張谷月 張志勇 王 曄 吳晨鵬 張 林 劉麗云 李 華 云 翔 沈福海

(唐山市工人醫(yī)院病理科，河北 唐山 063000)

結腸癌源于結腸黏膜上皮，發(fā)病率較高，對人群的影響較大〔1〕。磷酸酶與張力蛋白同源物(PTEN)是新近發(fā)現的腫瘤抑制基因，具有雙特異性磷酸酶的活性，廣泛作用于細胞信號通路中〔2〕，并通過誘導細胞周期阻滯和調節(jié)細胞凋亡發(fā)揮調節(jié)腫瘤生物學行為的作用。本研究旨在探討PTEN在結腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為揭示腫瘤的生物學行為提供理論幫助。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2006年1月1日至2007年9月1日在唐山市工人醫(yī)院普外科住院的結腸癌并行外科手術患者的存檔石蠟標本86例。納入標準:(1)符合WHO在2008年結腸癌的診斷標準，由兩位病理主治醫(yī)師再次確診分型;(2)患者術前均未接受過放療和化療;(3)臨床隨訪資料完全。其中男46例，女40 例，年齡 36 ～78〔平均(52.5±8.7)〕歲。病理類型分組:高分化25例，中分化30例，低分化31例。無淋巴結轉移46例，有淋巴結轉移組40例。選取癌旁正常組織60例(取自結腸癌患者癌旁＞5 cm組織)為切緣黏膜組，男:女=1∶1。年齡38～75〔平均(51.6±8.0)〕歲。另選取結腸腺瘤伴不典型增生60例為腺瘤組，男 ∶女 =1∶1，年齡 37 ～77〔平均(51.4±7.6)〕歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法染色及判定標準 新鮮標本常規(guī)取材后經10%中性甲醛固定，蘇木素-伊紅(HE)染色按常規(guī)步驟進行。采用免疫組化(S-P)法對PTEN蛋白進行檢測。實驗步驟按試劑盒說明書進行。兔抗人PTEN單克隆抗體購自Dako公司;SP免疫組織化學試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術有限公司。結果判定標準:PTEN主要定位于細胞質，呈棕褐色顆粒染色為陽性。每個切片于高倍鏡下隨機選取10個不重復視野計數200個細胞(對少數不足10個高倍視野的，以觀察到的最多高倍視野計算平均值)，根據陽性細胞所占百分比進行判斷。以陽性細胞所占百分比＜25%為陰性，陽性細胞數≥25%為陽性。

1.2.2 隨訪 本組患者隨訪時間為9～60個月，所有患者術后均按照美國國籍綜合癌癥網絡(NCCN)結腸癌治療指南進行隨訪。

1.3 統(tǒng)計學方法 實驗數據均應用SAS6.12軟件進行分析，組間率的比較采用χ2檢驗，并進行生存分析。

2 結果

2.1 PTEN在結腸腺癌組、腺瘤組及切緣黏膜組中的表達PTEN 在腺癌組(34.88%，30 例)、腺瘤組(68.33%，41 例)及切緣黏膜組(83.33%，50例)中的表達陽性率差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。見圖1。

圖1 PTEN在結腸腺癌組織(IHC，×200)

2.2 結腸腺癌組中PTEN的表達與臨床病理特征的關系PTEN在腺癌組分化程度、淋巴結轉移、臨床分期、腫瘤大小、浸潤深度及不同Ki-67表達的比較差別均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結腸腺癌中PTEN在分化較好、無淋巴結轉移、Ⅰ+Ⅱ期、腫瘤直徑≤3 cm、浸潤深度未達漿膜、Ki-67低表達的腫瘤中表達較高。而在不同年齡、不同性別、有無炎細胞浸潤、不同結腸部位的比較差別均無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)，見表1。

表1 PTEN在不同臨床病理特征結腸腺癌組織中的表達

2.3 結腸腺癌組中PTEN表達與預后的關系 本組患者隨訪時間為9～60個月，經生存分析顯示，結腸癌中PTEN的表達均與預后相關(P＜0.05)。PTEN低表達患者的預后差，高表達患者的預后好。見圖2。

圖2 PTEN在結腸腺癌組織中的表達與結腸腺癌患者生存時間的關系

3 討論

結腸癌在我國發(fā)病率高，臨床最常見，發(fā)病率呈上升趨勢。目前其發(fā)生、發(fā)展機制尚不清楚?？赡芘c吸煙、飲酒、飲食、空氣污染、病毒感染等因素有關〔1〕。惡性腫瘤在發(fā)生和進展過程中，受到某些異常改變基因和蛋白的異常調控，當其成分發(fā)生突變或異常表達時，結腸黏膜上皮細胞出現惡變，而腺瘤發(fā)生的不典型增生是結腸癌重要的癌前病變〔3，4〕。

PTEN作為抑癌基因，惡性腫瘤中可能存在PTEN/c-myc動態(tài)平衡〔5〕。本實驗結果說明當癌變發(fā)生時，PTEN表達逐漸丟失，提示PTEN在惡變細胞中逐漸失去抑癌的作用。PTEN抑制惡性腫瘤進展是通過抑制血管內皮生長因子(VEGF)的作用實現的〔6，7〕;即PTEN可以通過降低內皮細胞的遷移能力、增加血管內皮生長的抑制因子作用進而減少腫瘤的血管新生。還有觀點認為PTEN可以直接使磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)的D3位點去磷酸化，有效的降解絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶 B(PKB/AKT)的磷酸化水平，拮抗下游通路的轉導〔8，9〕，抑制VEGF的分泌而抑制血管的新生。PTEN通過其脂質磷酸酶活性調節(jié)局灶聚集黏附激酶對細胞與細胞間的黏附作用、細胞與細胞外基質的降解作用進行有效的調節(jié)，從而多方面調節(jié)腫瘤的生物學功能〔10，11〕。實驗結果提示PTEN表達丟失參與到結腸癌的分化、淋巴道播散、腫瘤的生長及細胞的增殖中，也提示PTEN的抑癌作用廣泛。本研究顯示，PTEN的表達與患者的預后相關，即PTEN低表達患者的預后差，因此檢測PTEN表達丟失的嚴重程度可能是判斷結腸癌預后的重要指標。

總之，PTEN在結腸癌中低表達并與結腸癌患者臨床病理特征及預后密切相關，其可能對結腸癌的進展有抑制作用，檢測PTEN蛋白表達可為結腸癌的診斷及預后評估提供幫助。

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