周翠蘭　曾曉燕　姚遠(yuǎn)忠

【摘要】目的：建立康腎顆粒中茜草的薄層色譜定性鑒別方法，為將茜草鑒別納入其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：采用薄層色譜法對康腎顆粒中茜草進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：在薄層色譜中，供試品溶液在與對照藥材及對照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。結(jié)論：本薄層色譜鑒別方法驗證結(jié)果較好，專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性、耐用性好，可用于康腎顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】康腎顆粒；茜草；薄層鑒別

【中圖分類號】R2860【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2015）03-0030-02

康腎顆粒具有補(bǔ)脾益腎，化濕降濁的功效，臨床用于脾腎兩虛所致的水腫、頭痛而暈、惡心嘔吐、畏寒肢倦、輕度尿毒癥。該藥源于彝族民間驗方，臨床使用多年，療效好，很受廣大患者的歡迎。該品種收載于國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科腎系分冊，處方由連錢草、忍冬藤、石韋、茜草等12味藥材組成。其中茜草為臣藥，具有涼血、止血、祛痰、通經(jīng)等功效[1]，是傳統(tǒng)的止血藥，與方中諸藥配伍可活血祛邪，又可應(yīng)于止血生津、調(diào)通氣路、改善尿毒癥癥狀。康腎顆?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只做了5味藥材的鑒別，不含茜草鑒別。為了提高中成藥質(zhì)量控制水平、提高藥品標(biāo)準(zhǔn)、確保產(chǎn)品質(zhì)量，本實驗參照《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則》[2]及相關(guān)文獻(xiàn)[3]，采用薄層色譜鑒別方法對處方中的茜草進(jìn)行了定性鑒別。

1儀器與材料

11儀器ZF-1紫外分光儀（上海精科實業(yè)有限公司）；SB-5200D 超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；電子天平（廣州市授科儀器科技有限公司）。

12試藥與材料大葉茜草素對照品（批號：121049-201003）、茜草對照藥材（批號：110884-200604）購自中國藥品生物制品檢定所；康腎顆粒（批號：20140603、20140604、20140605、20140606，廣州一品紅制藥有限公司）；硅膠G板：青島海洋化工廠、德國默克公司生產(chǎn)；所用試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

21供試品溶液的制備取康腎顆粒12g，研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加水20ml、鹽酸2ml，加熱20min，放冷，用乙酸乙酯20ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，揮干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。

22陰性對照溶液的制備按處方比例稱取除茜草之外的其它藥材，照康腎顆粒的制備工藝制成缺茜草空白顆粒，取缺茜草空白顆粒12g，照上述供試品溶液的制備方法同法制備成陰性對照溶液。

23對照藥材溶液的制備取茜草對照藥材05g，照上述供試品溶液的制備方法同法處理，作為對照藥材溶液。

24對照品溶液的配制取大葉茜草素對照品，加甲醇制成每1ml含05mg的溶液，作為對照品溶液。

25TLC鑒別照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗[2]，吸取對照品、對照藥材溶液各2μl，陰性對照溶液、供試品溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（10∶2∶1∶05）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。

26方法驗證

261專屬性照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，采用缺茜草陰性對照、對照品、對照藥材進(jìn)行實驗，結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾，本法專屬性較好。

262靈敏度照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，比較供試品不同點樣量（1、2、5、10、15、20μl）對斑點的影響。結(jié)果隨著點樣量的增加，斑點的清晰度增加，點樣1μl也能檢出，但斑點非常模糊，點樣5μl以上斑點明顯，點樣到20μl薄層板有點超載，但斑點未拖尾，結(jié)果表明本方法靈敏度較好，點樣量可以選擇5～10μl。實驗選擇的是普通薄層板，使用高效板可減少點樣量。

263重現(xiàn)性照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，同時點樣三個批號（批號：20140603、20140604、20140605）的樣品，結(jié)果三批供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾，本法重現(xiàn)性較好。

264耐用性

2641不同廠家的薄層板考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，采用兩個不同廠家的硅膠G薄層板及自制板進(jìn)行點樣，結(jié)果顯示不同廠家的薄層板Rf值有所差異，但不影響薄層鑒別。

2642不同相對濕度考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，平行點樣四個薄層板，分別在RH18%、RH42%、RH65%、RH88%四個相對濕度條件下展開，比較TLC圖譜的差異，結(jié)果RH18%～88%范圍內(nèi)檢視結(jié)果良好，故常規(guī)實驗室條件下相對濕度對此鑒別試驗沒有影響。

2643不同溫度的考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，平行點樣三個薄層板，分別在5、25、35℃三個溫度條件下展開，比較TLC圖譜的差異，結(jié)果顯示環(huán)境溫度5～35℃不影響本品薄層鑒別。

2644檢視時間的考察文獻(xiàn)報道[4]，甲醇溶液中大葉茜草素在光照條件下含量明顯下降，因此在薄層板展開晾干之后，在實驗室常規(guī)光照環(huán)境下，在0min、30min、1h、2h四個不同時間點觀察了熒光強(qiáng)度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著時間的變化，大葉茜草素的熒光強(qiáng)度下降，斑點顏色變淡，展開晾干后2h對照品斑點顏色明顯變淡，供試品已經(jīng)觀察不到斑點。故建議樣品配制后置于棕色試劑瓶中避光保存，薄層板晾干之后即刻觀察。

27結(jié)果供試品色譜中，在與對照品和對照藥材相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的熒光斑點，色譜圖見圖1。

3討論

康腎顆粒處方由12味中藥組成，組分復(fù)雜，影響鑒別的干擾因素較多，樣品的處理方法非常重要。試驗甲醇提取、乙酸乙酯提取多種方法，最后確定采用甲醇提取，再乙酸乙酯萃取。采用茜草對照藥材、大葉茜草素對照品作為對照，對不同展開劑進(jìn)行了篩選：（1）石油醚-丙酮（5∶1）；（2）乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（10∶28∶1∶05）；（3）二氯甲烷-乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（20∶10∶8∶1∶05）。結(jié)果展開劑（2）操作方便，斑點分離清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。

研究結(jié)果表明，所建立的薄層色譜鑒別方法對康腎顆粒中茜草的定性鑒別專屬性強(qiáng)，提取方法和展開效果良好，方法靈敏度高，重現(xiàn)性、耐用性均達(dá)到鑒別檢驗要求，可較好地用于康腎顆粒的質(zhì)量控制。本法也可用于原藥材的鑒別檢驗，具有良好的通用性。

參考文獻(xiàn)

[1]楊連榮.茜草的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥信息，2007，24（1）：21-23.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄130-131.

[3]歐陽榮.肝達(dá)康片中茜草的薄層色譜鑒別方法探討[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2001，8（10）：38.

[4]劉廣.大葉茜草素在甲醇溶液中的穩(wěn)定性研究[J].華西藥學(xué)雜志，2010，25（3）：318-320.

（收稿日期：20141028）