覃仕鋒 李春美 (湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院檢驗(yàn)科，恩施 445000)

AID(自身免疫性疾病)的發(fā)病機(jī)制為機(jī)體自身發(fā)生免疫應(yīng)答及免疫功能發(fā)生紊亂而引發(fā)多器官系統(tǒng)受損的一種疾病［1］。當(dāng)前主要依據(jù)患者的臨床表現(xiàn)以及實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的結(jié)果來(lái)診斷AID，由自身標(biāo)志性抗體或高效價(jià)特異性確定［2］。臨床上的自身抗體比較常見(jiàn)的為ENA(抗可提取性核抗原抗體)、ANA(抗核抗體)和抗ds-DNA 抗體(雙鏈DNA 抗體)，檢測(cè)相對(duì)方便，此也是AID 的三個(gè)重要的標(biāo)志物［3］。本研究旨在通過(guò)對(duì)AID 患者中ENA、ANA、抗ds-DNA 的檢測(cè)，探討ENA、ANA、抗ds-DNA 抗體在AID 患者中的相關(guān)性及敏感性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 分析2013 年2 月至2014 年4 月在我院接受治療的180 例AID 患者的臨床資料，其中男性患者67 例，女性患者113 例。收集所有患者的血清，包括25 例混合結(jié)締組織病患者、30 例結(jié)締組織病患者、75 例SLE(系統(tǒng)性紅斑狼瘡)患者、33例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者以及17 例其他疾病類患者(除外MCTD、CTD、SLE 和RA 的其他AID 患者)，所有患者的年齡均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 研究方法 用免疫印跡法(即蛋白質(zhì)印跡法)檢測(cè)ENA(包括Sm、nRNP、Scl-70、ss-A、ss-B、Jo-1)。觀察抗ENA 抗體的結(jié)果:稀釋血清(1 ∶100)，參照試劑盒中依次排列抗原，黑色條帶出現(xiàn)者視為陽(yáng)性。用IFL(間接免疫熒光法)檢測(cè)ANA:采用的復(fù)合片來(lái)自Hep-2/靈掌類猴肝組織。觀察結(jié)果:稀釋血清(1 ∶100)，判定猴肝組織片和Hep-2 產(chǎn)生的特異性免疫熒光反應(yīng)為陽(yáng)性。進(jìn)一步對(duì)陽(yáng)性血清再作10 000、3 200、1 000、320 倍稀釋來(lái)決定最終的滴度。對(duì)細(xì)胞熒光模型進(jìn)行觀察時(shí)使用熒光顯微鏡。用IFL(間接免疫熒光法)檢測(cè)抗ds-DNA，使用的抗原基質(zhì)為綠蠅短膜蟲(chóng)。觀察結(jié)果:稀釋血清(1 ∶10)，綠蠅短膜蟲(chóng)發(fā)生動(dòng)基體免疫熒光反應(yīng)判為陽(yáng)性。所有試劑均購(gòu)自歐盟實(shí)驗(yàn)診斷有限公司。比較男性、女性的自身抗體陽(yáng)性情況差異，并探討不同熒光模式的ANA 對(duì)應(yīng)的ENA 各項(xiàng)陽(yáng)性情況以及ANA表達(dá)與ENA、抗ds-DNA 表達(dá)相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0 軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)計(jì)量以±s 形式表示，比較采用t 檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。定義P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 入組患者的詳細(xì)一般資料見(jiàn)表1。

2.2 自身抗體檢測(cè)陽(yáng)性與性別相關(guān)性 男、女性患者的自身抗體檢測(cè)陽(yáng)性情況見(jiàn)表2，可見(jiàn)女性患者的ANA(χ2=12.23，P ＜0.01)、抗ds-DNA 陽(yáng) 性率(χ2=5.906，P=0.015)均顯著高于男性。

2.3 ANA 不同熒光模式所對(duì)應(yīng)的ENA 各項(xiàng)陽(yáng)性率 表3 為不同熒光模式的ANA 對(duì)應(yīng)的ENA 各項(xiàng)陽(yáng)性情況，提示nRNP、ss-A 陽(yáng)性標(biāo)本中的顆粒型ANA 比例最高，而Scl-70 陽(yáng)性標(biāo)本中均質(zhì)型ANA比例最高。

2.4 ANA 表達(dá)與ENA、抗ds-DNA 表達(dá)相關(guān)性 ANA 表達(dá)陽(yáng)性和陰性的標(biāo)本所對(duì)應(yīng)的ENA、抗ds-DNA 表達(dá)情況詳見(jiàn)表4，結(jié)果提示ANA 陽(yáng)性標(biāo)本的ENA 陽(yáng)性率(χ2=6.406，P=0.011)、抗ds-DNA 陽(yáng)性率(χ2=43.49，P＜0.01)顯著高于ANA 陰性的標(biāo)本。

表1 入組患者的一般資料Tab.1 General data of patients

表2 自身抗體檢測(cè)陽(yáng)性與性別相關(guān)性Tab.2 Correlation between positive expression of detection of autoantibodies and sex

表3 不同熒光模式的ANA 對(duì)應(yīng)的ENA 各項(xiàng)陽(yáng)性情況Tab.3 Positive cases of all ENA correspond to different fluorescent pattern of ANA

表4 ANA 表達(dá)與ENA、抗ds-DNA 表達(dá)相關(guān)性Tab.4 Correlation between expression of ANA and expression of ENA，anti-ds-DNA antibody

