趙家璧，狄 佳

Ets-1在不同Banff分級(jí)慢性腎臟病腎組織中的表達(dá)

趙家璧1，狄 佳2

目的 探討不同Banff分級(jí)慢性腎臟病患者腎臟中Ets-1(V-ets erythroblastosis virus E26 oncogene homolog 1)表達(dá)的差異。方法 選取在本院進(jìn)行腎穿刺活檢的患者60例，根據(jù)患者腎臟纖維化程度，分為Banff分級(jí)正常、輕度、中度及重度4組，每組各15例。對(duì)4組患者的性別、年齡、生化指標(biāo)及病理特征進(jìn)行分析，并通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)腎組織中Ets-1的表達(dá)。結(jié)果 Banff分級(jí)輕度組的BUN、UA、iPTH、尿β2-MG較正常組增高；Banff分級(jí)中度組的BUN、SCr、UA、iPTH及尿β2-MG較正常組增高；Banff重度組的MABP、BUN、SCr、UA、血磷、iPTH、尿β2-MG均較正常組明顯升高，而Hb降低。Banff輕度、中度及重度組患者球性硬化、小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)纖維化比例均顯著高于正常組。免疫組化顯示Banff分級(jí)正常組、輕度組、中度組及重度組Ets-1的 A值分別為0.10±0.01、0.15±0.08、0.32±0.07、0.54±0.12，中度組、重度組較正常組升高。結(jié)論 腎間質(zhì)纖維化患者Ets-1表達(dá)升高且隨Banff分級(jí)程度加重而增高。

轉(zhuǎn)錄因子；腎間質(zhì)纖維化

慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)是世界性公共健康問(wèn)題，許多患者最終進(jìn)展為慢性腎衰竭，其共同的病理特征為小管間質(zhì)纖維化和腎小球硬化。其中，腎小管間質(zhì)纖維化是決定慢性腎臟病腎組織病變程度和腎功能進(jìn)行性衰竭速度的關(guān)鍵因素。Ets-1屬于ETS家族成員之一，該家族是一類具有高度保守DNA結(jié)合域的轉(zhuǎn)錄因子的總稱，因最早在鳥類成紅細(xì)胞增多癥病毒內(nèi)被發(fā)現(xiàn)而得名[1]。在多種腎臟疾病模型中均發(fā)現(xiàn)Ets-1表達(dá)的上調(diào)，然而，有關(guān)其在人體腎臟標(biāo)本中的研究很少。本研究擬通過(guò)觀察不同Banff分級(jí)慢性腎臟病患者腎臟Ets-1表達(dá)，探討其與腎臟纖維化的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選擇2013-05至2015-05在常州市第一人民醫(yī)院進(jìn)行腎穿刺活檢的慢性腎臟病患者60例。排除繼發(fā)性腎小球疾病，腎活檢病理腎小球總數(shù)<10個(gè)及臨床病理資料不全者。根據(jù)病理結(jié)果，將患者以Banff分級(jí)分為正常及輕度、中度、重度4組(即無(wú)纖維化為正常組，腎間質(zhì)纖維化累及間質(zhì)面積<25%為輕度組，25%～50%中度組，>50%重度組)，每組各15例。

1.2 方法

1.2.1 記錄臨床資料 (1)記錄患者年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)和平均動(dòng)脈壓(MABP)=舒張壓+1/3(收縮壓-舒張壓)；(2)檢測(cè)血紅蛋白(Hb)、血白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、尿酸(UA)、血清鈣、血清磷、全段甲狀旁腺激素(iPTH)、尿蛋白定量、尿N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶(NAG)等。所有臨床指標(biāo)均為入院后腎活檢前最近一次清晨空腹檢查結(jié)果。

