李良波，陳聲晶，龔 成，廖 勇，袁 維，潘望平

1.湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(湖北 恩施 445000)2.湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院制劑室(湖北 恩施 445000)3.恩施自治州中心醫(yī)院(湖北 恩施 445000)4.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院(湖北 武漢 430064)

·論著·

清竇靈合劑及浸膏的急性毒理學(xué)研究

李良波1，陳聲晶2，龔 成1，廖 勇1，袁 維3，潘望平4

1.湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(湖北 恩施 445000)2.湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院制劑室(湖北 恩施 445000)3.恩施自治州中心醫(yī)院(湖北 恩施 445000)4.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院(湖北 武漢 430064)

目的 觀察清竇靈合劑及浸膏的急性毒理作用。方法 昆明種小鼠80只(雌雄各半)隨機(jī)分為4組，每組20只，清竇靈合劑組按每次0.8 mL/20 g體積灌胃給藥，24 h內(nèi)灌胃3次，每次間隔4 h。對(duì)照組1小鼠給予生理鹽水灌胃，方法、劑量同清竇靈合劑組。清竇靈浸膏組按每次0.8 mL/20 g體積灌胃給藥，1次/d，對(duì)照組2小鼠給予生理鹽水灌胃。方法、劑量同清竇靈浸膏組。觀察14 d，記錄小鼠的外觀、飲食、活動(dòng)、排泄、體質(zhì)量及死亡等情況，14 d后解剖小鼠觀察其重要臟器的變化。結(jié)果 小鼠灌服清竇靈合劑120倍臨床劑量，清竇靈浸膏162倍臨床劑量，未見明顯的急性毒性反應(yīng)。清竇靈合劑組、清竇靈浸膏組、對(duì)照組1、2一般表現(xiàn)、主要臟器均未見明顯異常改變，14 d內(nèi)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 清竇靈合劑及浸膏臨床使用劑量和給藥途徑是安全的。

清竇靈合劑；浸膏；中藥；急性毒性

慢性鼻竇炎是耳鼻喉科的常見病，臨床表現(xiàn)為間歇性或持續(xù)性鼻塞、流黏性或黏膿性鼻涕, 可伴頭痛、頭昏、嗅覺及記憶力減退，鼻后滴漏綜合征[1]，反復(fù)咳嗽，嚴(yán)重影響患者身體健康及生活質(zhì)量。有解剖異常的慢性鼻竇炎，目前公認(rèn)在鼻內(nèi)鏡下行鼻竇功能性手術(shù)治療可取得較好的臨床療效。沒有解剖異常的成人慢性鼻竇炎及兒童慢性鼻竇炎，主要以口服抗生素為主，但使用時(shí)間長，副作用大、且癥狀易反復(fù)發(fā)作，療效不甚滿意，我科應(yīng)用清竇靈合劑治療慢性鼻竇炎療效確切。為了確保本方的安全性，筆者對(duì)其急性毒性進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及受試藥物 SPF級(jí)昆明種小鼠90只，體質(zhì)量18～22 g，2月齡， 均由武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司提供。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(卾2003-0003)。動(dòng)物飼料及墊料來源同上。清竇靈合劑及浸膏由湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院制劑室生產(chǎn)(清竇靈合劑，生產(chǎn)批號(hào)：20130801，規(guī)格：每毫升含浸膏0.31 g，相當(dāng)于原藥材0.735 g。清竇靈浸膏，生產(chǎn)批號(hào)：20130801，規(guī)格：每毫升相當(dāng)于原藥材2.99 g)。0.9%氯化鈉注射液(湖北科倫藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。生產(chǎn)批號(hào)：A130706K，規(guī)格：250 mL/瓶)。實(shí)驗(yàn)小鼠按雌雄分籠，每籠5只。室溫：21～23℃，濕度：60%～75%。給藥前后，以全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。所有動(dòng)物飼料及消毒墊料一致。

