陳 勝 胡艷紅▲ 馮春燕 李志雄 胡 俊 柯發(fā)杰 黃秀榕 祁明信

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建福州 350003；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州 350108；3.福建省人口和計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所，福建福州 350013

動(dòng)物模型是研究許多疾病發(fā)病機(jī)制、藥物和疫苗不可缺少的工具，幾乎每一次醫(yī)學(xué)上的重大突破都是從對動(dòng)物的研究開始的。非人靈長類動(dòng)物是十分重要的生物醫(yī)學(xué)資源，其與人類在組織結(jié)構(gòu)、生理生化、免疫、代謝和遺傳等方面十分近似，是極其珍貴的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，其應(yīng)用價(jià)值遠(yuǎn)超過其他種屬動(dòng)物[1]。獼猴作為重要的非人靈長類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物， 已作為傳染性疾病模型、精神神經(jīng)性疾病模型、心血管疾病模型、腫瘤模型等應(yīng)用于這些疾病的防治研究[2-7]。 在眼科，也有報(bào)道應(yīng)用于白內(nèi)障、青光眼、干眼癥等領(lǐng)域的研究[8-10]，本研究通過對不同年齡段獼猴進(jìn)行眼球屈光生物學(xué)參數(shù)測量，發(fā)現(xiàn)了近視眼的自發(fā)動(dòng)物模型，將為近視眼的防治研究提供科學(xué)有效的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6～30 個(gè)月月齡健康獼猴33 只66 眼 （由福建省人口和計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所非人靈長類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供， 動(dòng)物質(zhì)量合格證號：35000400000008），性別不限，體重0.9～4.4 kg，體毛整潔、光亮，健康狀況良好。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)所選的獼猴6 個(gè)月前均與母親一起單籠母乳喂養(yǎng)，6 個(gè)月后均單籠飼養(yǎng)，一日三餐，定時(shí)定量飼喂，自由飲水，所有活動(dòng)均在籠內(nèi)進(jìn)行，環(huán)境溫度控制在19～26℃，相對濕度：40%～70%，動(dòng)物照度：100～200 LX，晝夜明暗交替時(shí)間：10/14 h。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

全自動(dòng)驗(yàn)光曲率儀（佳能RK-5，日本佳能公司生產(chǎn)）；眼部A 超測量儀（TOMEY UD-6000，日本TOMEY公司生產(chǎn)）；角膜超聲測厚儀（HANDY PACHYMETER SP-100，日本TOMEY 公司生產(chǎn)）。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組

獼猴分為3 組：6 個(gè)月月齡組[平均月齡為（6±1）個(gè)月]，18 個(gè)月月齡組[平均月齡為（18±1）個(gè)月]，30 個(gè)月月齡組[平均月齡為（30±1）個(gè)月]。

1.5 觀察指標(biāo)及方法

測量前使用動(dòng)物用鹽酸氯胺酮注射液5～10 mg/kg體重進(jìn)行肌肉注射全身麻醉， 鹽酸丙美卡因滴眼液（美國愛爾康公司）進(jìn)行眼球表面麻醉，分別采用全自動(dòng)驗(yàn)光曲率儀測量屈光度和角膜曲率（測量3 次取平均值），屈光度數(shù)以等效球鏡計(jì)算，屈光度為±0.5 D范圍內(nèi)為正視眼，屈光度＞+0.5 D 為遠(yuǎn)視眼，屈光度＜-0.5 D 為近視眼；采用眼部A 超測量儀、角膜測厚儀分別測量眼軸長度和角膜厚度（測量10 次取平均值），測定工作由操作熟練的3 名醫(yī)師完成，每臺(tái)儀器固定同1 名操作者。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析， 正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。 以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組屈光狀態(tài)分布情況

33 只獼猴66 只眼的屈光狀態(tài)：近視眼50 只，正視眼8 只，遠(yuǎn)視眼8 只，近視眼數(shù)比例高達(dá)75.8%，三組屈光狀態(tài)比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。其中6 個(gè)月月齡組近視眼比例為30.0%，18 個(gè)月月齡組為80.8%，30 個(gè)月月齡組為86.7%， 隨年齡增長近視比例逐漸增加，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。見表1。

