張錕等

【摘 要】 對近些年來如何抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞的實驗研究文獻進行分析總結(jié)，主要從4個方面闡述已取得的科研成果，旨在歸納與展望更多可能防治本病的潛在性治療手段。

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕；成纖維樣滑膜細胞；潛在性治療手段；綜述

doi：10.3969/j.issn.2095-4174.2015.10.018

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以關(guān)節(jié)滑膜為主要靶組織的慢性、系統(tǒng)性、炎癥性及自身免疫功能障礙性疾病，主要表現(xiàn)為進行性、對稱性、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，部分患者伴有不同程度的全身癥狀。在我國發(fā)生率約為0.32%～0.36%，世界范圍內(nèi)高達0.5%～1.0%[1]。RA主要病理表現(xiàn)為滑膜細胞增生，襯里層增厚，炎性細胞浸潤（T細胞、B細胞、NK細胞、漿細胞等），形成血管翳，大量的滑膜細胞和破骨細胞侵入相鄰關(guān)節(jié)的軟骨和軟骨下骨造成關(guān)節(jié)破壞[2]。RA成纖維樣滑膜細胞（rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocyte，RA-FLS）是滑膜細胞的主要組成部分，被越來越多的學(xué)者作為研究RA的主要靶向細胞，本文著重對近年來國內(nèi)外相關(guān)研究報告及文獻進行綜述。

1 炎性因子對RA-FLS的影響

近些年研究發(fā)現(xiàn)，一些炎性因子通過核轉(zhuǎn)錄因子（nuclear factor-κB，NF-κB）和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）等信號通路，刺激FLS的侵襲[3]。腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是一種具有多種生物活性的炎性介質(zhì)，在RA發(fā)病機理中居于重要地位。RA患者關(guān)節(jié)液中TNF-α水平與關(guān)節(jié)炎的嚴重程度呈正相關(guān)，TNF-α可使RA-FLS凋亡障礙，并產(chǎn)生多種炎癥細胞因子[如白細胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8]以及刺激基質(zhì)金屬蛋白酶（matrixmetall oproteinases，MMPs）的高表達，是RA病變持續(xù)存在、遷延進展的關(guān)鍵因素[4]。

NF-κB信號途徑參與調(diào)節(jié)多種炎性因子和細胞粘附因子的表達，在RA發(fā)病中起到重要作用，如在RA-FLS中過表達IκBa，能抑制NF-κB的活性，進而下調(diào)促炎因子的表達水平[5]。羅心靜等[6]

在實驗中證實，RA-FLS受TNF-α刺激后能誘導(dǎo)細胞中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的核移位，導(dǎo)致NF-κB信號通路活化。由此可見，通過抑制TNF-α不僅能減少IL和MMPs的分泌，還對信號通路產(chǎn)生一定的影響，最終極大地延緩RA的進程。Lin等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在RA-FLS中分別給予藥物環(huán)格列酮和15D-PGJ2的情況下，能分別抑制TNF-α誘導(dǎo)的MMP-13水平上升（113.1±5.1）%和（95.5±4.5）%；它們可通過過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPARγ）和p38-MAPK的調(diào)節(jié)進而衰減NF-κB信號途徑的活化，被認定是治療RA的一種潛在性手段。

