于慧玲 麻春杰 蓋 聰 (北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

小柴胡湯由柴胡、黃芩、人參、半夏、甘草、生姜、大棗組成，是中醫(yī)和解少陽的代表方，主治少陽病證〔1〕。本方配伍嚴(yán)謹(jǐn)，組合巧妙，具有扶正祛邪，和解少陽，疏肝利膽，通達(dá)表里陰陽，協(xié)調(diào)臟腑等多種功用，被古今臨床廣泛運(yùn)用〔2〕。近年來，有實(shí)驗(yàn)〔3〕表明小柴胡湯在治療腫瘤方面有一定的優(yōu)勢(shì)。本研究采用C6膠質(zhì)瘤大鼠模型，旨在觀察小柴胡湯對(duì)C6膠質(zhì)瘤大鼠的抑瘤作用及免疫增強(qiáng)作用。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 小柴胡湯組成:柴胡(78.125 g);黃芩3兩(46.875 g);人參 3 兩(46.875 g);清半夏半升(42 g);炙甘草3 兩(46.875 g);生姜3 兩(46.875 g);大棗(30 g)。替莫唑胺由江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司提供;ELISA試劑盒:腫瘤壞死因子(TNF)α、白細(xì)胞介素(IL)-2和IL-6均由南京建成生物有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組及模型制備〔4〕清潔級(jí)Wistar老年雄性大鼠70 只，體重(321.5±3.3)g，18 月齡，10 只作為正常對(duì)照組，60只右前肢腋窩皮下接種2×106/20 μl的C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞懸液;隨機(jī)分為腫瘤對(duì)照組、陽性藥A組(替莫唑胺;50 mg/kg)、陽性藥B組(替莫唑胺;25 mg/kg)、小柴胡湯C組(50 g/kg)、小柴胡湯D組(20 g/kg)、小柴胡湯E組(10 g/kg)。

1.3 中藥制備 小柴胡湯組成中的7味中藥，以8倍量蒸餾水浸泡30 min，加熱保持微沸30 min，過濾;殘?jiān)?倍量蒸餾水，微沸30 min，過濾，合并2次濾液，混合后濾液干燥濃縮至100 ml，即小柴胡湯E(10 g/ml);以類似方法濃縮熬制小柴胡湯D(20 g/ml);小柴胡湯C(50 g/ml);4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 給藥方法及取材 每組均分別灌胃給予生理鹽水、陽性藥A、陽性藥B、小柴胡湯C、小柴胡湯D和小柴胡湯E，連續(xù)服藥5 d，休息4 d，共給藥3次，于最后1次給藥后2 d處死動(dòng)物，眼球取血，分離血清(3 000 r/min，10 min)，標(biāo)記好后置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 體重隨時(shí)間變化的檢測(cè)方法從實(shí)驗(yàn)開始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，使用NL-200電子天平每日稱量大鼠體重。

1.5.2 腫瘤體積隨時(shí)間變化的檢測(cè)方法 從腫瘤肉眼可見至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，使用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的短徑(a)和長徑(b)，腫瘤體積公式=1/2×ab2(mm3)，記錄。

1.5.3 大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6蛋白含量的檢測(cè)方法采用ELISA試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒方法操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以s表示，采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重隨時(shí)間的變化 腫瘤對(duì)照組及小柴胡湯各劑量組大鼠的體重均隨時(shí)間呈增長趨勢(shì)(均P＜0.01)，陽性藥各劑量組大鼠的體重均隨時(shí)間呈降低趨勢(shì)(均 P＜0.01)。見圖1。

2.2 各組大鼠腫瘤體積隨時(shí)間的變化 各實(shí)驗(yàn)組大鼠的腫瘤體積均隨時(shí)間呈增長趨勢(shì)，但陽性藥各劑量組和小柴胡湯各劑量組大鼠的腫瘤體積均明顯增長緩慢，有明顯的抑瘤作用，與腫瘤對(duì)照組比較，各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)。見圖2。

圖1 體重隨時(shí)間的變化趨勢(shì)

圖2 腫瘤體積隨時(shí)間的變化趨勢(shì)

