林喜爵

（東興市東興鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西東興 538199）

豬鏈球菌病的診斷與藥敏試驗

林喜爵

（東興市東興鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西東興 538199）

本試驗采取流行病學(xué)調(diào)查、臨床表現(xiàn)、病理剖檢、現(xiàn)場診斷、實驗室生化鑒定等方法對東興市某2個豬場的發(fā)病豬進(jìn)行診斷，選取6例疑似為豬鏈球菌感染的病豬進(jìn)行采樣、分離、培養(yǎng)，通過實驗室生化試驗、動物致病性試驗等系統(tǒng)鑒定，確診為豬鏈球菌Ⅱ型，并通過藥敏試驗，最終確定豬鏈球菌病毒對頭孢菌威和環(huán)丙沙星高度敏感，對青霉素和卡那霉素中度敏感，而對土霉素、鏈霉素、慶大霉素為耐藥性，從而為臨床應(yīng)用提供了科學(xué)的方法。

鏈球菌；藥敏試驗；生化鑒定

豬鏈球菌病是由幾種不同的血清型鏈球菌感染所引起的多種病癥的總稱，是豬的一種常見病。急性的通常表現(xiàn)為出血性敗血癥和腦炎，慢性的以關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、化膿性淋巴節(jié)炎為特征。

1 材料和方法

1.1 試驗藥品與器材

1.1.1 病料

來自東興市3個豬場的疑似鏈球菌病料1# 2# 3# 4# 5# 6#。分別取于心血、肝、脾、肺及腸系膜淋巴結(jié)等。

1.1.2 培養(yǎng)特性用培養(yǎng)基

普通瓊脂平板 鮮血瓊脂平板 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基均是自行配置。

1.1.3 試驗藥物

青霉素 土霉素 環(huán)丙沙星 鏈霉素慶大霉素 卡那霉素 頭孢菌素。

1.1.4 試驗動物

健康小白鼠（30～50g）10只。

1.2 方法

1.2.1 涂片鏡檢

無菌采集急性死亡的病豬心血、肝、肺、脾及腸系膜淋巴結(jié)等病料，制作肝、脾臟的觸片，用關(guān)節(jié)液、心血涂片，干燥、火焰固定后進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌采集的肝、肺、脾及腸系膜淋巴結(jié)關(guān)節(jié)液等病料分別劃線接種鮮血瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h后，挑取平板上表面光滑、灰白透明單個可疑菌落接種于THB肉湯做純培養(yǎng)，37 ℃培養(yǎng)24 h后，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。

1.2.3 生化試驗

用分離菌純培養(yǎng)物進(jìn)行乳糖、蔗糖、山梨醇、棉子糖、葡萄糖、甘露醇、木糖等生化試驗。

1.2.4 培養(yǎng)特性

取單個保存好菌落分別在普通瓊脂平板 鮮血瓊脂平板麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)及65 g/L的Nacl和pH 9.6的生長耐性試驗。24h后觀察。

1.2.5 動物致病性實驗

健康小白鼠10只，隨機分為兩組，每組5只，其中實驗組腹腔注射上述肉湯培養(yǎng)物0.5ml/只；另外一組注射無菌生理鹽水1ml/只做對照。觀察其死亡和發(fā)病情況。

1.2.6 藥敏試驗

在超凈臺中，用經(jīng)酒精燈火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使能準(zhǔn)確的觀察結(jié)果，要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼七片），對藥敏片進(jìn)行標(biāo)記，將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 流行病學(xué)調(diào)查

2013年2月廣西東興市某2個豬場仔豬突然發(fā)生死亡，母豬病初體溫升高，關(guān)節(jié)腫脹，不能站立，有時出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。母豬病2頭，育肥豬發(fā)病4頭，仔豬發(fā)病28頭，總共發(fā)病230頭，死亡5頭。其發(fā)病率為12%，死亡率為14.7%。該兩個豬場的飼養(yǎng)管理較為混亂，曾使用過豬瘟疫苗、鏈球菌疫苗、藍(lán)耳疫苗進(jìn)行防疫。發(fā)病后用多種抗生素和磺胺類藥物治療，效果不佳。

2.2 臨床表現(xiàn)

母豬表現(xiàn)為精神沉郁，體溫升高達(dá)43℃，出現(xiàn)稽留熱，食欲不振，眼結(jié)膜潮紅，流淚，鼻腔中流出漿液性或膿性分泌物，呼吸急促，耳廓、腹下及四肢下端皮膚呈紫紅色，有出血點，出現(xiàn)跛行，病程稍長，多在1～3d內(nèi)死亡。哺乳仔豬和斷奶仔豬，主要表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀，如運動失調(diào)、盲目走動、轉(zhuǎn)圈、空嚼、磨牙、仰臥，后軀麻痹，側(cè)臥于地、四肢劃動，似游泳狀，病程短的幾小時，長的1～5d，致死率極高。個別豬在頜下、咽部、頸部等處的淋巴結(jié)化膿和形成膿腫，病程3～5周。

2.3 病理剖檢

剖檢可見鼻黏膜紫紅色、充血及出血，喉頭、氣管充血，常有大量泡沫。肺充血腫脹。全身淋巴結(jié)有不同程度的腫大、充血和出血。胃和小腸黏膜有不同程度的充血和出血，腎腫大、充血和出血。個別腦膜下積液，腦組織切面有點狀出血。關(guān)節(jié)腔內(nèi)有黃色膠胨樣或纖維素性、膿性滲出物，淋巴結(jié)膿腫。有些病例心瓣膜上有菜花樣贅生物。