1.2 方法

1.2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn) 按急性毒理實(shí)驗(yàn)方法[2-3]選用昆明種小鼠10只，雌雄各半，禁食、不禁水12 h。清竇靈合劑灌胃，按每次0.8 mL/20 g體積灌胃給藥，24 h內(nèi)灌胃3次，間隔4 h。灌胃后按常規(guī)飼養(yǎng)，并觀察小鼠的毒性反應(yīng)情況(外觀、活動(dòng)、呼吸、分泌物、排便、死亡等)，且連續(xù)稱重7 d。未測出半數(shù)致死量(LD50)，故做最大給藥量實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 最大給藥量實(shí)驗(yàn) 在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用最大給藥量法，選用昆明種小白鼠80只，隨機(jī)分為清竇靈合劑組、清竇靈浸膏組、對(duì)照組1、對(duì)照組2，每組20只，雌雄各半。給藥前均禁食、不禁水12 h。清竇靈合劑組用清竇靈合劑，按每次0.8 mL/20 g體積灌胃給藥，24 h內(nèi)灌胃3次，每次間隔4 h。對(duì)照組1用0.9%氯化鈉注射液，方法、劑量同清竇靈合劑組；清竇靈浸膏組用清竇靈浸膏，按每次0.8 mL/20 g體積灌胃給藥，1次/d。對(duì)照組2用0.9%氯化鈉注射液，方法、劑量同清竇靈浸膏組。然后觀察14 d，記錄小鼠的外觀、飲食、活動(dòng)、排泄、死亡等情況。14 d后以頸椎脫臼法處死小鼠，解剖后觀察其重要臟器(心、肝、脾、肺、腎、胃、腸等)的變化。

2 結(jié)果

2.1 一般表現(xiàn) 給藥后14 d內(nèi)，四組小鼠飲食正常，皮毛光滑，活動(dòng)自如，大小便正常，無異常分泌物，其呼吸系統(tǒng)(呼吸平穩(wěn))、神經(jīng)系統(tǒng)(未見廝打及嗜睡情況)、消化系統(tǒng)(排便正常，未見腹瀉)與泌尿系統(tǒng)(尿量及顏色正常)均未見異常。清竇靈合劑組、對(duì)照組1、對(duì)照組2小鼠全部存活。清竇靈浸膏組小鼠給藥當(dāng)日死亡3只，余全部存活。

2.2 體質(zhì)量變化情況 給藥后14 d內(nèi)，四組小鼠體質(zhì)量均增加并隨時(shí)間呈現(xiàn)遞增的趨勢(shì)，體質(zhì)量變化均在生理范圍之內(nèi)，四組體質(zhì)量增長差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。清竇靈合劑組與對(duì)照組1給藥前和給藥后7 d,14 d兩組間體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。清竇靈浸膏組與對(duì)照組2給藥前和給藥后7 d,14 d兩組間體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.3 主要臟器觀察 對(duì)喂藥后當(dāng)日死亡3只小鼠，進(jìn)行實(shí)體解剖，肉眼可見胃部脹氣，其它未見明顯異常。14 d后對(duì)四組小鼠進(jìn)行斷頸處死后，進(jìn)行實(shí)體解剖，對(duì)心、肝、脾、肺、腎、腸道進(jìn)行觀察，主要臟器外形完整，無任何不良病變，均未見臟器腫大、萎縮、出血、壞死等異常現(xiàn)象。

表1 清竇靈合劑給藥前后體質(zhì)量變化情況

3 討論

急性毒性試驗(yàn)主要是測定藥物的LD50，其中急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)[4]是最基礎(chǔ)的評(píng)價(jià)試驗(yàn)，目的就是測定藥物的LD50，初步估計(jì)藥物對(duì)靶細(xì)胞的可能的毒作用機(jī)制，為其他的毒性試驗(yàn)提供依據(jù)。

