韋尼 薛智豐 陳自佳 史云暉 朱躍蘭

【摘 要】目的：觀察補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中、低劑量對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠血清白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平以及關(guān)節(jié)軟骨含水率的影響。方法：將60只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中、低劑量組，美洛昔康組，每組10只。除空白對(duì)照組外，其余各組均予膝關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶造模，并予藥物干預(yù)后，用ELISA法測(cè)定大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，同時(shí)光鏡下觀察關(guān)節(jié)軟骨并檢測(cè)軟骨含水率。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，根據(jù)病理組織學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)模型對(duì)照組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨退行性改變明顯。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及關(guān)節(jié)軟骨含水率均升高（P < 0.05）。與模型對(duì)照組比較，補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組與美洛昔康組膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均降低（P < 0.05），且補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組關(guān)節(jié)軟骨含水率亦較模型對(duì)照組降低（P < 0.05），而補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組僅IL-1β、TNF-α水平低于模型對(duì)照組（P < 0.05）。與補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組及美洛昔康組比較，補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高劑量組膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-6水平及關(guān)節(jié)軟骨含水率均降低（P < 0.05），補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒中劑量組僅關(guān)節(jié)軟骨含水率降低（P < 0.05）。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及關(guān)節(jié)軟骨含水率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。結(jié)論：補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒可能通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型血清細(xì)胞因子水平及降低關(guān)節(jié)軟骨含水率達(dá)到治療作用，尤以中、高劑量組作用顯著。

【關(guān)鍵詞】 骨關(guān)節(jié)炎，膝；補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒；大鼠；細(xì)胞因子；軟骨含水率

doi：10.3969/j.issn.2095-4174.2015.10.001

【ABSTRACT】Objective：To investigate the effect of Bushen Tongluo Granule （補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒） on the levels of IL-1β，IL-6 and TNF-α and water ratio of articular cartilage in rats with knee osteoarthritis.Methods：60 rats were randomly divided into a blank control group，a model control group，a high-dose Bushen Tongluo Granule group （HBTGG），a medium-dose Bushen Tongluo Granule group （MBTGG），a low-dose Bushen Tongluo Granule group （LBTGG），and a meloxicam group，10 rats in each group.Except for the blank control group，the other groups were modeled by injecting papain into joint cavity.After medicinal intervention，ELISA was used to measure the levels of IL-1β，IL-6 and TNF-α.At the same time，articular cartilage was observed and its water ratio was measured.Results：After experiment，the knee joint cartilage degeneration was obvious in the model group.

Compared with the blank control group，the levels of IL-1β，IL-6 and TNF-α and the water ratio of articular cartilage in the model group increased （P < 0.05）.Compared with the model control group，the levels of IL-1β，IL-6 and TNF-α in the HBTGG，MBTGG and the meloxicam group decreased （P < 0.05） and the water ratios of articular cartilage in the HBTGG and MBTGG were lower than those of the model control group （P < 0.05），and the levels of IL-1βand TNF-α in the LBTGG were lower than those of the model control group （P < 0.05）.Compared with the LBTGG and the meloxicam group，the level of IL-6 and the water ratio of articular cartilage of the HBTGG decreased significantly （P < 0.05） and the water ratio of articular cartilage of the MBTGG were lower （P < 0.05）.The differences of levels of IL-1，IL-6，TNF-α，and the water ratio of the articular cartilage between the HBTGG and MBTGG were not statistically significant （P > 0.05）.Conclusion：Bushen Tongluo Granule may treat knee osteoarthritis by regulating levels of serum cytokines and reducing water ratio of the articular cartilage，especially in the middle and high dose groups.

