SLeX和CK19表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

尚培中1，柳勇1，張星光2，張進(jìn)權(quán)3，南潤(rùn)玲1，谷化平1

(1.中國(guó)人民解放軍第251醫(yī)院普通外科，河北 張家口 075000；2.中國(guó)人民解放軍北京軍區(qū)總醫(yī)院內(nèi)分泌科，北京 100700；3.河北省蔚縣人民醫(yī)院外科，河北 蔚縣 075700)

摘要：目的探討SLeX和CK19蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其與癌組織浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化染色EliVisionTM plus兩步法檢測(cè)127例甲狀腺乳頭狀癌組織和30例癌旁甲狀腺組織中SLeX和CK19蛋白的表達(dá)狀況。結(jié)果甲狀腺乳頭狀癌組織SLeX和CK19總體陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.1%和96.1%，顯著高于癌旁甲狀腺組織(P<0.05)；存在浸潤(rùn)和伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，SLeX和CK19陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)浸潤(rùn)和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；SLeX與CK19表達(dá)具有一定正相關(guān)性(r=0.30)。結(jié)論SLeX和CK19在甲狀腺乳頭狀癌組織中多數(shù)呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，兩者與癌組織浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：甲狀腺腫瘤；SLeX；CK19；轉(zhuǎn)移

中圖分類號(hào)：R 736.1

基金項(xiàng)目：河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究青年

作者簡(jiǎn)介：杜華陽(yáng)(1990-)，男，河北威縣人，河北北方學(xué)院影像學(xué)本科2012級(jí)學(xué)生。

Expressions of SLeX and CK19 in Papillary Thyroid Carcinoma

and Their Relationships with Invasion and Metastasis

SHANG Pei-zhong1，LIU Yong1，ZHANG Xing-guang2，et al

(1.Department of General Surgery，the 251st Hospital of Chinese PLA，Zhangjiakou 075000，Hebei China；

2.Department of Endocrinology，the Military General Hospital of Beijing PLA，Beijing 100700，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationships of SLeX and CK19 protein expressions with the potential of invasion and metastasis in papillary thyroid carcinoma. MethodsThe expression of SLeX and CK19 protein in 127 cases of papillary thyroid carcinoma and 30 cases of para-tumorous tissue were studied by EliVisionTM plus two-step immunohistochemical method.ResultsThe positive rates of SLeX and CK19 protein in papillary thyroid carcinoma were 70.1% and 96.1% respectively,both were significantly higher than that in para-tumorous tissue(P<0.05).The positive rates of SLeX and CK19 protein expression in the patients with tumor invasion and lymphatic metastasiswas were significantly higher than that without tumor invasion and lymphatic metastasis(P<0.05).There was a positive correlation between SLeX and CK19 protein expression(r=0.30).ConclusionThere is strong positive expression of SLeX and CK19 protein in papillary thyroid carcinoma.Both were closely correlated with the invasive and metastasic potential.

Key words:thyroid neoplasms；SLeX；CK19；metastasis

臨床病理學(xué)證實(shí)，甲狀腺乳頭狀癌早期即可發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，首次手術(shù)時(shí)大約60.5%的患者即已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。細(xì)胞黏附分子SLeX(sialyl Lewis X)屬Lewis血型決定簇Ⅱ型抗原，近年研究表明，它可通過(guò)配體分子介導(dǎo)與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附作用促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK19)是組成細(xì)胞骨架的蛋白質(zhì)之一，被認(rèn)為是鑒別甲狀腺良惡性病變重要的標(biāo)志物之一。我們采用免疫組化染色EliVisionTMplus兩步法檢測(cè)了127例甲狀腺乳頭狀癌組織SLeX和CK19的表達(dá)，探討它們與甲狀腺乳頭狀癌浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1資料與方法

1.1　一般資料

2009-03—2014-10月于中國(guó)人民解放軍第251醫(yī)院行手術(shù)治療的甲狀腺乳頭狀癌患者127例，其中男42例，女85例；年齡17～75歲，平均(38.5±12.1)歲。根據(jù)高頻彩超等影像學(xué)檢查、術(shù)中探查以及術(shù)后病理檢查等，綜合判定浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況。個(gè)體化選擇甲狀腺切除范圍，酌情施行選擇性頸淋巴結(jié)清除術(shù)或功能性頸淋巴結(jié)清除術(shù)。本組病例中，存在包膜、腺體外組織或血管浸潤(rùn)者77例，無(wú)浸潤(rùn)者50例。伴有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者72例，無(wú)轉(zhuǎn)移者55例。選取距離癌組織2 cm的同側(cè)或?qū)?cè)癌旁甲狀腺組織(取自上述甲狀腺乳頭狀癌患者)30例作對(duì)照。所有病例術(shù)前均未曾口服甲狀腺素片、131I等相關(guān)制劑治療。