IL-1和TNF-α是一對“姐妹因子”，共同影響FLS的增殖、存活及其他炎性因子產(chǎn)生，促進破骨細胞的活化和合成，在RA的發(fā)病機制中同樣扮演重要的角色。因此，如何降低RA患者IL-1的水平，進而減緩其對軟骨的破壞，也是目前研究的熱點。尤欣等[8]以腺病毒為載體，將p53基因用于治療IL-1β誘導(dǎo)增殖的RA-FLS，TUNEL染色雖未明確檢測到細胞凋亡，但組織學(xué)分析顯示大量浸潤的炎癥細胞消失。IL-6被認為是TNF-α生物效應(yīng)的放大因子，能促進類風(fēng)濕因子的表達，并介導(dǎo)前列腺素（PGs）的生成。IL-8、IL-17也是RA發(fā)病的重要炎癥介質(zhì)，具有強大趨化作用，能加速血管翳的形成、增強炎性細胞的浸潤、調(diào)節(jié)淋巴細胞粘附分子的表達。因此抑制RA-FLS的促炎細胞因子IL-6、IL-8的產(chǎn)生也是防治RA的重要策略。研究發(fā)現(xiàn)，昆母湯醇提取物對TNF-α誘導(dǎo)的RA-FLS增殖中IL-6、IL-8表達有一定的抑制作用[9]。IL-17可通過誘導(dǎo)RA-FLS產(chǎn)生富半胱氨酸蛋白61（Cysteine-rich，Cyr61）從而促使RA-FLS增生[10]，因此Cyr61也是作為RA治療的一個潛在靶點。越來越多人認為，IL-33對RA的發(fā)展也起到了重要作用[11]。Palmer等[12]通過實驗證實，IL-33在RA患者的滑膜組織中高表達；IL-33的miRNA和蛋白也被發(fā)現(xiàn)在RA-FLS中有一定的表達，但其水平可能與IL-1β、TNF-α的誘導(dǎo)有關(guān)。實驗表明，IL-33作用于缺乏ST2蛋白的小鼠模型中，不僅被證實可延緩膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，還能減弱其他炎性細胞因子（IL-17、TNF-α和IFN-γ）的產(chǎn)生[13]。這些研究結(jié)果表明，特異性阻斷IL-33/ST2通路可能是治療RA的一種有效的手段。

2 MMPs對RA-FLS的影響

RA患者關(guān)節(jié)的進行性破壞主要由過度增殖的FLS分泌MMPs造成[14]。MMPs在體內(nèi)主要降解細胞外基質(zhì)（extracellular matrx，ECM），是調(diào)節(jié)ECM產(chǎn)生與消除的動態(tài)平衡中最重要的酶系，但其分泌異常則會造成關(guān)節(jié)的破壞。根據(jù)其作用底物的不同，MMPs主要分為膠原酶（MMP-1、MMP-8、MMP-13），基質(zhì)溶解素（MMP-3、MMP-7、MMP-10、MMP-11），明膠酶（MMP-2、MMP-9）等5大亞型。研究證實，炎性因子介導(dǎo)RA-FLS的MMPs表達中涉及MAPK通路的活化[15]，TNF-α和IL-1β可通過活化轉(zhuǎn)錄激活因子-1（transcription activator-1，AP-1），使MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13高表達；同時MMPs基因啟動子區(qū)均含有NF-κB的結(jié)合位點，所以NF-κB也參與了RA中MMPs的表達[16]，轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）活化其受體可使其下游分子Smads復(fù)合物入核而結(jié)合MMP-1、MMP-3、MMP-13的啟動子區(qū)來調(diào)控轉(zhuǎn)錄；此外，基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）作為MMPs的抑制物也能改變MMPs的分泌[17]。所以下調(diào)MMPs水平是用于治療RA的合理靶標(biāo)。由于MMP-1和MMP-3在骨破壞中起到更為重要的作用，它們也是實驗研究中的關(guān)鍵。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在IL-1β刺激RA-FLS后，金合歡素可以通過抑制p38、c-Jun氨基端激酶，影響NF-κB活動來降低MMP-1、MMP-3和MMP-13的基因和蛋白表達，從而達到預(yù)防關(guān)節(jié)破壞的目的[18]。

3 MicroRNAs對RA-FLS的影響

miRNA在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用，能調(diào)控多種免疫過程，包括粒細胞發(fā)育、T和B細胞的成熟分化、抗原遞呈過程以及細胞因子的產(chǎn)生等[19]。實驗表明，miRNA在RA滑膜組織中表達異常，可通過影響炎性細胞因子進而造成或加重FLS病變。目前研究最多的miR-146a已被證實在RA發(fā)展過程中能激活先天免疫應(yīng)答系統(tǒng)，并有效抑制破骨細胞形成[20]，成為當(dāng)前研究RA中最關(guān)鍵的miRNA。此外還有很多miRNA也被證明在RA的進程中能起到十分重要的作用[21]，例如miR-155、miR-132、miR-16和miR-146a有類似功能，能調(diào)節(jié)TNF-α的產(chǎn)生；miR-203可通過活化MMPs，加重關(guān)節(jié)的損壞，與其相反，miR-155則能抑制MMPs的產(chǎn)生，兩者之間相互拮抗；miR-124a可阻礙周期蛋白依賴性激酶2（cyclin dependent kinase 2，CDK2）和單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1，MCP-1）的產(chǎn)生并抑制RA-FLS的增殖，有望未來成為治療RA的新靶點；miR-346通過間接調(diào)控IL-18的產(chǎn)生，減少對FLS的刺激。越來越多的miRNA表達改變與RA-FLS的異常增生密切相關(guān)，其必將成為以后RA科研的主攻方向之一。