【Keywords】ostoarthritis，knee；Bushen Tongluo Granule（補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒）；rat；cytokine；water ratio of the articular cartilage

膝骨關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis，KOA）是一種以膝關(guān)節(jié)軟骨退變和關(guān)節(jié)周圍形成骨質(zhì)增生為病理特征的關(guān)節(jié)炎，是最常見的一種慢性、進(jìn)行性、致殘性關(guān)節(jié)疾病。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，我國(guó)KOA患病率在60歲以上人群可達(dá)50%，而75歲以上人群則高達(dá)80%[1-2]。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于KOA的治療仍以口服非甾體類抗炎藥，或關(guān)節(jié)腔注射透明質(zhì)酸、激素，或關(guān)節(jié)鏡、人工關(guān)節(jié)置換術(shù)等方式為主，雖具有一定的療效，但不良反應(yīng)較多，且花費(fèi)高，均限制了在臨床的長(zhǎng)期運(yùn)用。本病屬中醫(yī)學(xué)“骨痹”范疇，腎虛精虧瘀血阻絡(luò)為其主要的病機(jī)，治療上多以補(bǔ)腎通絡(luò)為原則。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒是本科室治療KOA經(jīng)驗(yàn)方，作為院內(nèi)制劑在臨床運(yùn)用多年，其療效明確，能改善關(guān)節(jié)癥狀并延緩病情進(jìn)展，且無(wú)明顯不良反應(yīng)，價(jià)格低廉，適合長(zhǎng)期使用。本實(shí)驗(yàn)以不同劑量補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒干預(yù)KOA大鼠動(dòng)物模型，觀測(cè)不同劑量補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒對(duì)KOA大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及關(guān)節(jié)軟骨含水率的影響，探討其治療KOA的作用機(jī)理，為臨床更好地運(yùn)用奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康Wistar大鼠60只，10周齡，體質(zhì)量（180±20） g，雌雄各半，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（京）2006-0009。以上大鼠飼養(yǎng)地點(diǎn)為北京中醫(yī)藥大學(xué)屏障級(jí)動(dòng)物房，許可證號(hào)：SYXK（京）2011-0024，飼養(yǎng)環(huán)境恒溫、恒濕，所有大鼠均自由進(jìn)食及水瓶給水。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 木瓜蛋白酶（批號(hào)BRS009128），由MERCK公司提供；大鼠IL-1β（批號(hào)900-K86）、IL-6（批號(hào)900-M86）、TNF-α（批號(hào)900-M73）試劑盒，均由北京欣博盛生物科技有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥品 補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒，由本院中草藥房提供，每劑含生藥98 g；美洛昔康片（國(guó)藥準(zhǔn)字H20030679）每片7.5 mg，由江蘇飛馬藥業(yè)提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 JD5000 1S電子天平（沈陽(yáng)神宇龍騰天平有限公司）；Labofuge 400R離心機(jī)（Hearaeus公司）；MR-96A酶標(biāo)儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；LIBROR AEG-220G分析天平（日本SHIMADZU公司）；SL 101FAB-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海樹立儀器儀表有限公司）；KL-I型組織自動(dòng)脫水機(jī)（湖北康龍電子科技有限責(zé)任公司）；KH-BL生物組織包埋機(jī)（湖北孝感闊海醫(yī)療科技有限責(zé)任公司）；AD202-A輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（上海珂淮儀器有限公司）；BX60光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）。

2 方 法

2.1 動(dòng)物分組 采用隨機(jī)數(shù)表法，將60只Wistar大鼠分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中、低劑量組，美洛昔康組，每組10只，雌雄各半。

2.2 造模方法 參照文獻(xiàn)[3-4]，選用已經(jīng)廣泛報(bào)道且被反復(fù)證實(shí)的KOA動(dòng)物模型經(jīng)典造模方式：關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶。除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)第1，4，7天膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%木瓜蛋白酶生理鹽水溶液各0.2 mL。

2.3 給藥方法 采用灌胃給藥法，用蒸餾水配置藥物混懸液，連續(xù)給藥4周。以60 kg成人為標(biāo)準(zhǔn)，參照人和動(dòng)物間體表面積折算的等效劑量比率表?yè)Q算，補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中、低劑量組按20.58，10.29，5.15 g·kg-1給予補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒，美洛昔康組按0.787 5 mg·kg-1給予美洛昔康，空白對(duì)照組及模型對(duì)照組大鼠每日予蒸餾水灌胃。

