林志謙 黃長春 吳秋玉 鄭遠(yuǎn)鵬

（福建泉州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建泉州 362000）

泉州市2010～2012豬繁殖與呼吸綜合征的血清學(xué)調(diào)查

林志謙 黃長春 吳秋玉 鄭遠(yuǎn)鵬

（福建泉州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建泉州 362000）

為初步了解該病在泉州市的流行情況，以科學(xué)有效地防控豬繁殖于呼吸綜合征，本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）方法對(duì)2010年-2012年泉州市洛江、泉港、臺(tái)商區(qū)等9個(gè)縣（市、區(qū)）來源的199個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的共2116分血清進(jìn)行PRRSV抗體檢測(cè)，結(jié)果1588份血清樣品抗體陽性，陽性率為75.05%，其中免疫豬和非免疫豬血清抗體陽性率分別為81.93%和15.51%，規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶的陽性率分別為80.51%和47.11%。

豬繁殖與呼吸綜合征；監(jiān)測(cè)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由動(dòng)脈炎病毒科、動(dòng)脈炎病毒屬的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以豬繁殖障礙和呼吸道疾病為主要臨床表現(xiàn)的急性、高度傳染的病毒性傳染病[1]。國際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將該病列為 B 類傳染病，我國也將其列為二類傳染病。高致病性豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異毒株（HP-PRRSV）引起的一種急性高死亡率豬傳染病，我國將其列為一類傳染病[2]。

ELISA檢測(cè)法具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、快速等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于PRRSV的血清抗體檢測(cè)。2010年～2012年，本中心對(duì)泉州市9個(gè)縣（市、區(qū)）的199個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）2116份豬血清樣品用ELISA方法進(jìn)行PRRSV抗體檢測(cè)，對(duì)臨床免疫效果進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。現(xiàn)將調(diào)查結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 被檢血清

選擇轄區(qū)內(nèi)2010年至2012年部分具有代表性的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）各類存欄豬，無菌采血，分離血清備用。樣品采樣單詳細(xì)記錄豬群存欄量、豬只編號(hào)、日齡和各種疫苗免疫情況。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 試劑

豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒（法國LSI批號(hào)：Q9Y8K、2-VETPRA、2-VETPRA-020、2-VETPRA-022等）。

1.2.2 主要儀器

Sunrise酶標(biāo)儀（TECAN公司）；IEC-3593離心機(jī)（美國國際設(shè)備公司）；LRH-250A生化培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器械廠）；Milli-QG超純水機(jī)（美國milioroe公司）；eppendorf可調(diào)單道、多道移液槍（德國）。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 試劑準(zhǔn)備 所有試劑室溫下回溫30min，將洗液、樣本稀釋液稀釋至實(shí)驗(yàn)濃度。

1.3.2 樣品的前處理 對(duì)待檢血清用樣本稀釋液進(jìn)行20倍稀釋，陽性對(duì)照和陰性對(duì)照不必稀釋。

1.3.3 操作步驟

（1）揭去反應(yīng)板上的粘貼膜，用樣品稀釋液將已稀釋20倍的待檢血清1：10稀釋后加入待檢樣品孔內(nèi)，每孔加入50μl；同時(shí)加入陰、陽性對(duì)照血清，陰陽性對(duì)照血清各2孔，每孔加50μl，輕輕震蕩均勻后貼上封板膜于37℃±2℃孵育1h。

（2）去膜，倒去孔中溶液，用配制好的洗液每孔200μl洗3遍，甩掉液體后在吸水紙上用力拍干，然后在每個(gè)孔中添加50μl酶標(biāo)二抗，震蕩均勻后用心的封板膜封板，在37℃±2℃孵育1h。

（3）去膜，用配制好的洗液再每孔200μl洗3遍，甩掉液體后在吸水紙上用力拍干，然后每孔添加50μl底物溶解液，輕搖板2sec，將平板放在黑暗條件下21℃±4℃作用10min。

（4）每孔添加50μl終止液（添加終止液的順序應(yīng)與添加其他樣品的順序一致），輕敲平板2sec混勻，并在30min內(nèi)450nm波長測(cè)定結(jié)果。

1.3.4 結(jié)果判定

實(shí)驗(yàn)的有效性：陽性對(duì)照的平均值OD450＞0.6，而且陽性對(duì)照平均值OD450/陰性對(duì)照平均值OD450＞4.0。

判定：IRPC=[（OD450樣品-OD450陰性對(duì)照平均值）/（OD450樣品-OD450陽性對(duì)照平均值）]×100

IRPC≤20.0，判為陰性；IRPC＞20.0，判為陽性。

2 結(jié)果

對(duì)2010～2012年間所采集的199戶的2116份血清樣品進(jìn)行PRRS抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果根據(jù)不同地區(qū)、疫苗使用狀況、養(yǎng)殖規(guī)模（年出欄500頭）等劃分，詳細(xì)結(jié)果見表1，2，3，4，5。

2.1 不同地區(qū)抗體檢測(cè)結(jié)果

從表1可以看出，泉州市2010～2012年間，199戶2116份血清樣品，PRRS抗體陽性率為75.05%（1588/2166），最低PRRS抗體陽性率為63.5%，最高為91.67%。說明養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）整體免疫抗體水平一般，各地區(qū)PRRS抗體水平程度不一，免疫效果還有待提高。

表1 不同地區(qū)血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同免疫狀況抗體檢測(cè)結(jié)果

從表2可以看出，免疫豬群的PRRS抗體陽性率為81.93%，說明免疫后豬群的豬群免疫效果較好；未免疫豬群抗體陽性率為15.51%，說明養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）可能存在PRRSV感染。