表1 各組屈光狀態(tài)分布情況（只）

2.2 各組光度、角膜中央厚度、眼軸長度、角膜曲率情況

6 個(gè)月月齡組屈光度為遠(yuǎn)視狀態(tài)， 而18 個(gè)月月齡組和30 個(gè)月月齡組的屈光度均顯示為近視狀態(tài)，且隨著年齡的增長近視度數(shù)不斷加深，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。各組獼猴眼角膜中央厚度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。而隨著年齡的增長，眼軸長度不斷變長，6 個(gè)月月齡組與其他兩組比較差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01），18 個(gè)月月齡組與30 個(gè)月月齡組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。6 個(gè)月月齡組角膜曲率均值最大，與其他兩組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0.01）；18 個(gè)月月齡組和30 個(gè)月月齡組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），提示獼猴可能在18 月齡以后角膜曲率不再改變。 見表2。

表2 各組屈光度、角膜中央厚度、眼軸長度、角膜曲率情況（±s）

表2 各組屈光度、角膜中央厚度、眼軸長度、角膜曲率情況（±s）

注：與6 個(gè)月月齡組比較，*P<0.01；與18 個(gè)月月齡組比較，#P<0.01

分組 眼只數(shù) 屈光度（D） 角膜厚度（μm） 眼軸長度（mm） 水平角膜曲率（D） 垂直角膜曲率（D）6 個(gè)月月齡組（n = 5）18 個(gè)月月齡組（n = 13）30 個(gè)月月齡組（n = 15）F 值P 值10 26 30 1.14±1.03-1.50±1.14*-2.23±1.11*#25.94 0.00 485.00±23.50 486.50±26.26 473.43±24.70 2.08 0.13 16.22±0.77 18.31±0.61*18.73±0.53*#65.43 0.00 53.37±1.40 49.74±1.32*50.54±1.76*19.96 0.00 54.58±1.77 50.42±1.05*51.24±1.81*23.98 0.00

3 討論

屈光度、角膜曲率、眼軸長度、角膜厚度等是重要的眼球生物學(xué)參數(shù)，為人工晶體度數(shù)測量、屈光手術(shù)等方面提供了重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。本研究結(jié)果顯示6～30 個(gè)月月齡獼猴角膜厚度并不隨年齡增長而變化，暫未見有關(guān)獼猴角膜厚度與年齡相關(guān)性的類似報(bào)道。 而有關(guān)人類角膜厚度是否受年齡影響觀點(diǎn)不一，劉勇等[11]調(diào)查了5～80 歲患者3752 例（7490 眼）發(fā)現(xiàn)老年人（60～80 歲）角膜厚度明顯變薄，其余各年齡組角膜厚度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；喬芳等[12]報(bào)道6～18 歲兒童角膜厚度與年齡無相關(guān)性，與本文在獼猴眼得出的結(jié)論一致。由于本研究未篩查中老年獼猴，暫時(shí)無法得知中老年獼猴眼角膜厚度是否會(huì)較青幼年獼猴角膜厚度變薄。 但本研究采用角膜超聲測厚儀獲得的獼猴在體角膜厚度均值為（481.85±26.91）μm 與課題組早期采用測微游標(biāo)卡尺獲得的成年獼猴離體角膜厚度均值[（480±6）μm]基本一致。

研究報(bào)道：出生后嬰幼兒眼球發(fā)育大約在3 歲左右基本完成，至8～9 歲發(fā)育到成人水平[13]，新生兒眼軸長度在16.00～17.00 mm，2 歲左右到21.50～22.00 mm，6 歲為23.00 mm，基本達(dá)到成人水平，16 歲達(dá)到成人的23.50 mm[14]。 本研究結(jié)果顯示：30 個(gè)月月齡以前，隨著年齡的增長，獼猴眼軸不斷變長，可見獼猴眼軸隨年齡的變化規(guī)律與人類基本一致。本研究采用眼部A 超測量儀獲得的眼軸長度均值為 （18.43±1.06）mm較課題組早期采用測微游標(biāo)卡尺獲得的成年獼猴離體眼球前后徑[（20.63±0.82）mm]更短，可能與測量方式及獼猴年齡不同有關(guān)。

