肖同楚，黃朝明，楊興娥，湛進(jìn)進(jìn)，郭蓮軍

(1. 湖北省宜昌市夷陵區(qū)婦幼保健院，湖北 宜昌 443100；2. 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430030)

米邦塔仙人掌果膠對(duì)慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激小鼠絕望癥狀的改善作用

肖同楚1，黃朝明1，楊興娥1，湛進(jìn)進(jìn)2，郭蓮軍2

(1. 湖北省宜昌市夷陵區(qū)婦幼保健院，湖北 宜昌 443100；2. 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430030)

目的 研究米邦塔仙人掌果膠(MCP)對(duì)慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(CUMS)小鼠絕望癥狀的改善作用。方法 雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、MCP低劑量組(50 mg/kg)、MCP中劑量組(100 mg/kg)、MCP高劑量組(200 mg/kg)。除空白對(duì)照組不進(jìn)行任何應(yīng)激處理外，其余組均進(jìn)行CUMS，各MCP組均在進(jìn)行CUMS期間每天灌胃相應(yīng)劑量MCP。造模結(jié)束24 h后進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)，48 h后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。結(jié)果 模型組懸尾實(shí)驗(yàn)潛伏期顯著短于空白對(duì)照組(P<0.01)，累計(jì)不動(dòng)時(shí)間顯著長(zhǎng)于空白對(duì)照組(P<0.01)；MCP高劑量組潛伏期顯著長(zhǎng)于模型組(P<0.05)，MCP中、高劑量組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間顯著短于模型組(P均<0.01)。模型組強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)潛伏期顯著短于空白對(duì)照組(P<0.01)，累計(jì)不動(dòng)時(shí)間顯著長(zhǎng)于空白對(duì)照組(P<0.01)；MCP各給藥組潛伏期與空白對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，而MCP高劑量組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間顯著短于模型組 (P<0.05)。結(jié)論 MCP能較好地緩解CMS小鼠的行為絕望癥狀。

米邦塔仙人掌果膠；慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激； 絕望癥狀；小鼠

抑郁癥是一種以持久的心境低落為主要特征的精神疾病，目前全世界約有4 億人受其影響，且發(fā)病率逐年增加[1]。慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷介導(dǎo)抑郁癥是抑郁癥的發(fā)病機(jī)制之一，慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress，CUMS)模型能很好地模擬人類(lèi)抑郁癥中慢性、低水平應(yīng)激源促進(jìn)疾病發(fā)生，加速疾病發(fā)展的機(jī)制[1]。研究顯示植物果膠有較好的抗氧化、抗炎、抗?jié)?、抗癌和調(diào)節(jié)免疫的作用[2-3]。米邦塔仙人掌富含果膠成分，然而關(guān)于米邦塔仙人掌果膠(milpa alta cactus pectin，MCP)在神經(jīng)和精神系統(tǒng)疾病特別是抑郁癥方面的作用尚少見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)探討了MCP對(duì)小鼠CUMS模型抑郁樣絕望癥狀是否有改善作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1藥品與試劑 MCP(棕色粉末)由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系提取，用雙蒸水溶解配置成低(5 mg/mL)、中(10 mg/mL)、高(20 mg/mL)3種濃度，調(diào)節(jié)pH值至中性。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 清潔級(jí)健康雄性昆明種小鼠50只，體質(zhì)量15～20 g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(鄂) 2008-0007，合格證號(hào)：00020736；飼養(yǎng)條件：12 h晝夜交替，室溫(24±2)℃，空氣濕度(50±10)%，除造模及必要的斷水?dāng)嗍惩猓∈缶勺杂蛇M(jìn)水進(jìn)食。將50只小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、MCP低劑量組(50 mg/kg)、MCP中劑量組(100 mg/kg)、MCP高劑量組(200 mg/kg)，每組10只。