2.4 實驗室檢查結(jié)果

2.4.1 涂片鏡檢

將疑似病料涂片革蘭氏染色后鏡檢，發(fā)現(xiàn)病料中含有大量的呈3～6個左右的短鏈、個別單個排列的球菌。

2.4.2 實驗室生化試驗結(jié)果

項目蔗糖山梨醇乳糖葡萄糖麥芽糖甘露醇淀粉1#++++++-2#++++++-3#++++++_ 4#++++++-5#++++++-6#++++++-

判定標(biāo)準(zhǔn)：+示大多數(shù)（90～100%）菌株為陽性，“-”表示大多數(shù)（90～100%）菌株陰性

2.4.3 培養(yǎng)特性

分離菌為兼性厭氧菌，無運動性：在普通營養(yǎng)瓊脂平板上生長極貧瘠，培養(yǎng)2 4 h后僅在劃線處見有針尖大小的菌落；血清肉湯中血清肉湯渾濁，不形成菌膜，培養(yǎng)48 h后上清較透明。在麥康凱瓊脂平板上不生長。生理特性是在PH=9.6肉湯中經(jīng)30min后移植到鮮血瓊脂平板上仍能繼續(xù)生長，在pH=9.6的葡萄糖肉湯中生長表現(xiàn)為上液澄清，在6.5%NaCl中生長狀態(tài)為均勻渾濁。

2.4.4 動物致病性結(jié)果

實驗組5只小白鼠在接種后36-84h呈現(xiàn)不同癥狀的變化，其中2只分別于48h、72h后死亡。另外3只表現(xiàn)為食欲減退、精神沉郁，額下淋巴結(jié)腫脹。剖檢死亡小白鼠發(fā)現(xiàn)其肝、脾、腎腫大，膀胱高度充盈，胸腔積液，心冠脂肪出血。剖檢未死亡小白鼠發(fā)現(xiàn)其腎臟充血腫大，胃和小腸黏膜有不同程度的充血和出血。無菌采取心血及胸腔積液涂片，革蘭氏染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)有大量單個、個別呈4-6個左右的短鏈革蘭氏陽性球菌。對照組臨床癥狀和剖檢均未見異?，F(xiàn)象。

2.4.5 藥敏試驗結(jié)果

注：抑菌直徑小于10mm為耐藥，10～15的為中度敏感，大于15mm的為高度敏感

結(jié)果表明：敏感的藥物依次是：頭孢菌威和環(huán)丙沙星。中度敏感的是青霉素和卡那霉素，而對土霉素、鏈霉素、慶大霉素為耐藥性。此為臨床用藥提供了科學(xué)依據(jù)。

3 討論

綜合臨床診斷、分離菌株的形態(tài)染色特性、培養(yǎng)特性、生化特性及動物實驗，確診本次病原為鏈球菌。豬鏈球菌極易產(chǎn)生耐藥性，應(yīng)該采取藥敏實驗選出敏感藥物進(jìn)行治療，方能起到較好的效果。本次藥敏試驗結(jié)果表明豬鏈球菌病毒對頭孢菌威和環(huán)丙沙星高度敏感，對青霉素和卡那霉素中度敏感，而對土霉素、鏈霉素、慶大霉素為耐藥性。分群鑒定鏈球菌的方法有血清學(xué)試驗和生化試驗。其中血清學(xué)試驗比較簡單可靠，但標(biāo)準(zhǔn)陽性血清不易獲得；生化試驗只能鑒定到群，無法進(jìn)行定性鑒定。豬場應(yīng)建立健全嚴(yán)格的消毒制度，一旦發(fā)現(xiàn)病豬應(yīng)隔離治療；對病死豬做無害化處理以防病原擴散；對被病原污染的圈舍、場地、用具等進(jìn)行嚴(yán)格消毒。預(yù)防本病的疫苗很多主要分為滅活苗和亞單位疫苗兩種類型。由于本菌血清型多，不同血清性菌株之間交叉免疫性又不強，因此滅活苗主要從當(dāng)?shù)胤蛛x菌株制備而成，對母豬和2月齡豬進(jìn)行免疫接種，能有效控制本病的發(fā)生。此外，對無病豬場應(yīng)防止引進(jìn)帶菌豬，引進(jìn)前進(jìn)行血清學(xué)試驗進(jìn)行檢疫，對感染豬場逐頭進(jìn)行檢疫，清除陽性帶菌豬。

4 小結(jié)

本實驗從流行特點、病理變化、臨床癥狀等方面進(jìn)行研究，并通過生化試驗、細(xì)菌培養(yǎng)進(jìn)行鑒定，從多個方面進(jìn)行闡述，并對病豬進(jìn)行采樣、分離、培養(yǎng)，通過培養(yǎng)特性、菌體形態(tài)、菌落形態(tài)、染色特性、生化試驗、動物致病性試驗等系統(tǒng)鑒定，確診為豬鏈球菌2型，通過藥敏試驗，確定鏈球菌對頭孢菌威、環(huán)丙沙星、青霉素、卡那霉素、土霉素、鏈霉素、慶大霉素的抑菌直徑平均值為15.25mm、18.9mm、13.07 mm、12.2mm、7.9mm、7.07mm、7.77mm。最終確定鏈球菌對頭孢菌威和環(huán)丙沙星最為敏感，對土霉素、鏈霉素、慶大霉素為耐藥性，從而為臨床用藥提供了科學(xué)依據(jù)。