4 誘導(dǎo)RA-FLS凋亡

鑒于FLS在RA發(fā)病發(fā)展過程中所起到的關(guān)鍵作用，誘導(dǎo)RA-FLS凋亡則成為治療RA的一個有效策略，且在實驗及臨床中都得到了驗證。細胞凋亡主要有2個途徑：外源性途徑通過配體結(jié)合細胞死亡的受體觸發(fā)細胞凋亡；而另一條則是由遺傳物質(zhì)引發(fā)的內(nèi)在線粒體途徑。目前國內(nèi)外鑒于如何誘導(dǎo)細胞凋亡也有許多文獻報道。有學(xué)者觀察運用丹參酮ⅡA誘導(dǎo)RA-FLS凋亡，實驗結(jié)果顯示，Bcl-2表達水平明顯下降，線粒體細胞色素C、半胱天冬酶原-3和半胱天冬酶原-9表達顯著上升；同時凋亡酶激活因子-1、胞漿細胞色素C、半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9水平表達的改變可證明丹參酮ⅡA誘導(dǎo)RA-FLS凋亡；并在流式細胞儀下檢測藥物干預(yù)RA-FLS在細胞周期G2/M期發(fā)生凋亡[22]。Lattuada等[23]運用抗腫瘤藥物Smac066作用于RA-FLS 18 h后，細胞凋亡抑制蛋白1，2（CIAP1，2）和X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）顯著下調(diào)，進而證實Smac066通過抑制激活蛋白酶途徑有效地誘導(dǎo)RA-FLS凋亡。此外，許多藥物同樣被證明可有效干預(yù)RA-FLS細胞的凋亡，進而達到治療RA的效果。

5 討 論

鑒于RA-FLS在RA發(fā)病過程中所起的重要作用，抑制RA-FLS增殖并誘導(dǎo)其凋亡已經(jīng)成為目前防治RA的主要研究方面。本文主要通過闡釋炎性因子、MMPs、Micro-RNA與RA-FLS之間的關(guān)系及相互影響，并介紹如何誘導(dǎo)RA-FLS凋亡這4個方面對目前的研究成果進行總結(jié)分析，從這些機制理論出發(fā)，通過抑制RA-FLS的侵襲，為臨床帶來了更多治療手段?？筎NF-α、抗IL-1、抗IL-6等療法可有效抑制RA-FLS的增殖，在臨床上已被證明[24]。但部分患者經(jīng)治療后并無明顯癥狀改善，同時還有增加感染及癌癥風(fēng)險的可能性[25]。炎性因子和RA-FLS能促使MMPs分泌，所以通過調(diào)控RA-FLS的增殖合并MMPs抑制劑的使用，將MMPs水平控制在合適的范圍內(nèi)，能減緩關(guān)節(jié)破壞程度。miRNA在RA-FLS病變中所起的作用越來越得到重視，部分miRNA的作用機制已得到初步闡明，但miRNA對靶基因的調(diào)節(jié)是一個復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)體系，仍需大量科研人員的不懈努力[26]，相信未來可作為調(diào)控RA-FLS的主攻方向。誘導(dǎo)RA-FLS凋亡是目前治療RA的關(guān)鍵指標(biāo)之一，誘導(dǎo)細胞早期凋亡可改善RA病程的進展，目前誘導(dǎo)細胞凋亡的方法和藥物有很多，但具體機制有些仍不清楚。

總之，影響RA-FLS的因素還有很多。在未來的研究中，可以通過調(diào)控與RA-FLS相關(guān)因素的水平來改變RA-FLS對關(guān)節(jié)的侵襲，從而盡可能找到根治RA的手段，目前對于RA-FLS的研究仍任重而道遠。

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收稿日期：2015-04-23；修回日期：2015-07-06