2.4 觀測(cè)指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 細(xì)胞因子檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用10%水合氯醛（3 mL·kg-1）腹腔注射麻醉，麻醉成功后，從實(shí)驗(yàn)大鼠腹主動(dòng)脈取血后處死大鼠。將取出的血常溫下靜置1 h后，用3000 r·min-1離心機(jī)離心10 min，離心后取上清液作為檢測(cè)標(biāo)本。采用ELISA法，按照大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α試劑盒說(shuō)明書操作，測(cè)定IL-1β、IL-6、TNF-α的OD值，并計(jì)算含量。

2.4.2 軟骨含水率檢測(cè) 采用分析天平，先稱取軟骨濕重，后將其置于鼓風(fēng)加熱機(jī)中，60 ℃加熱12 h，再稱取干重。含水率按以下公式計(jì)算：含水率=[（濕重-干重）/濕重]×100%。

2.4.3 病理組織學(xué)檢測(cè) 采用HE染色法觀察KOA大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨退變程度。打開關(guān)節(jié)腔后，盡快切取內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)中央條狀關(guān)節(jié)面軟骨片，按以下步驟進(jìn)行：①常規(guī)脫蠟后用蒸餾水沖洗，并移入蘇木精染液10～15 min；②用1%鹽酸酒精分色后，鏡下控制，至細(xì)胞核及核內(nèi)染色質(zhì)清晰為止；③流水沖洗并在碳酸鋰飽和液中反藍(lán)后移入0.5%伊紅染液約5 min；④逐級(jí)經(jīng)80%、90%、95%、100%各種濃度乙醇脫水；⑤石蠟包埋，切片機(jī)切片，中性樹膠封片，光鏡下觀察關(guān)節(jié)軟骨厚度、軟骨面情況、軟骨細(xì)胞數(shù)量等。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，方差齊則用LSD檢驗(yàn)，方差不齊則用Games-Howell檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 大鼠KOA組織病理學(xué) 空白對(duì)照組軟骨表面較為光滑，細(xì)胞排列規(guī)律且整齊，間質(zhì)均勻。模型對(duì)照組可見糜爛的軟骨面，細(xì)胞排列雜亂無(wú)規(guī)則，存在間質(zhì)纖維化。美洛昔康組軟骨面粗糙，軟骨細(xì)胞排列紊亂，間質(zhì)變性。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高劑量組軟骨面尚光滑，軟骨細(xì)胞排列不整，間質(zhì)纖維化。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒中劑量組可見粗糙的軟骨面，細(xì)胞排列雜亂無(wú)規(guī)則，有反應(yīng)性增生，存在間質(zhì)纖維化。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組軟骨變薄，細(xì)胞數(shù)量少，排列雜亂無(wú)規(guī)則，間質(zhì)纖維化。見圖1。

3.2 各組大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組KOA大鼠血清3種細(xì)胞因子水平均升高（P < 0.05）。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組與美洛昔康組KOA大鼠血清3種細(xì)胞因子水平均低于模型對(duì)照組（P < 0.05），而補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組僅IL-1β、TNF-α水平低于模型對(duì)照組（P < 0.05）。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高劑量組KOA大鼠血清IL-6水平低于補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組及美洛昔康組（P < 0.05），而補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒中、高劑量組KOA大鼠血清3種細(xì)胞因子水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

3.3 各大鼠關(guān)節(jié)軟骨含水率比較 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組KOA大鼠關(guān)節(jié)軟骨含水率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。與模型對(duì)照組、美洛昔康組、補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組比較，補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組KOA大鼠關(guān)節(jié)軟骨含水率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組KOA大鼠關(guān)節(jié)軟骨含水率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