1.2　方法

免疫組化染色采用EliVisionTMplus兩步法，按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。鼠抗人SLeX和CK19單克隆抗體、EliVision試劑盒和DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為10%甲醛固定24 h，石蠟包埋、4μm厚連續(xù)切片。以診斷明確的甲狀腺乳頭狀癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性，①按染色強(qiáng)度及顯色癌細(xì)胞比例分為-、+、++共3級(jí)，按有無(wú)細(xì)胞顯色及深淺程度評(píng)分:無(wú)顯色0分，棕黃色1分，棕褐色2分；②按顯色癌細(xì)胞所占比例記分:<30% 1分，31%～70% 2分，>71% 3分。每例腫瘤積分=①+②，按積分高低分：0分陰性(-)，1～3分弱陽(yáng)性(+)，4～6分強(qiáng)陽(yáng)性(++)。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　SLeX和CK19的表達(dá)

癌組織中SLeX總體陽(yáng)性表達(dá)率為70.1%(89/127)，其中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為37.8%(48/127)，弱陽(yáng)性表達(dá)率為32.3%(41/127)，陰性表達(dá)率為29.9%(38/127)；癌旁甲狀腺組織中SLeX總體陽(yáng)性表達(dá)率為6.7%(2/30)，其中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為0(0/30)，弱陽(yáng)性表達(dá)率為6.7%(2/30)，陰性表達(dá)率為93.3%(28/30)。癌組織與癌旁甲狀腺組織比較，總體陽(yáng)性表達(dá)率(χ2=40.048)、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率(χ2=16.332)、弱陽(yáng)性表達(dá)率(χ2=8.008)之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

癌組織中CK19總體陽(yáng)性表達(dá)率為96.1%(122/127)，其中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為79.5%(101/127)，弱陽(yáng)性表達(dá)率為16.5%(21/127)，陰性表達(dá)率為3.9%(5/127)；癌旁甲狀腺組織中CK19總體陽(yáng)性表達(dá)率為16.7%(5/30)，其中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為3.3%(1/30)，弱陽(yáng)性表達(dá)率為13.3%(4/30)，陰性表達(dá)率為83.3%(25/30)。癌組織與癌旁甲狀腺組織比較，總體陽(yáng)性表達(dá)率(χ2=98.969)、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率(χ2=61.902)之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而弱陽(yáng)性表達(dá)率(χ2=0.186)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2　SLeX和CK19蛋白表達(dá)與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

存在包膜、腺體外組織或血管浸潤(rùn)與無(wú)浸潤(rùn)的患者比較，SLeX陽(yáng)性表達(dá)率分別為84.4%(65/77)和48.0%(24/50)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.172，P<0.05)；CK19陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%(77/77)和90.0%(45/50)，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.016，P<0.05)。伴有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無(wú)轉(zhuǎn)移的患者比較，SLeX陽(yáng)性表達(dá)率分別為88.9%(64/72)和45.5%(25/55)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.054，P<0.05)；CK19陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%(72/72)和90.9%(50/55)，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.814，P<0.05)。

2.3　SLeX和CK19表達(dá)的相互關(guān)系

SLeX陽(yáng)性表達(dá)的89例中CK19均為陽(yáng)性表達(dá)(100%)，SLeX陰性表達(dá)的38例中CK19陽(yáng)性表達(dá)33例(86.8%)。甲狀腺乳頭狀癌組織中SLeX與CK19表達(dá)具有一定正相關(guān)性(r=0.30)。