2.3 各組大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6的蛋白水平 血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與腫瘤對(duì)照組比較，小柴胡湯各劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-2、IL-6的蛋白水平均明顯升高且各劑量組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01);陽性藥各劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-6的蛋白水平均明顯降低且各劑量組之間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)。見表1。

表1 小柴胡湯對(duì)C6膠質(zhì)瘤大鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6蛋白水平的影響(s，n=10)

表1 小柴胡湯對(duì)C6膠質(zhì)瘤大鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6蛋白水平的影響(s，n=10)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.01;與腫瘤對(duì)照組比較:2)P＜0.01;與陽性藥A組比較:3)P＜0.01;與小柴胡湯C組比較:4)P＜0.01;與小柴胡湯 D 組比較:5)P＜0.01

組別 TNF-α(pg/ml)IL-2(pg/ml)IL-6(pg/ml)正常對(duì)照組 9.76±0.83 3.24±0.22 2.61±0.43腫瘤對(duì)照組 5.56±0.241) 1.82±0.171) 1.42±0.311)陽性藥 A 組 3.51±0.452) 1.08±0.312) 0.83±0.162)陽性藥 B 組 4.17±0.683) 1.33±0.423) 1.01±0.173)小柴胡湯 C 組 9.34±0.792) 2.91±0.562) 2.26±0.612)小柴胡湯 D 組 8.01±0.914) 2.37±0.264) 1.98±0.634)小柴胡湯 E 組 6.98±0.745) 2.01±0.345) 1.77±0.495)

3 討論

機(jī)體的免疫功能狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有密切關(guān)系，一旦腫瘤發(fā)生，只有不斷地調(diào)節(jié)免疫，充分發(fā)揮機(jī)體自身抗腫瘤的能力，控制轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，使癌細(xì)胞逐漸向正常細(xì)胞發(fā)生逆轉(zhuǎn)，腫瘤患者才能逐漸走向康復(fù)〔5〕。惡性腫瘤患者常有免疫力低下的狀況，因此檢測(cè)機(jī)體免疫力是評(píng)價(jià)腫瘤患者臨床用藥療效的重要指標(biāo)之一〔6〕。研究表明:IL-2對(duì)腫瘤細(xì)胞無直接的細(xì)胞毒性作用，主要通過調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，IL-2具有促進(jìn) T細(xì)胞增殖、增強(qiáng)殺傷 T細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞的活性等廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用，IL-2水平的高低是機(jī)體細(xì)胞免疫的重要標(biāo)志〔7〕。IL-6是由T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等產(chǎn)生的一種多功能細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，主要包括促進(jìn)B細(xì)胞分化;刺激B細(xì)胞分泌免疫球蛋白;刺激未成熟的胸腺細(xì)胞分化為成熟的細(xì)胞毒性T細(xì)胞;擴(kuò)大NK細(xì)胞的殺傷能力;啟動(dòng)抗病毒及抗腫瘤作用等〔8〕。TNF-α是由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)源性細(xì)胞因子，具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，增強(qiáng)T細(xì)胞、B細(xì)胞對(duì)抗原和絲裂原刺激的增殖反應(yīng)等多種生理學(xué)作用，與機(jī)體的免疫反應(yīng)也密切相關(guān)〔9〕。

小柴胡湯是《傷寒論》的著名代表方，有報(bào)道〔10〕稱該方具有預(yù)防、治療腫瘤及提高機(jī)體免疫力的作用，并且取得了很好的療效。

綜上，小柴胡湯能夠抑制腫瘤的生長，升高C6膠質(zhì)瘤大鼠血清IL-2、IL-6及TNF-α蛋白的水平，其中小柴胡湯中、高劑量組效果更顯著;推測(cè)小柴胡湯其抑瘤作用可能與促進(jìn)C6膠質(zhì)瘤大鼠免疫系統(tǒng)功能有關(guān)，具體的機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。

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3 茅 敏，付 虹，黃秀深，等.小柴胡湯誘導(dǎo)荷瘤小鼠S180細(xì)胞凋亡及對(duì)細(xì)胞周期的影響〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005;14(20):2646-8.

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8 方樂堃，潘凌霄，黎雅婷，等.復(fù)方小柴胡湯對(duì)荷EAC鼠IL-2水平和CD+4/CD+8比值的影響〔J〕.中國病理生理雜志，2007;23(9):1720-3.

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