1.2.2 收集病理資料 計(jì)數(shù)光鏡下腎小球球性硬化、節(jié)段硬化個(gè)數(shù)及其相應(yīng)比例、小管間質(zhì)損傷(小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化)的程度。小管間質(zhì)損傷程度的定義：小灶性(<總面積的25%)、多灶性(25%～49%)、大片狀(50%～74%)和彌漫性(≥75%)。

1.2.3 免疫組化 石蠟切片(2 μm)常規(guī)二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化，滴加3%去離子水孵育10 min，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗。加入適當(dāng)比例稀釋的一抗，37 ℃孵育1 h；加入二抗，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗，DAB顯色。蒸餾水及時(shí)終止反應(yīng)，自來(lái)水沖洗5 min；蘇木素淡染細(xì)胞核，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，陽(yáng)性反應(yīng)物部位呈棕色，細(xì)胞核呈淡藍(lán)色。在200倍的顯微鏡視野下，每張切片取5個(gè)不重復(fù)的視野，由攝像系統(tǒng)提取數(shù)據(jù)化病理圖像，輸入圖像分析系統(tǒng)Motic Images Advanced進(jìn)行吸光度(A)計(jì)算，取其平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 臨床特征及生化指標(biāo) Banff分級(jí)輕度組的BUN、UA、iPTH、尿β2-MG較正常組增高(P<0.05)；Banff分級(jí)中度組的BUN、SCr、UA、iPTH及尿β2-MG較正常組增高(P<0.05)；Banff分級(jí)重度組患者的MABP、BUN、SCr、UA、血磷、iPTH、尿β2-MG均明顯升高(P<0.05)，而Hb明顯降低(P<0.05，表1)。

表1 各組慢性腎臟病患者臨床資料及生化指標(biāo)比較 (n=15；±s)

注：與正常組比較，①P<0.05

2.2 病理特征 Banff分級(jí)輕度、中度及重度組患者球性硬化、小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)纖維化比例均顯著高于正常組(P<0.05，表2)。

2.3 腎組織Ets-1表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示，Ets-1蛋白呈棕黃色顆粒狀，分布于腎小球和腎小管。半

定量分析結(jié)果顯示，Banff分級(jí)正常組、輕度組、中度組及重度組患者腎組織Ets-1的 A值分別為0.10±0.01、0.15±0.08、0.32±0.07、0.54±0.12，中度組、重度組較正常組顯著升高(P<0.05，圖1)。

表2 各組慢性腎臟病腎組織病理特征 (例；n=15；%)

注：數(shù)據(jù)描述為頻數(shù)(頻率)或M(1/4,3/4)，與正常組比較，①P<0.05

圖1 不同Banff分級(jí)患者腎組織Ets-1的表達(dá)(免疫組化×200)

3 討 論

腎間質(zhì)纖維化是導(dǎo)致終末期腎衰竭的主要病因。本研究顯示，Banff分級(jí)輕度、中度及重度組患者的BUN、UA、尿β2-MG均較正常組增高，且隨著Banff分級(jí)的加重，患者的MABP、BUN、SCr、UA、尿β2-MG逐漸升高，而血紅蛋白明顯降低，提示患者腎間質(zhì)纖維化、貧血程度加重，且腎功能、小管功能下降。研究顯示，在腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)<60 ml/min或更低的患者，可出現(xiàn)鈣磷代謝紊亂及iPTH升高[2]。本研究結(jié)果提示，Banff輕度組患者即開始出現(xiàn)iPTH的增高，Banff重度組除iPTH升高外還伴有血磷的升高。雖然該組患者血鈣值較正常組及Banff輕、中度組下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與患者口服補(bǔ)充鈣劑及樣本數(shù)量過(guò)少有關(guān)，Banff分級(jí)與鈣磷代謝紊亂的相關(guān)性尚待進(jìn)一步證實(shí)?；颊吣虻鞍锥吭诟鹘M之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示尿蛋白程度與腎衰竭程度并不相關(guān)。