3討論

甲狀腺乳頭狀癌是4種甲狀腺癌中最常見的臨床病理類型，其發(fā)病率近年來(lái)上升較快，約占甲狀腺癌的70%～80%以上。盡管大多數(shù)患者癌組織分化較好，病程較長(zhǎng)，但近年研究發(fā)現(xiàn)，不少患者癌組織仍具有較高的局部浸潤(rùn)性和區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率，在6組淋巴結(jié)中，中央組(Ⅵ區(qū))淋巴結(jié)是最常發(fā)生轉(zhuǎn)移的部位。因此，采用腫瘤標(biāo)志物研究甲狀腺乳頭狀癌組織及其轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)狀況，有助于加強(qiáng)對(duì)癌組織生物學(xué)特性，尤其是浸潤(rùn)能力和轉(zhuǎn)移潛能的判斷，對(duì)評(píng)估患者預(yù)后、隨訪中及時(shí)發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)、指導(dǎo)臨床施行再次手術(shù)等綜合治療具有一定意義。

由細(xì)胞表面的黏附分子所介導(dǎo)的細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，是惡性腫瘤形成、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的生物學(xué)基礎(chǔ)，越來(lái)越引起學(xué)界重視。作為一類細(xì)胞黏附分子，SLeX是常用的腫瘤標(biāo)志物單唾液酸神經(jīng)節(jié)糖苷脂CA19-9(sialyl Lewis A)的同分異構(gòu)體，主要由半乳糖(Gal)、巖藻糖(Fuc)、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GlcNAc)及N-乙酰神經(jīng)氨酸(NeuAc)5個(gè)分子組成。近年研究表明，SLeX與配體分子選擇素(selectin)結(jié)合，通過(guò)Lewis-Selectin轉(zhuǎn)移途徑，參與介導(dǎo)癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附作用，是癌細(xì)胞浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要途徑之一[3-4]。本研究結(jié)果表明，SLeX在甲狀腺乳頭狀癌組織中的總體陽(yáng)性表達(dá)率、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率和弱陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于癌旁甲狀腺組織，存在包膜、腺體外組織或血管浸潤(rùn)和伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于無(wú)浸潤(rùn)和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。表明SLeX與甲狀腺乳頭狀癌的惡性發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其高水平表達(dá)的癌腫浸潤(rùn)性強(qiáng)，轉(zhuǎn)移率高，生存率低。

CK19是一種分化特異的蛋白質(zhì)，近年研究表明，它可區(qū)別乳頭狀癌和乳頭狀增生，對(duì)濾泡型乳頭狀癌和其他濾泡性病變亦有鑒別意義[5-6]。本研究結(jié)果表明，CK19在甲狀腺乳頭狀癌組織中的總體陽(yáng)性表達(dá)率和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于癌旁甲狀腺組織，而弱陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明CK19幾乎在所有的甲狀腺乳頭狀癌中均呈陽(yáng)性表達(dá)，且大多數(shù)是強(qiáng)陽(yáng)性，在癌旁甲狀腺組織中表達(dá)大多數(shù)為陰性、弱陽(yáng)性，兩者之間的不同表達(dá)，說(shuō)明CK19在甲狀腺良惡性病變的鑒別診斷中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。與SLeX結(jié)果一樣，存在包膜、腺體外組織或血管浸潤(rùn)和伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于無(wú)浸潤(rùn)和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，表明CK19表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌的惡性發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了一定作用。本研究還觀察到，無(wú)論經(jīng)典型還是濾泡型乳頭狀癌，基本都是強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在癌周圍組織中一些散在的受浸潤(rùn)腺體亦多呈強(qiáng)陽(yáng)性，與背景組織明顯不同，提示CK19陽(yáng)性表達(dá)不僅是甲狀腺乳頭狀癌診斷的重要依據(jù)，也是濾泡增生惡變的重要標(biāo)志，在甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞涂片時(shí)，有助于減少把乳頭狀增生過(guò)診斷為乳頭狀癌，或把乳頭狀癌低診斷為乳頭狀增生。

在觀察SLeX和CK19表達(dá)的相互關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，兩者具有一定的正相關(guān)性，提示兩者在甲狀腺乳頭狀癌的惡性發(fā)展過(guò)程中可能具有協(xié)同調(diào)節(jié)作用。深入探討它們?cè)诩谞钕偃轭^狀癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用機(jī)制，必將有助于更全面了解癌腫的臨床病理進(jìn)展。

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[責(zé)任編輯：李薊龍英文編輯：謝利峰]

指導(dǎo)教師：李秀娟(1979-)，女，河北涿鹿人，講師，醫(yī)學(xué)碩士，研究方向：食管癌發(fā)病機(jī)制的研究。