失調與諸多腫瘤的侵襲、轉移等機制的形成中扮演重要角色[4]。但關于AnnexinⅡ在食管鱗癌中的表達及臨床意義的報道較少，本研究擬通過測定AnnexinⅡ在食管鱗癌中的表達探討其能否成為食管鱗癌診斷治療指標的可能性。

1 材料和方法

1.1 標本來源 收集榮成市人民醫(yī)院2009年4月至2011年7月手術后經(jīng)病理證實41例食管鱗癌手術切除標本，在41例標本中，均含有配對的癌旁組織(距癌組織≥5 cm)。所有標本均有完整臨床資料、病理分化程度和隨訪資料，且術前均未行放化療等治療。其中男23例，女18例，男女之比1.28∶1，年齡42～81歲，中位年齡56.5歲；中低分化14例，高分化27例。有淋巴結轉移19例，無淋巴結轉移22例。腫瘤浸潤深度：淺肌層17例，深肌層15例，纖維膜9例。TNM分期Ⅰ期11例，Ⅱ期12例，Ⅲ期16例，Ⅳ期2例。同時另選取10例食管良性病例的正常食管組織切片作為正常對照，所有標本均置于液氮中凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑 AnnexinⅡ抗體 鼠抗人單克隆抗體(濃度為1∶300)購自美國Abcam公司，EliVisionTM試劑盒、免疫組化二抗均購自福建邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.3 免疫組化方法及陽性判定 按照試劑盒說明步驟操作，在自動免疫組化染色儀將樣本固定、包埋、切片，染色固化。在顯微鏡下觀察照相，以圖文分析系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)分析。以細胞膜、胞質內出現(xiàn)棕黃色顆粒為AnnexinⅡ陽性表達。陽性判定在雙盲法下進行，依據(jù)參考文獻[5]的方法，即：每張切片在光鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)100個瘤細胞，著色強度分為，無色(-)為0分、淺黃色(+)為1分、黃色及更深顏色(++)為2分。陽性細胞數(shù)<10%為0分，10%～50%為1分，>50%為2分。兩項得分相乘，結果≥2分為陽性病例，<2分為陰性病例。

1.4 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計學軟件包進行統(tǒng)計學分析，不同食管組織中AnnexinⅡ的表達的比較應用χ2檢驗，AnnexinⅡ與食管鱗癌臨床病理特征間的關系采用Spearman相關分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中AnnexinⅡ蛋白的表達 AnnexinⅡ陽性表達為在細胞膜、胞質內出現(xiàn)棕黃色顆粒(見圖1～3)，本研究結果顯示，AnnexinⅡ蛋白在食管鱗癌組織中的表達明顯高于配對的癌旁組織及正常的食管組織，差異具有統(tǒng)計學意義，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 不同胃組織中AnnexinⅡ的表達

組織類型例數(shù)(n)AnnexinⅡ表達陽性陰性陽性率(%)χ2值P值食管鱗癌組織41301173.178.534*0.000癌旁組織41142734.157.612#0.000正常組織100100

*:AnnexinⅡ在食管鱗癌組織與癌旁組織中表達的比較；#：AnnexinⅡ癌旁組織與正常組織中表達的比較。

2.2 AnnexinⅡ蛋白的表達與食管鱗癌臨床病理特征間的相關性 Spearman相關分析結果顯示，食管鱗癌組織中Annexin Ⅱ的表達水平與腫瘤分化程度及淋巴結是否轉移相關(P<0.05)，而與年齡、性別、浸潤深度、臨床分期無關(均P>0.05)。見表2。

表2 AnnexinⅡ蛋白的表達與食管鱗癌臨床病理特征間的相關性

3 討論

人AnnexinⅡ蛋白最早作為一種酪氨酸蛋白激酶的作用底物被發(fā)現(xiàn)，具有結合磷脂、結合蛋白等諸多生理作用。 AnnexinⅡ蛋白的分子量為36 kD，其基因位于15q21-q22，含1.4 kb編碼基因，有3個假基因分別位于4號、9號、10號染色體上，并由13個外顯子和12個內含子組成[6]。

