張令春，李曉天，曹鳳秋（.河南省人民醫(yī)院/鄭州大學(xué)附屬省人民醫(yī)院，鄭州450003；2.鄭州大學(xué)藥學(xué)院，鄭州 45000）

鈰是一種銀灰色的活潑金屬，可用于加速傷口愈合、治療感染、防止細(xì)菌生長[1-2]。但鈰離子單獨使用的抗菌活性較低，限制了其推廣應(yīng)用。許多研究表明，鈰離子吸收進(jìn)入動物及人體內(nèi)會對臟器細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性和遺傳毒性，并最終對動物及人體重要器官產(chǎn)生病理傷害[3-8]?；前粪奏も嬋楦嘧鳛樾麻_發(fā)的抗菌乳膏，具有穩(wěn)定的理化性能和良好的生物相容性，還具有廣譜、強效、持久的殺菌能力，主要用于治療皮膚燒傷、燙傷、陰道炎、宮頸糜爛等疾病。但是鈰在體內(nèi)大量蓄積可能產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性作用。因此本文研究了磺胺嘧啶鈰乳膏經(jīng)陰道和皮膚給藥后鈰離子在大鼠組織中的分布情況。

1 材料

1.1 儀器

Analyst 300型原子吸收分光光度計（美國PerkinElmer公司）。

1.2 藥品與試劑

磺胺嘧啶鈰乳膏（批號：110801，規(guī)格：300 mg/kg）、無鈰離子的空白乳膏均由新鄉(xiāng)華信藥業(yè)有限公司提供；硝酸鈰對照品（山東淄博瑞博康稀土材料有限公司，批號：20120110，純度：＞99.9%）；硝酸為分析純。

1.3 動物

SD大鼠36只，♀，體質(zhì)量（200±20）g，由河南省實驗動物中心提供，使用許可證號：SCXK（豫）2012A052。

2 方法與結(jié)果

2.1 鈰標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取硝酸鈰對照品0.1721 g，溶于適量去離子水中，加0.1 mol/L硝酸2.0 ml，移入100 ml棕色量瓶，用去離子水定容至刻度，再用0.1 mol/L硝酸稀釋制成質(zhì)量濃度為100 mg/L的工作溶液。使用時用0.1 mol/L硝酸將工作溶液逐級稀釋至所需濃度，將其配成標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2 分組與給藥

2.2.1 陰道給藥。取健康大鼠18只，隨機分為實驗組和正常對照組，每組9只。按預(yù)試驗結(jié)果確定有效劑量。實驗組大鼠陰道給予磺胺嘧啶鈰乳膏0.036 g/kg，正常對照組大鼠陰道給予同劑量的無鈰空白乳膏，連續(xù)給藥6 d。末次給藥后8、24、72 h分別取各組大鼠3只，處死，取心、肝、脾、肺、腎、子宮及陰道黏膜組織，待測。

2.2.2 皮膚給藥。取健康大鼠18只，隨機分為實驗組和正常對照組，每組9只。實驗組大鼠建立燙傷模型，于創(chuàng)面涂抹磺胺嘧啶鈰乳膏0.036 g/kg，正常對照組大鼠涂抹同劑量的無鈰空白乳膏。給藥后8、24、72 h分別取各組大鼠3只，處死，取心、肝、脾、肺、腎、子宮及皮膚組織，待測。

2.3 燙傷模型的建立

選用一塊大小合適的木板，根據(jù)需要的燒傷面積中間挖一個大小合適的橢圓形孔，孔中間用一根寬5 cm的寬緊帶，一端固定木板上，另一端在燙傷時刻根據(jù)動物的大小伸縮性地固定。大鼠背部預(yù)先1 d用10%硫化鈉脫毛，乙醚麻醉后仰臥位將其四肢用橡皮筋固定于木板上，使裸露的背部皮膚暴露于木板孔內(nèi)，然后將木板放置在電熱恒溫水浴鍋上，裸露的皮膚浸泡在熱水浴里，85℃燙15 s，燙傷后用紗布揩干水漬。

2.4 組織樣品處理

用不銹鋼剪刀將準(zhǔn)確稱質(zhì)量后的大鼠心、肝、脾、肺、腎、子宮及皮膚組織充分剪碎，取組織勻漿于量瓶中，加入0.1 mol/L硝酸定容至10 ml，混勻，待測。將準(zhǔn)確稱質(zhì)量后的陰道黏膜充分剪碎，取組織勻漿于量瓶中，加入0.1 mol/L硝酸定容至5 ml，混勻，待測。

2.5 測定方法

采用空氣-乙炔火焰原子吸收法測定各組大鼠各組織勻漿中鈰含量，燈電流為10 mA，狹縫寬度為0.7 nm，入射光波長為328.1 nm，重蒸餾水調(diào)零。將組織勻漿噴入火焰，記錄吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算質(zhì)量濃度。