2.3 不同養(yǎng)殖方式抗體檢測(cè)結(jié)果

從表3，4，5可以看出規(guī)模場(chǎng)的抗體陽性率80.51%遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于散養(yǎng)戶的抗體陽性率47.11%；已免疫PRRS疫苗的規(guī)模場(chǎng)豬群抗體陽性率85.71%，未免疫規(guī)模場(chǎng)的抗體陽性率為19.42%；散養(yǎng)戶已免疫豬群和未免疫豬群的抗體陽性率分別為63.33%和10.38%。具體檢測(cè)結(jié)果見下表。

表2 不同免疫狀況血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 不同養(yǎng)殖模式血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表4 規(guī)模場(chǎng)血清抗體檢測(cè)結(jié)果

3 分析與討論

（1）由于近幾年來PRRSV疫苗的漸漸普及使用，多數(shù)養(yǎng)殖戶，特別是規(guī)模場(chǎng)都將疫苗接種作為預(yù)防動(dòng)物疫病的重要手段之一。在2010～2012期間，從199個(gè)規(guī)模不同養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）共采集2166份血清，共有1588份陽性血清，陽性率為75.05%。這比2011年彭曉鈴等[3]報(bào)道的免疫抗體陽性率80.9%低，比2010常洪濤等[4]和2011年曾顯成[5]等報(bào)道的抗體陽性率61.44%和69.29%高，與2013年費(fèi)強(qiáng)[6]報(bào)道的抗體陽性率75.1%基本一致。從養(yǎng)殖地區(qū)來看，泉港和臺(tái)商區(qū)血清抗體陽性率分別為86.34%和91.67%，而惠安和安溪僅為68.22%和63.5%。影響免疫效果的原因存在多方面的因素，比如疫苗質(zhì)量、免疫程序、母源抗體干擾、接種方法、動(dòng)物個(gè)體差異等等。為保證免疫效果，必要時(shí)可跟進(jìn)監(jiān)測(cè)，查明原因，及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免或加強(qiáng)免疫。

（2）從養(yǎng)殖規(guī)模來看，PRRSV的抗體陽性率規(guī)模場(chǎng)明顯高于散養(yǎng)戶，我市生豬養(yǎng)殖規(guī)?；潭缺容^高，規(guī)模場(chǎng)都采取自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式，管理也比較規(guī)范，生物安全措施相對(duì)落實(shí)都較到位，血清抗體陽性率也就較高，為80.51%，比2011年曾顯成[5]報(bào)道的抗體陽性率83.38%稍低，而專業(yè)戶或散養(yǎng)戶多數(shù)養(yǎng)殖條件比較差，設(shè)備設(shè)施簡(jiǎn)陋，管理粗放，防疫技術(shù)力量薄弱，免疫程序不規(guī)范，這可能是造成抗體陽新率低的原因。

表5 散養(yǎng)戶血清抗體檢測(cè)結(jié)果

（3）本次采集的已免疫的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）1631份血清中檢測(cè)出1398份陽性血清，抗體陽性率為85.71%，47個(gè)未免疫的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）245份血清中檢出38份PRRSV抗體陽性血清，抗體陽性率為15.51%，比2008年楊小燕等[7]報(bào)道的和2011年曾顯成[5]報(bào)道的61.9%和47.43%低得多。造成未免疫抗體檢測(cè)陽性的原因可能是新生仔豬攜帶的母源抗體造成的，也可能是感染PRRSV引起的。

（4）未免疫的規(guī)模場(chǎng)豬血清PRRSV抗體陽性率19.42%高于未免疫散養(yǎng)豬血清抗體陽性率10.38%，洛江惠安未免疫規(guī)模場(chǎng)的血清抗體陽性率分別達(dá)到33.33%和27.59，說明PRRSV在規(guī)模場(chǎng)感染還是存在的，個(gè)別場(chǎng)會(huì)相對(duì)嚴(yán)重。

由于PRRSV康復(fù)豬可長期帶毒，規(guī)模場(chǎng)一般又自繁自養(yǎng)，若前期感染PRRSV后沒采取凈化措施，則可能存在持續(xù)性感染。而散養(yǎng)豬相對(duì)管理松懈，一大部分沒飼養(yǎng)母豬，直接外面購買豬群飼養(yǎng)。當(dāng)外源場(chǎng)PRRSV感染率低或者沒有感染時(shí)，則散養(yǎng)場(chǎng)（戶）的感染也相對(duì)較低。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善飼養(yǎng)環(huán)境，完善免疫程序，降低養(yǎng)殖密度，嚴(yán)格實(shí)行消毒制度，嚴(yán)格實(shí)施疫病凈化等防治措施。

[1] 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)（第四版）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：211-213.

[2] 彭曉鈴，邵劍挺，盛卓君，等.2011年新疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體分析[J].中國動(dòng)物檢疫，2012，29（8）：54-55.

[3] 曾顯成，陳曉實(shí)，羅先，等.豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）抗體水平檢測(cè)與分析[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，26（4）：552-556.

[4] 常洪濤，姚惠霞，李鴻雁，等.河南省部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)繁殖障礙性疫病的血清學(xué)調(diào)查[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（34）：19521-19522，19525.

[5] 費(fèi)強(qiáng).呂梁地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)藍(lán)耳病抗體水平監(jiān)測(cè)[J].中國動(dòng)物保健，2013，15（6）：47-48.

[6] 楊小燕，李曉華，戴愛玲，等.閩西地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征的血清流行病學(xué)調(diào)查[J].龍巖學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，26（3）：74-76.

林志謙（1979-），男，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。

黃長春（1983-），男，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。