1.3 模型制備及干預(yù)方法 空白對(duì)照組不進(jìn)行任何應(yīng)激處理，正常條件飼養(yǎng)；其余組給予CUMS造模，造模過(guò)程包括斷水16 h、斷食16 h、45°傾斜鼠籠4 h、潮濕墊料24 h、通宵照明、2 h/2 h晝夜交替、晝夜顛倒、陌生氣味4 h、4 ℃冷水游泳、陌生氣味4 h、活動(dòng)限制2 h共11種應(yīng)激因子。每天隨機(jī)給予(讓動(dòng)物不可預(yù)知)以上2種刺激因子，同一種應(yīng)激因子間隔時(shí)間至少48 h，持續(xù)6周。各MCP組均在進(jìn)行應(yīng)激處理期間每天9:00—10:00灌胃相應(yīng)劑量MCP，灌胃體積為0.1 mL/10 g，模型組給予同等體積的雙蒸水。

1.4 懸尾實(shí)驗(yàn) CUMS造模結(jié)束24 h后進(jìn)行小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)。在離小鼠尾部尖端約1 cm處，用膠帶將其倒置懸掛于空中，使其頭部離實(shí)驗(yàn)平臺(tái)約5 cm，檢測(cè)小鼠在5 min內(nèi)的潛伏期(從掙扎到第一次完全靜止不動(dòng)的時(shí)間，不動(dòng)指小鼠沒(méi)有任何的肢體和身體運(yùn)動(dòng))和累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。采用雙盲測(cè)試法檢測(cè)。

1.5 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 懸尾實(shí)驗(yàn)完成24 h后，進(jìn)行小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。主要設(shè)備為一個(gè)高20 cm、直徑為15 cm的圓柱形透明容器。向容器內(nèi)加入溫度為(24±2)℃，深15 cm的自來(lái)水。放入小鼠，實(shí)驗(yàn)者以秒表計(jì)時(shí)，記錄其在5 min內(nèi)的潛伏期(從掙扎到第一次完全靜止不動(dòng)的時(shí)間，不動(dòng)指小鼠在水中停止掙扎，呈漂浮狀態(tài)，或僅有微小的肢體運(yùn)動(dòng)，以保證其頭部浮于水面上)和累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。采用雙盲測(cè)試法檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1懸尾實(shí)驗(yàn) 模型組潛伏期明顯短于空白對(duì)照組(P<0.01)；MCP高劑量組潛伏期明顯高于模型組(P<0.05)；MCP低、中劑量組潛伏期與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。模型組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01)；MCP中、高劑量組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間明顯短于模型組(P均<0.01)，MCP低劑量組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 懸尾實(shí)驗(yàn)中各組潛伏期與累計(jì)不動(dòng)時(shí)間比較

注：①與空白對(duì)照組比較，P<0.01；②與模型組比較,P<0.05;③與模型組比較,P<0.01。

2.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 模型組潛伏期明顯短于空白對(duì)照組(P<0.01)； 而MCP低劑量組和MCP中劑量組潛伏期明顯低于模型組(P<0.01和P<0.05)。模型組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01)；MCP高劑量組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間明顯短于模型組(P<0.05)，MCP低劑量組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間顯著高于模型組(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中各組潛伏期與累計(jì)不動(dòng)時(shí)間比較