2.6 方法學(xué)考察

取不同器官組織的空白勻漿，加入不同質(zhì)量濃度的鈰工作溶液配制成樣品溶液，依次噴入火焰，記錄吸光度，以鈰質(zhì)量濃度（c）對吸光度（A）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果回歸方程分別為肝：A＝0.105c+0.0042（r＝0.9981），腎：A＝0.147c－0.0052（r＝0.9985），心：A＝0.114c+0.0042（r＝0.9969），肺：A＝0.121c+0.0056（r＝0.9989），脾：A＝0.140c+0.0079（r＝0.9994），陰道黏膜：A＝0.120c－0.0086（r＝0.9991），皮膚：A＝0.0.1658c－0.0112（r＝0.9989），子宮：A＝0.123c－0.0053（r＝0.9984）。不同組織中鈰檢測線性范圍均為0.01～0.12 μg/ml。本方法的檢測限為0.01 μg/ml。直接稀釋處理實驗組樣品后，平行測定8次，測得RSD為9.7%（n＝8）。各樣品中鈰的絕對回收率均大于70%（n＝9）。

2.7 鈰含量測測定

取“2.2”項下各組大鼠不同時間的心、肝、脾、肺、腎、子宮、陰道黏膜/皮膚組織，按“2.4”項下方法處理，照“2.5”項下條件測定其中鈰含量。各組大鼠陰道給藥后器官組織中的鈰含量結(jié)果見表1，皮膚給藥后器官組織中的鈰含量結(jié)果見表2（表中，“-”表示低于檢測限，未檢出）。

表1 各組大鼠陰道給藥后器官組織中的鈰含量（μg/g，±s，n＝3）Tab 1 The contents of cerium in tissues and organs of rats in each group after vaginal deliver（yμg/g，±s，n＝3）

表1 各組大鼠陰道給藥后器官組織中的鈰含量（μg/g，±s，n＝3）Tab 1 The contents of cerium in tissues and organs of rats in each group after vaginal deliver（yμg/g，±s，n＝3）

器官組織24 h 72 h肝腎心肺脾子宮0.016±0.014-陰道黏膜組別實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組8 h 0.016±0.011-0.031±0.015-0.013±0.010-0.014±0.012-0.044±0.011-0.037±0.018-0.137±0.039-0.023±0.017-0.025±0.012-0.085±0.037-

表1和表2結(jié)果顯示，正常對照組大鼠各器官組織中均未檢出鈰。實驗組大鼠給藥8 h時各器官組織中均檢出鈰，含量分別為（0.013±0.006）～（0.137±0.039）μg/g；24 h時僅腎、脾、子宮、陰道黏膜/皮膚中檢出鈰，含量分別為（0.012±0.011）～（0.085±0.037）μg/g；72 h時各組織器官均未檢出鈰。

表2 各組大鼠皮膚給藥后器官組織中的鈰含量（μg/g，±s，n＝3）Tab 2 The contents of cerium in tissues and organs of rats in each group after dermal deliver（yμg/g，±s，n＝3）

表2 各組大鼠皮膚給藥后器官組織中的鈰含量（μg/g，±s，n＝3）Tab 2 The contents of cerium in tissues and organs of rats in each group after dermal deliver（yμg/g，±s，n＝3）

器官組織24 h 72 h肝腎心肺脾子宮0.012±0.011-皮膚組別實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組實驗組正常對照組8 h 0.015±0.012-0.024±0.013-0.021±0.010-0.013±0.006-0.033±0.012-0.029±0.011-0.087±0.030-0.018±0.014-0.018±0.012-0.056±0.028-

3 討論

磺胺嘧啶鈰同時具有防止感染和促進(jìn)燒傷創(chuàng)面的修復(fù)作用，因而含磺胺嘧啶鈰的敷料、婦科用藥、燙傷燒傷藥、抗菌導(dǎo)管等具有較好的發(fā)展前景。但是，如上所述，磺胺嘧啶鈰中的鈰離子可能在動植物甚至人體內(nèi)蓄積而產(chǎn)生細(xì)胞毒性和基因毒性。

本實驗通過燙傷創(chuàng)面給藥和陰道給藥2種途徑測得的結(jié)果表明，大鼠連續(xù)6 d給藥8 h后重要臟器中均檢出鈰，這進(jìn)一步證明了磺胺嘧啶鈰顆粒具有在生物體內(nèi)遷移的生物學(xué)特性。從表2中可以看出，鈰在大鼠皮膚、脾、子宮和腎的蓄積程度較高，直到24 h后都能檢測到。其中皮膚的鈰含量相對較高，這主要是由于研究中采用了燙傷創(chuàng)面給藥的方式，給藥后短時間內(nèi)皮膚中的磺胺嘧啶鈰還沒有被完全代謝，因此檢測到較高的鈰含量；但隨著時間的延長，皮膚中磺胺嘧啶鈰逐漸被吸收、代謝，至72 h后已基本檢測不到。從表1可以看出陰道黏膜的鈰含量最高，其次是脾、子宮和腎，而對心組織的蓄積作用最小。

本研究證實了磺胺嘧啶鈰在經(jīng)皮膚和陰道給藥后會進(jìn)入機體的器官組織中，但隨著時間的推移，各器官組織中的鈰含量趨于下降，分布到各臟器中的磺胺嘧啶鈰基本可以很快被代謝到體外，而不會在體內(nèi)長期蓄積。

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