近年來國內外的相關研究表明，AnnexinⅡ的表達與諸多腫瘤的生長、浸潤以及轉移有著緊密聯(lián)系。Nedjadi 等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，AnnexinⅡ蛋白可與S100A6形成聚合體，共同促進胰腺癌細胞的遷移能力，由此推斷AnnexinⅡ蛋白與胰腺癌的發(fā)展直接相關。Ohno 等[8]發(fā)現(xiàn)AnnexinⅡ蛋白通過參與細胞增殖及改變膜生理學特性來增加腎透明細胞癌的轉移幾率，并預測AnnexinⅡ蛋白的陽性表達是腎透明細胞癌是否轉移的重要預測因子。國內蘇紅英等[9]觀察AnnexinⅡ在人肝細胞癌中的表達情況，結果發(fā)現(xiàn)肝癌組織中Annexin Ⅱ mRNA的表達量高于癌旁肝組織和正常肝組織，是癌旁肝組織的3.38倍，是正常肝組織的4.42倍，由此推測AnnexinⅡ可能成為肝細胞癌臨床診斷的新指標。黨秋紅等[10]探討了乳腺癌浸潤性導管癌組織中AnnexinⅡ蛋白的表達及其意義，結果發(fā)現(xiàn)AnnexinⅡ蛋白在浸潤性導管癌中的表達率為90.00%(54/60)，明顯高于在乳腺纖維腺瘤組織中的表達率，且AnnexinⅡ蛋白的表達與組織學分級及淋巴結轉移相關。盡管如此，目前關于AnnexinⅡ蛋白與食管鱗癌的相關研究較少，因此在本研究中，我們探討食管鱗癌與其配對癌旁組織及正常組織中AnnexinⅡ的表達及其意義。通過免疫組化結果顯示，食管鱗癌組織中的AnnexinⅡ的表達陽性率遠遠高于癌旁胃組織及正常胃組織，差異具統(tǒng)計學意義。另外，食管鱗癌組織中Annexin Ⅱ的表達水平與腫瘤分化程度及淋巴結是否轉移相關(P<0.05)，這說明AnnexinⅡ的高表達與食管鱗癌的惡性程度有密切的相關性。

目前有關AnnexinⅡ促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制研究開展尚不全面，現(xiàn)已知AnnexinⅡ在細胞中可以單體、異源二聚體和異源四聚體存在，多分布于細胞質與細胞膜。Mai等[11]研究中指出， AnnexinⅡ的異源四聚體主要在惡性腫瘤細胞表面分布，可作為多種蛋白酶及細胞外基質成份的結合位點或協(xié)同作用靶點，通過以下可能的途徑產(chǎn)生作用：(1)具有減弱腫瘤細胞對細胞外基質成分粘附的作用，通過與抗粘附分子(如鍵生蛋白-C)反應釋放更多蛋白酶，從而達到水解細胞外基質的目的；通過與t-PA、PLG、組織蛋白酶B等蛋白質協(xié)同反應，降解細胞外基質成分，促進新生血管的生成；(2)通過與某些因子例如血管形成因子(如VEGF) 與S-100A4相互作用，從而促進腫瘤新生血管形成，對腫瘤細胞侵犯周圍組織的過程有協(xié)助；(3)通過和細胞骨架成分結合分子(如肌成束蛋白)、黏附分子(如ALCAM)的相互協(xié)同作用，促進腫瘤細胞對正常組織的局部浸潤和遠處轉移。從以上幾個可能途徑推測，食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中，AnnexinⅡ可能通過促使上述這些蛋白酶以及其底物和相關分子相互作用，導致蛋白酶的前體活化、新生血管生成以及細胞外基質成分的降解，從而對腫瘤細胞從原發(fā)腫瘤處的脫離、轉移、侵襲周圍的正常組織的能力起到幫助作用，具體的機制研究將是我們下一步工作的重點。

綜上所述，AnnexinⅡ有可能在食管鱗癌的生長、侵襲及遠處轉移等過程中起到了重要的作用，其有可能應用于臨床作為評估食管鱗癌的惡性程度和預后的指標，并有望作為食管鱗癌早期的診斷依據(jù)及基因治療的新靶點。

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The expression and clinical significance of AnnexinⅡ in esophageal squamous cell cancer

GAOXiying,ZHANGYinghao,ZHANGRongjie

(DeparomentofEndoerinology,RongchengPeople’sHospital,AffiliatedHospitalofTaishanMedicalCollege,Rongcheng264300,China)

GAOXiying,E-mail：qbtzsss@163.com

Objective To expcore the expression and clinical significance of Annexin Ⅱ in esophageal squamous cell cancer and analyze the relationship between Annexin Ⅱ and clinicopathological features. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of AnnexinⅡ among 41 matched pairs of esophageal squamous cell cancer tissues and 10 cases of normal esophageal tissues. Results There were obviously differences in the expression of Annexin Ⅱ in esophageal squamous cell cancer tissues, circa-cancerous tissues and normal esophageal tissues(P<0.05). In the specimens of esophageal squamous cell cancer, expression of Annexin Ⅱ related to cell differentiation of tumors and metastasis of lymph node, no relation to age, sex, depth of invasion and clinical stage(P>0.05). Conclusions The expressions of Annexin Ⅱ had important effect in development and growth in esophageal squamous cell cancer, and might become a diagnosis index and treating target in clinic treatment.

annexinⅡ; esophageal squamous cell cancer; lymph node metastasis; tumor cell differentiation

264300 山東 榮成，榮成市人民醫(yī)院 泰山醫(yī)學院附屬醫(yī)院 消化科

高夕英，女，主任醫(yī)師，擅長于消化專業(yè)，對肝膽疾病、消化道炎癥、潰瘍、出血、中毒、腫瘤等的治療 尤其突出，E-mail: qbtzsss@163.com

10.3969/j.issn.1674-4136.2015.02.005

1674-4136(2015)02-0086-03

2014-08-16] [本文編輯：劉 嘉]