4 討 論

目前用于大鼠誘導(dǎo)KOA的方式主要包括手術(shù)法及化學(xué)藥物注射法[5]，其中膝關(guān)節(jié)腔注射藥物被譽(yù)為建立KOA動(dòng)物模型的經(jīng)典方法，而木瓜蛋白酶是較為常用藥物之一。已有研究表明，關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶的造模方式成功率高、成型時(shí)間短[6]、重復(fù)性好，且具有與人類骨關(guān)節(jié)炎類似的特點(diǎn)[7]。早在20世紀(jì)70年代，國(guó)外學(xué)者就通過(guò)關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶的方式成功建立了兔髖關(guān)節(jié)退行性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。因此，在本項(xiàng)研究中，筆者也采用關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶的方法建立大鼠KOA動(dòng)物模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后病理檢查發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨可見糜爛等KOA病理表現(xiàn)，也印證了膝關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶的方法可建立穩(wěn)定的大鼠KOA動(dòng)物模型。

在已知的細(xì)胞因子中，IL-1β、IL-6、TNF-α是參與骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病進(jìn)程中的重要介質(zhì)，是調(diào)節(jié)炎癥的始動(dòng)因素[8]。有研究顯示，IL-1β可以與關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞上相應(yīng)受體結(jié)合，形成特殊的激素-受體復(fù)合物，通過(guò)cAMP、GTP等第二信使傳達(dá)被改變的信息，影響關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的正常代謝活動(dòng)。不少學(xué)者通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)IL-1β與軟骨周圍骨贅的形成密切相關(guān)[9]。IL-1β還影響與骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病相關(guān)的細(xì)胞因子水平[10]，如有影響IL-1β可促進(jìn)軟骨細(xì)胞分泌前列腺素E2（PGE2），PGE2在關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)、成骨細(xì)胞樣細(xì)胞增殖方面具有一定的作用。軟骨的損傷與軟骨糖蛋白的合成受到抑制，成纖維細(xì)胞合成增強(qiáng)有關(guān)，而這一過(guò)程IL-1β可通過(guò)介導(dǎo)IL-6而完成[11]。TNF-α既協(xié)同IL-1的作用，又可激活I(lǐng)L-6基因、誘導(dǎo)IL-6的生成，在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展中有可能起著決定性作用[12]。KOA的主要病理改變是關(guān)節(jié)軟骨受到破壞，關(guān)節(jié)表面失去均質(zhì)性，如發(fā)生中斷、斑片凹陷、斷裂，使軟骨的可壓縮性和彈性喪失[13]。研究表明，隨著KOA在一定程度上的加重，關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)含水量逐漸增加，如陳孟交等[14]認(rèn)為，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨含水量增加的原因可能與關(guān)節(jié)軟骨蛋白多糖分解，使軟骨內(nèi)滲透壓增高，從而導(dǎo)致水進(jìn)入軟骨內(nèi)有關(guān)。也有學(xué)者認(rèn)為，軟骨內(nèi)含水量增多可能與大量高能嗜水性糖蛋白分子團(tuán)難以通過(guò)膠原纖維網(wǎng)架，使網(wǎng)架局限性遭到破損，帶負(fù)電荷離子暴露增多有關(guān)[15]。

補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒是針對(duì)骨關(guān)節(jié)炎本虛標(biāo)實(shí)的特點(diǎn)，以補(bǔ)腎治本為主，又兼顧其瘀血阻絡(luò)的標(biāo)象。全方主要由補(bǔ)骨脂、川牛膝、桑寄生、骨碎補(bǔ)、白芍等藥物組成，中藥藥理學(xué)認(rèn)為，上述藥物不僅可提高超氧化物歧化酶（SOD）的活性，而且還可在一定程度上降低血清過(guò)氧化脂質(zhì)的水平，進(jìn)而可以保護(hù)生物膜，以達(dá)到改善軟骨細(xì)胞功能，推遲細(xì)胞退行性變的目的，同時(shí)還對(duì)關(guān)節(jié)急性滲出性和增生性滑膜炎有一定的抑制作用。如補(bǔ)骨脂所含的補(bǔ)骨脂甲素、乙素、補(bǔ)骨脂定、補(bǔ)骨脂異黃酮等均有抗氧化作用，其中補(bǔ)骨脂甲素、乙素還能有效地清除氧自由基[16]。尚平等[17]則觀察到骨碎補(bǔ)有顯著的抗炎作用，而且止痛效果顯著。而白芍有效成分白芍總苷能有效改善膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化，并抑制其過(guò)度增殖反應(yīng)和產(chǎn)生IL-1、干擾素和PGE2水平，從而對(duì)滲出性關(guān)節(jié)炎及滑膜炎均有一定的抑制作用[18]。