腎間質(zhì)纖維化常伴有腎小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞聚積及間質(zhì)基質(zhì)沉積等特征性病理改變。本研究通過(guò)腎穿刺病理檢查發(fā)現(xiàn)腎間質(zhì)纖維化的患者其球性硬化、小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度均顯著高于正常組，且小管間質(zhì)病變較小球病變差異更為顯著，與既往研究證實(shí)腎間質(zhì)纖維化較腎小球病變更能反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后相一致[2]。

Ets-1屬于Ets轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，調(diào)控多種靶基因如MMP1、MMP3、TIMP-1的表達(dá)并與人類疾病密切相關(guān)[3-7]，它在腎臟病中的作用尚存在爭(zhēng)議。雖然研究證實(shí)其在腎臟發(fā)育及系膜基質(zhì)重塑中具有重要的作用[8，9]，但更多的研究認(rèn)為，Ets-1參與了多種腎臟疾病的進(jìn)展。在多種腎臟疾病模型中均發(fā)現(xiàn)Ets-1表達(dá)的上調(diào)[10-13]。Ets-1在腎臟纖維化中的作用及機(jī)制存在爭(zhēng)議，研究認(rèn)為激活某些信號(hào)途徑可能對(duì)腎臟纖維化起促進(jìn)作用，而激活另一些途徑則可抑制腎臟纖維化[14]。本研究觀察了不同程度腎間質(zhì)纖維化腎穿刺標(biāo)本中Ets-1的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Banff中、重度組較正常組顯著升高，提示Ets-1參與腎臟纖維化的進(jìn)展。其可能作用機(jī)制為：(1)上調(diào)MMP的活性和基因表達(dá)，影響細(xì)胞外基質(zhì)的合成降解或細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[8]；(2)作為Ang II的重要下游調(diào)節(jié)因子促進(jìn)成纖維細(xì)胞激活和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積[15]；(3)在缺氧導(dǎo)致的腎損傷后修復(fù)階段發(fā)揮重要作用[16]。但是目前關(guān)于Ets-1在腎臟纖維化中的具體信號(hào)通路及相關(guān)靶基因還有待于進(jìn)一步研究，從分子水平深入研究Ets-1在腎臟纖維化中的作用可能為慢性腎臟纖維化治療新策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

[1] Oettgen P.Regulation of Vascular Inflammation and Remodeling by ETS Factors[J] .Circ Res, 2006,99(11):1159-1166.

[2] Boor P, Ostendorf T, Floege J. Renal fibrosis: Novel insights into mechanisms and therapeutic targets[J]. Nat Rev Nephrol, 2010,6(11):643-656.

[3] Hahne J C,Okudueu A F,Sahin A,etal.The transcription factor ETS-1：its role in tumour development and strategies for its inhibition[J].Mini Rev Med Chem, 2008,8(11):1095-1105.

[4] Naito T, Razzaque M S, Nazneen A,etal.Renal expression of the ets-1 proto-oncogene during progression of rat crescentic glomerulonephritis[J]. J Am Soc Nephrol, 2000,11(12):2243-2255.

[5] Kanazawa A, Tsukada S, Sekine A,etal.Association of the gene encoding wingless-type mammary tumor virus integration-site family member 5b (wnt5b) with type 2 diabetes[J]. Am J Hum Genet, 2004,75(5):832-843.

[6] Puri S, Rodova M, Islam M R,etal.Ets factors regulate the polycystic kidney disease-1 promoter[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2006,342(4):1005-1013.

[7] Liu D X, Liu X M, Su Y,etal.Renal expression of proto-oncogene ets-1 on matrix remodeling in experimental diabetic nephropathy[J].Acta Histochem, 2011,113(5):527-533.

[8] Mizui M, Isaka Y, Takabatake Y,etal.Transcription factor Ets-1 is essential formesangial matrix remodelin[J].Kidney Int, 2006,70(2):298-305.