3 討論

AID 存在自身反應(yīng)性的T 細(xì)胞或(和)自身抗體，嚴(yán)重程度與量平行，致敏淋巴細(xì)胞或自身抗體所針對(duì)的抗原分布部位是AID 受累的主要范圍，故檢測(cè)自身抗體有助于鑒別診斷AID、對(duì)疾病活動(dòng)度進(jìn)行判斷、觀察療效以及對(duì)臨床用藥的指導(dǎo)都有著極其重要的價(jià)值意義［4］。性別不同，自身抗體的檢出率亦顯著不同，自身抗體在男性中的陽(yáng)性率明顯比女性中的陽(yáng)性率低，提示AID 具有性別上的差異，考慮原因主要為性激素不同致使了免疫系統(tǒng)不同的反應(yīng)，其中男性性激素對(duì)免疫反應(yīng)起一定的抑制作用，而女性性激素則起了增強(qiáng)的作用［5］。

AID 不同，抗核抗體譜亦不同。ANA 為細(xì)胞核成分(包括細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、細(xì)胞核)的自身抗體的統(tǒng)稱。依據(jù)核抗原的不同，將ANA 分為:抗DNA 抗體、抗組蛋白抗體、抗著絲點(diǎn)抗體、抗核仁抗體。其中抗DNA 抗體又分為兩種:抗ds-DNA(抗雙鏈DNA)和ssDNA(抗單鏈DNA)。ENA 可分為9 類，產(chǎn)生9 種抗體:抗RNP 抗體(抗核糖核蛋白抗體)、抗SM 抗體、抗ss-A 抗體、抗Ha 抗體、抗PM-1 抗體、抗MA1 抗體、抗Scl-70 抗體、抗Jo-1 抗體和抗Ku 抗體。檢測(cè)自身抗體期間，相比于抗ds-DNA、ENA，ANA 特異性并不高，但是敏感性較高，同時(shí)在ANA 陰性和陽(yáng)性標(biāo)本中，抗ds-DNA、ENA 檢出陽(yáng)性率有著明顯的差異，當(dāng)ANA 陰性時(shí)，抗ds-DNA、ENA 檢出陽(yáng)性率較低，而當(dāng)ANA 陽(yáng)性時(shí)，抗ds-DNA、ENA 檢出陽(yáng)性率相對(duì)較高［6］。

由于女性存在的如促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)信號(hào)和高催乳素血癥的不同、雄激素水平降低等潛在的原因，女性更易得SLE 疾病，女性SLE 患者中中樞神經(jīng)受損和雷諾現(xiàn)象等較為常見(jiàn)，而男性SLE 患者卻是腎受累、漿膜炎以及皮膚表現(xiàn)較為常見(jiàn)，自身抗體和男、女性SLE 患者的臨床表現(xiàn)幾乎一致。本研究發(fā)現(xiàn)自身抗體在男性中的陽(yáng)性率明顯低于女性，其中男性和女性ANA 和ENA 陽(yáng)性率之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

ANA 的熒光模式與ENA 的抗核抗體譜內(nèi)各個(gè)譜條帶上的陽(yáng)性存在關(guān)聯(lián)，一旦nRNP、Sm 中任意1～2 項(xiàng)均呈陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，ANA 相應(yīng)的熒光模式最為可能是顆粒型;如果Scl-70 呈陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，則最可能呈均質(zhì)性。nRNP 高滴度抗體是MCTD(混合性結(jié)締組織病)的一個(gè)標(biāo)志物，陽(yáng)性表達(dá)率為95%～100%，疾病活動(dòng)性與抗體滴度存在關(guān)聯(lián)性［7］，30%～40%的SLE 患者中也存在nRNP 抗體，但是基本都會(huì)有Sm 抗體伴隨;然而，抗ds-DNA 和Sm 是SLE 診斷的兩個(gè)標(biāo)志性的抗體;各種AID 與抗ss-A 抗體均有關(guān)，40%～80%出現(xiàn)在SS(干燥綜合征)中，30%～40%出現(xiàn)于SLE 中，20% 出現(xiàn)在PBC(原發(fā)性膽汁性肝硬化)［8］;在SS 中抗ss-B 和抗ss-A 中一般均同時(shí)出現(xiàn);25%～75%的PSS(進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥)患者中出現(xiàn)抗Scl-70 的抗體;多肌炎中抗Jo-1 抗體的陽(yáng)性表達(dá)率為25%～35%，與肺間質(zhì)纖維化合并往往存在一定的關(guān)聯(lián)性。故ANA 能作為ADI 的一項(xiàng)篩選指標(biāo)，如果ANA 呈陽(yáng)性表達(dá)，則需進(jìn)一步檢測(cè)抗ds-DNA 和ENA，來(lái)提高檢出ADI 的概率，有助于及早預(yù)防、追蹤和判定患者病情［9］。

綜上所述，在ADI 中，三種自身抗體抗ds-DNA、ENA 和ANA 的敏感性差異較為明顯;同時(shí)自身抗體在男性中的陽(yáng)性率明顯低于女性;顆粒型在ANA核型中占據(jù)比較高的比率;ANA 熒光模式與ENA抗體譜中的Scl-70、nRNP 以及Sm 的陽(yáng)性有關(guān);ANA 陰性中抗ds-DNA 和ENA 的陽(yáng)性檢出率較低［10］。

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