對(duì)于KOA的發(fā)病機(jī)制，目前研究認(rèn)為除與軟骨合成和分解代謝失調(diào)、機(jī)械磨損等因素有關(guān)外，滑膜炎已被公認(rèn)為是KOA常見的重要特征之一[19]，其不僅是關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的破壞者，同時(shí)還可促進(jìn)KOA的病情進(jìn)展[20-21]。目前研究認(rèn)為，在KOA發(fā)病早期，關(guān)節(jié)軟骨退變尚不明顯時(shí)，膝關(guān)節(jié)就已經(jīng)存在不同程度的滑膜炎。究其原因，國(guó)內(nèi)外大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為KOA的軟骨病變可產(chǎn)生細(xì)小的碎軟骨片，此類碎片落入滑液可激活滑膜內(nèi)襯細(xì)胞，從而導(dǎo)致滑膜炎的出現(xiàn)。還有學(xué)者認(rèn)為堿性磷酸鈣或雙水焦磷酸鈣等晶體誘發(fā)的輕度炎癥反應(yīng)也是引起滑膜炎的潛在因素[22]。鑒于此，不少學(xué)者認(rèn)為非甾體類抗炎藥在KOA治療中亦具有重要的作用。本項(xiàng)研究中，筆者選取美洛昔康作為西藥對(duì)照藥物，因其不僅具有較好的消炎止痛作用，且其屬選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑，臨床不良反應(yīng)較其他非甾體類抗炎藥少。同時(shí)還有研究表明，美洛昔康對(duì)軟骨基質(zhì)蛋白聚糖的合成無(wú)不良影響，國(guó)內(nèi)外已有眾多臨床使用美洛昔康治療KOA的報(bào)道[23]。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，與模型對(duì)照組比較，補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中、低劑量組均可不同程度地降低大鼠KOA動(dòng)物模型血清IL-1β、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子水平，其中補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組對(duì)大鼠KOA動(dòng)物模型血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均有降低作用（P < 0.05），而補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組僅能降低大鼠KOA動(dòng)物模型血清IL-1β、TNF-α水平（P < 0.05）。結(jié)合補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量組還能降低大鼠KOA動(dòng)物模型關(guān)節(jié)軟骨含水率（P < 0.05），而補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒低劑量組則無(wú)此作用，提示補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒可能通過(guò)有效抑制炎癥反應(yīng)過(guò)程中相關(guān)炎性因子的釋放及有效降低關(guān)節(jié)軟骨含水率對(duì)大鼠KOA動(dòng)物模型的治療作用。而就不同劑量的補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒在降低大鼠KOA動(dòng)物模型血清IL-1β、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子水平及關(guān)節(jié)軟骨含水率方面具有一定的劑量依賴關(guān)系，即補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量?jī)?yōu)于低劑量，而在本項(xiàng)研究中，尚未發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量之間的療效差異，可能與本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物模型數(shù)量偏少以及治療周期較短有關(guān)，故補(bǔ)腎通絡(luò)顆粒高、中劑量之間是否存在療效差異有待于今后進(jìn)一步研究。

5 參考文獻(xiàn)

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì).骨關(guān)節(jié)炎診斷及治療指南[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14（6）：416-419.