清竇靈合劑主要由蒼耳子、辛夷、白芷、黃芩、薄荷、黃芪、白術(shù)、防風(fēng)、細(xì)辛、敗醬草、川芎等10余味藥組成。該方具有清熱解毒、宣肺通竅、益氣固表、散瘀止痛等功效。蒼耳子、辛夷、白芷、薄荷相配是中藥名方蒼耳散，《濟(jì)生方》中介紹蒼耳散為中醫(yī)治療鼻炎、鼻竇炎的主要方劑，具有散風(fēng)除濕、宣通鼻竅之功效。相關(guān)研究使用此方劑治療鼻炎取得較好的療效[5]。黃芪、白術(shù)、防風(fēng)相配是中藥名方玉屏風(fēng)散，具有增強(qiáng)免疫功能，抗菌、抗病毒，抗變態(tài)反應(yīng)作用等[6]。諸藥合用符合慢性鼻竇炎疾病特點(diǎn)，將治療和預(yù)防合二為一，既有效治療又預(yù)防復(fù)發(fā)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，清竇靈合劑組小鼠全部存活，未能測出半數(shù)致死量，其每天給藥量為120 mL/kg(相當(dāng)于原藥材88.16 g/kg)，該劑量相當(dāng)于臨床用藥量的120倍(人臨床一日劑量為1 mL/kg)。清竇靈浸膏組小鼠給藥當(dāng)日死亡3只，余全部存活，不能測出半數(shù)致死量，其每天給藥量為40 mL/kg(相當(dāng)于原藥材119.6 g/kg)，該劑量相當(dāng)于臨床人用藥量的162倍(人臨床一日劑量為0.735 g原藥材/kg)。在給藥期間，小鼠的一般表現(xiàn)正常，體質(zhì)量變化均在生理范圍之內(nèi)，四組體質(zhì)量增長差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。清竇靈合劑組與對(duì)照組以及清竇靈浸膏組與對(duì)照組間體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。主要臟器肉眼觀察未見明顯異常，提示本藥毒性低，其臨床用藥劑量是一個(gè)較安全的劑量，臨床用藥較安全。同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)，在給藥期間，小鼠精神狀態(tài)較穩(wěn)定，未見撕咬等情況，提示本藥未見精神毒性作用。通過上述分析，清竇靈合劑擬定劑量及途徑在臨床應(yīng)用上是較安全的。

[1] 蔡林利,王小銘.112例鼻后滴漏綜合征治療分析[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2010，24(14)：636.

[2] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005：1-3.

[3] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:107-113.

[4] 張?zhí)炝?急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)替代測試方法進(jìn)展[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇，2008:1 225-1 228.

[5] 譚周立，張亞軍.蒼耳散加減治療慢性鼻炎63例[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2008,24(6):360.

[6] 李丹青，路廣余，張亞琴，等.頭孢丙烯與玉屏風(fēng)散聯(lián)合治療急性細(xì)菌感染性鼻竇炎的臨床研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013，23(24):6 106-6 107.

A Study on Acute Toxicity of Traditional Chinese Medicine Mixture and Extractum Qing Douling

LI Liang-bo1,CHEN Sheng-jing2,GONG Cheng1,etal.

(1.DepartmentofOtorhinolaryngology,UniversityHospitalofHubeiUiversityforNationalities,Enshi445000,China;2.DepartmentofPharmaceuticalPreparation,UiversityHospitalofHubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China)

Objective To observe the acute toxicity of the Traditional Chinese Medicine mixture and extractum of Qing Douling. Methods 80 Kunming mice to (male and female half) were randomly divided into four groups, each group of 20.The Group of Traditional Chinese Medicine mixture of Qing Douling was treated with Traditional Chinese Medicine mixture of Qing Douling with a dosage of 0.8 mL/20 g to fill the stomach, 3 times within 24 hours with an interval 4 h. The same dosage of Saline solution was used to fill the stomach in Control group I as in the group of Traditional Chinese Medicine mixture of Qing Douling. Extractum of Qing Douling group was treated with Extractum of Qing Douling with a dosage of 0.8 mL/20 g to fill the stomach, once a day. The same dosage of Saline solution was used to fill the stomach in Control group II as in the group of extractum of Qing Douling. The appearance, diet, activity, excretion, body weight and death in mice within 14 days were observed. The changes in vital organs (heart, liver, spleen, lung,kidney, stomach, intestines, etc.) were observed after anatomy.Results No obvious acute toxicity reaction was observed in the mice treated with the Traditional Chinese Medicine mixture of Qing Douling to fill the stomach,120 times of clinical dosage. The same is true of the mice treated with extractum of Qing DouLing to fill the stomach, 162 times of clinical dosage.The general feature and main organs in the experimental group and control group showed no obvious change, and no statistically significant difference in body weight was observed in experimental groups and control groups within 14 days (P>0.05).Conclusion It is clinically safe to administer Traditional Chinese Medicine mixture of Qing Douling Prescription with such dosage in this way.

Traditional Chinese medicine mixture of Qing Dou Ling;Traditional Chinese medicine; Acute toxicity

湖北省教育廳科研項(xiàng)目(B20101908)

李良波(1973- )，男，湖北十堰人，副主任醫(yī)師，碩士，研究方向：耳鼻咽喉頭頸外科臨床。

R285.5

A

1008-8164(2014)01-0001-03

2013-12-16]