[9] Naito T, Razzaque M S, Nazneen A,etal.Renal Expression of the Ets-1 Proto-oncogene during Progression of Rat Crescentic Glomerulonephritis[J].J Am Soc Nephrol, 2000,11(12):2243-2255.

[10] Raffetseder U, Wernert N, Ostendorf T,etal.Mesangial cell expression of proto-oncogene Ets-1 during progression of mesangioproliferative glomerulonephritis[J]. Kidney Int, 2004,66(2):622-632.

[11] Tanaka H, Terada Y, Kobayashi T,etal.Expression and function of Ets-1 during experimental acute renal failure in rats[J].J Am Soc Nephrol, 2004,15(12):3083-3092.

[12] Naito T, Razzaque M S, Nazneen A,etal.Renal expression of the Ets-1 proto-oncogene during progression of rat crescentic glomerulonephritis[J].J Am Soc Nephrol, 2000,11(12):2243-2255.

[13] Liu D X, Liu X M, Su Y,etal.Renal expression of proto-oncogene ets-1 on matrix remodeling in experimental diabetic nephropathy[J].Acta Histochem, 2011,113(5):527-533.

[14] 袁偉杰,王 軒.Ets-1在腎臟纖維化中的雙向作用及其機(jī)制[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志, 2011,12(12):1035-1037.

[15] Di J,Jiang L,Zhou Y,etal.Ets-1 targeted by microrna-221 regulates angiotensin II-induced renal fibroblast activation and fibrosis[J].Cell Physiol Biochem,2014,34(4):1063-1074.

[16] 陳亞坤,傅淑霞,蔡澎濤.E26轉(zhuǎn)錄因子1與腎間質(zhì)纖維化[J].臨床薈萃, 2009,24 (16 ):1468-1470.

(2015-07-07收稿 2015-08-24修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)

Expression of Ets-1 in different banff classifying patients with chronic kidney disease

ZHAO Jiabi1and DI Jia2.

1.Department of Pathology, Changzhou No.2 People’s Hospital of Jiangsu Province, Changzhou 213003,China;2.Department of Nephrology, Changzhou No.1 People’s Hospital of Jiangsu Province, Changzhou 213003,China

Objective To investigate the expression of transcription factor Ets-1 in chronic renal fibrosis.Methods A total of 60 patients underwent renal biopsy from 1 May 2013 to 31 May 2015 at the Department of Nephrology in The Third Affiliated Hospital of Suzhow University were enrolled in the study and divided into four groups according to Banff scheme. Clinical and pathological characteristics of patients were investigated.The expression of transcription factor Ets-1 was assessed by immunohistochemical stainining.Results Compared with normal group,serum BUN, UA, iPTH and urineβ2-MG were significantly elevated in Banff Ⅰgroup. Serum BUN、SCr、UA、iPTH and urineβ2-MG were significantly elevated in Banff Ⅱgroup. MABP、BUN、SCr、UA、P、iPTH and urineβ2-MG were significantly elevated in Banff Ⅲgroup while Hb decreased. Percentages of global glomerulosclerosis,tubular atrophy, inflammatory cell infiltration and interstitial fibrosis significantly increased in Banff Ⅰ,Ⅱ,Ⅲgroups than in normal group. Immunohistochemical analysis showed that absorbance values of A were 0.05±0.01, 0.15±0.08, 0.32±0.07, and 0.54±0.12, respectively. Ets-1 were up-regulated in Banff Ⅱand Ⅲ groups.Conclusion Ets-1 is up-regulated in renal fibrosis and increases with Banff schems.

transcription factor；renal fibrosis

常州市衛(wèi)生局指導(dǎo)性科技項(xiàng)目，WZ201009

趙家璧，本科學(xué)歷，主治醫(yī)師，E-mail:jiabizhao@sina.com

1.213003，江蘇省常州市第二人民醫(yī)院病理科；2.213003，江蘇省常州市第一人民醫(yī)院腎內(nèi)科

狄 佳，E-mail:brightsea@163.com

R692.3