角膜屈光力由角膜曲率和折射率共同決定。一般情況下，角膜折射率不會(huì)發(fā)生改變，因此，通常可通過角膜曲率來了解角膜屈光狀態(tài)。 陳麗萍等[15]在對3～15歲兒童角膜曲率進(jìn)行調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)受檢兒童角膜曲率與年齡成負(fù)相關(guān)，隨年齡增大，角膜曲率逐漸減小。本研究發(fā)現(xiàn)6 個(gè)月月齡組獼猴角膜曲率均值較大，與其他兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；而18 個(gè)月月齡組和30 個(gè)月月齡組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），提示獼猴在18 個(gè)月月齡以前隨年齡增長角膜曲率逐漸變小，而18 個(gè)月月齡組和30 個(gè)月月齡組角膜曲率不再隨年齡變化，與文獻(xiàn)報(bào)道的兒童角膜曲率變化規(guī)律稍有差異。 從本研究結(jié)果看，獼猴的角膜曲率較人類提早穩(wěn)定，這也符合文獻(xiàn)報(bào)道的獼猴出生即開眼，2 歲完成正視化的發(fā)育變化規(guī)律[16]。

目前，比較常用的近視動(dòng)物模型主要采用形覺剝奪和離焦誘導(dǎo)獲得， 如形覺剝奪性豚鼠近視模型、光學(xué)離焦性豚鼠近視模型、頻閃光誘導(dǎo)光覺異常性豚鼠近視模型等[17-18]。 但近視眼的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)仍存在很多具體問題， 如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼球結(jié)構(gòu)成分與人類的相似性；誘導(dǎo)開始時(shí)間與動(dòng)物正視化過程的匹配性；誘導(dǎo)方法與人類近視形成過程的相似性等。本研究篩查的33只獼猴66 只眼中共篩查到50 只近視眼，近視眼數(shù)比例高達(dá)75.8%，其中6 個(gè)月月齡組近視眼比例為30.0%，18 個(gè)月月齡組為80.8%，30 個(gè)月月齡組為86.7%，隨年齡增長近視比例逐漸增加。 6 個(gè)月月齡組眼軸最短，但角膜曲率最大，所以近視比例相對較低，從本研究結(jié)果分析6 個(gè)月月齡組獼猴以曲率性近視為主；而隨著年齡的增長，眼軸逐漸增長，18 月齡以后角膜曲率不再改變，所以18～30 個(gè)月月齡這階段以軸性近視為主。本研究發(fā)現(xiàn)獼猴18～30 個(gè)月月齡近視的發(fā)生率高達(dá)80%以上，可能與獼猴的人工繁育喂養(yǎng)環(huán)境（長時(shí)間的籠養(yǎng)）有關(guān)，本研究篩查的33 只獼猴自出生后一直籠養(yǎng)，戶外活動(dòng)很少，日常攝食等以近距離用眼為主，這與冷云霞等[19]報(bào)道的強(qiáng)制性近距離注視能夠加快青少年恒河猴玻璃體腔長度的增長，導(dǎo)致單純性近視的發(fā)生與發(fā)展類似，但其具體原因還有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，人工繁育獼猴眼角膜曲率、角膜厚度和眼軸長度的變化規(guī)律和人類非常接近，且自發(fā)性近視發(fā)生率很高，可作為良好的近視動(dòng)物模型。 長時(shí)間籠養(yǎng)環(huán)境所致的青幼年獼猴自發(fā)性近視發(fā)生率在2.5歲前隨年齡的增長而增高，其發(fā)病的規(guī)律與當(dāng)前流行病學(xué)顯示的青少年近視發(fā)病規(guī)律尤為相似[20]，青幼年期獼猴自發(fā)近視動(dòng)物模型可用于研究青少年近視的防治研究。

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