[2] 中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì).骨性關(guān)節(jié)炎[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2013，2（2）：71-72.

[3] 韓冠英，凌沛學(xué)，王鳳山，等.不同濃度木瓜蛋白酶建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型的比較研究[J].中國(guó)骨傷，2012，25（5）：424-429.

[4] 馬玉峰，祁印澤，王慶甫，等.關(guān)節(jié)內(nèi)注射藥物建立骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J].中國(guó)骨傷，2015，28（1）：90-95.

[5] 張立，王培民.膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的選擇[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，9（7）：782-786.

[6] 楊峰，史宗道.用木瓜蛋白酶建立兔顳頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型的研究[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，2002，20（5）：330-332.

[7] Aigner T，Cook JL，Gerwin N，et al.Histopathology atlas of animal model systems-overview of guidingprinciples[J].Osteoarthritis Cartilage，2010，18（Suppl 3）：S2-6.

[8] 吳飛翔，張偉.白細(xì)胞介素在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究進(jìn)展[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2014，8（5）：975-978.

[9] 黃金剛，童海駿，劉宏強(qiáng)，等.IL-1β和TNF-α對(duì)軟骨細(xì)胞基質(zhì)降解的影響及相關(guān)機(jī)制研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，30（9）：1084-1089.

[10] 張建清.膝關(guān)節(jié)炎患者膝關(guān)節(jié)滑液中白細(xì)胞介素-1β白細(xì)胞介素-6含量變化的意義[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2011，18（2）：127-128.

[11] 羅玉明，鄭維篷，魏合偉.骨關(guān)節(jié)炎與細(xì)胞因子TNF-α、IL-6關(guān)系的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代診斷與治療，2013，24（2）：326-327.

[12] Yuan PW，Liu DY，Chu XD，et al.Effects of preventive administration of juanbi capsules on TNF-alpha、IL-1 And IL-6 contents of joint fluid in the rabbit with knee osteoarthritis[J].J Tradit Chin Med，2010，30（4）：254-258.

[13] 倪明，黃文偉.復(fù)方南星止痛膏治療寒濕痹阻型膝骨性關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證候積分研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（9）：33-35.

[14] 陳孟交，王桂蒙，肖四旺，等.丹紫康膝沖劑對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨含水率及羥脯氨酸影響的研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（1）：20-22.

[15] 錢善華，葛世榮.含水率對(duì)自然關(guān)節(jié)軟骨壓縮變形的影響[J].航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程，2010，23（2）：43-45.

[16] Guo JN，Weng XC，Wu H，et al.Antioxidants from a Chinese medicinal herb-Psoralea corylifolia L[J].Food Chenistry，2005，91（2）：287-292.

[17] 尚平，賀憲，安耀武，等.骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)骨關(guān)節(jié)炎家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨定向分化的實(shí)驗(yàn)研究[J].生物骨科材料與臨床研究，2009，6（6）：10-13.

[18] 張利.白芍的藥理作用及現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].中醫(yī)臨床研究，2014，6（29）：25-26.

[19] 楊勐航，戴生明.滑膜炎在骨關(guān)節(jié)炎病情進(jìn)展中的意義[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14（7）：493-495.

[20] 呂厚山，孫鐵鋒，劉忠厚.骨關(guān)節(jié)炎的診治與研究進(jìn)展[J].中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2004，10（1）：7-22，60.

[21] 李兆福，彭江云，肖長(zhǎng)虹，等.骨痹（骨關(guān)節(jié)炎）診療方案臨床驗(yàn)證總結(jié)[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2012，1（1）：16-21.

[22] Pritzker KP.Crystal deposition in joints：prevalence and relevance for arthritis[J].J Rheumatol，2008，35（6）：958-959.

[23] 楊素平，陳銳.美洛昔康治療骨關(guān)節(jié)炎的臨床療效[J].中國(guó)臨床藥學(xué)雜志，2004，13（1）：37-38.

收稿日期：2015-05-21；修回日期：2015-08-05