注：①與空白對(duì)照組比較，P<0.01；②與模型組比較,P<0.01;③與模型組比較,P<0.05。

3 討 論

懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)被廣泛用于抑郁動(dòng)物行為絕望的評(píng)價(jià)。有研究比較了C57BL/6J、BALB/cJ、DBA/2J3個(gè)不同種系的小鼠CUMS造模后在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)以上3種動(dòng)物在這2項(xiàng)試驗(yàn)中的表現(xiàn)明顯不同[4]；李騰飛等[5]探討7BL/6、BALB/c、ICR和昆明小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)懸尾實(shí)驗(yàn)中的行為學(xué)差異，發(fā)現(xiàn)C57BL/6小鼠的不動(dòng)時(shí)間顯著長(zhǎng)于其他3種品系小鼠，但是4種品系小鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間差異無(wú)顯著性。本實(shí)驗(yàn)中CUMS顯著縮短小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的潛伏期并增加其累計(jì)不動(dòng)時(shí)間，與文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道一致。而MCP對(duì)CUMS小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中行為絕望的改善效應(yīng)不盡相同：①在懸尾實(shí)驗(yàn)中，MCP高劑量能顯著增加CUMS小鼠潛伏期，MCP中、高劑量可顯著降低CUMS小鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間；在強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中，雖然MCP高劑量明顯降低CUMS小鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間，但是MCP高劑量并未使?jié)摲陲@著增加。②在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，MCP低、中劑量可降低CUMS小鼠潛伏期，增加累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。分析認(rèn)為使用的小鼠鼠種可能是導(dǎo)致以上現(xiàn)象的一個(gè)原因。另外Cryan等[8]回顧了二十年來(lái)使用2個(gè)實(shí)驗(yàn)的部分文獻(xiàn)認(rèn)為懸尾實(shí)驗(yàn)比強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)?zāi)芨玫胤从晨挂钟羲幍寞熜?，懸尾?shí)驗(yàn)檢測(cè)靈敏度相對(duì)較低可能是出現(xiàn)上述不一致現(xiàn)象的另一個(gè)原因。在懸尾實(shí)驗(yàn)中龍須菜提取物10mg/kg能表現(xiàn)出良好的抗抑郁效應(yīng)，但是在強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中100mg/kg才能顯現(xiàn)出良好的抗抑郁效果。這與本研究觀察到在懸尾實(shí)驗(yàn)中MCP中、高劑量能表現(xiàn)出良好的抗抑郁效應(yīng)，但在強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中只有MCP高劑量才能表現(xiàn)出良好的抗抑郁效果的結(jié)果一致。

雖然MCP對(duì)CUMS小鼠在2個(gè)試驗(yàn)中潛伏期和累計(jì)不動(dòng)時(shí)間的影響不太一致，但是MCP高劑量可明顯縮短CUMS小鼠在這2項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間；另外懸尾實(shí)驗(yàn)檢測(cè)靈敏度高于強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)，MCP可明顯增加CUMS小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)中的潛伏期，降低累計(jì)不動(dòng)時(shí)間；故認(rèn)為MCP能較好地緩解CUMS小鼠的行為絕望癥狀。

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Study on the improvement of milpa alta cactus pectin on desperate symptoms in mice exposed to chronic unpredictable mild stress

XIAO Tongchu1, HUANG Chaoming1, YANG Xing’e1, ZHAN Jinjin2, GUO Lianjun2

(1. Yichang City Yiling District Maternal and Child Health Hospital, Yichang 443100, Hubei, China; 2.Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei, China)

Objective It is to investigate the effect of milpa alta cactus pectin (MCP) on desperate symptoms in mice exposed to chronic unpredictable mild stress (CUMS). Methods The male Kunming mice were randomly divided into 5 groups such as control group, CUMS+Vehicle group, CUMS+MCP 50 mg/kg group, CUMS+MCP 100 mg/kg group, and CUMS+MCP 200 mg/kg group. Except the control group, the other groups were exposed to CUMS for 6 weeks. And during this period, the animals were treated with corresponding drug by intragastric administration. While the ends of the model, the tail suspension test (TST) was carried out after 24 hours, and the forced swimming test (FST) were conducted after 48 hours. Results In TST, the latency of the CUMS+Vehicle group was significantly shorter (P<0.01), and the immobility time was significantly longer than that of the control group (P<0.01); the latency of the CUMS+MCP 200 mg/kg group was significantly longer than that of the CUMS+Vehicle group (P<0.05), and the immobility time of the CUMS+MCP 200 mg/kg and 100 mg/kg groups was significantly shorter than that of the COMS+Vehicle group (allP<0.01). In FST, the latency of the CUMS+Vehicle was significantly shorter (P<0.01), and the immobility time was significantly longer than that of control group (P<0.01); the latency of the MCP groups was no significant difference compared with the control group (allP>0.05), and the immobility time of the CUMS+MCP 200 mg/kg groups was significantly short than that of the CUMS+Vehicle group (P<0.05). Conclusion MCP can improve the desperate symptoms in mice exposed to CUMS.

milpa alta cactus pectin; chronic unpredictable mild stress; desperate symptoms; mice

肖同楚，男，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)槁圆》乐巍?/p>

郭蓮軍，E-mail:gljy2008@126.com

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助項(xiàng)目(2011TS073)；國(guó)家重大創(chuàng)新平臺(tái)重點(diǎn)資助新藥研發(fā)項(xiàng)目(2009ZX09301-014)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.24.003

R-332

A

1008-8849(2015)24-2630-03

2015-01-10