魏 蘭

（江蘇大豐市大橋鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇大豐 224100）

對籠養(yǎng)產(chǎn)蛋雞巴氏桿菌病診治技術的思考

魏 蘭

（江蘇大豐市大橋鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇大豐 224100）

大豐市某禽場4 000只49周齡籠養(yǎng)產(chǎn)蛋雞，發(fā)生以產(chǎn)蛋急劇下降，死亡數(shù)增加，卵巢輸卵管病變以及卵黃性腹膜炎為主的病情。發(fā)病2周，產(chǎn)蛋率下降了28%，死亡率為12%。從患病死亡雞肝臟分離到一株細菌，經(jīng)細菌形態(tài)、培養(yǎng)特性、生化鑒定、動物接種等試驗，診斷為雞巴氏桿菌病。

產(chǎn)蛋雞；巴氏桿菌?。辉\治

2014年11月初，大豐某禽場4 000只49周齡的籠養(yǎng)產(chǎn)蛋雞，發(fā)生產(chǎn)蛋率下降、死亡率升高的病情，發(fā)病2周，產(chǎn)蛋率下降28%，死亡率為12%。發(fā)病初期曾懷疑是慢性禽流感或新城疫，進行緊急接種，但未能控制病情，后經(jīng)病原分離培養(yǎng)鑒定，確定為雞巴氏桿菌病。連續(xù)5d使用強效卵管通（主要成分是鹽酸洛美沙星）、卵管康（主要成分是氟甲喹）等藥物，1周后病情得到控制?，F(xiàn)將發(fā)病經(jīng)過及診治過程歸納如下。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料

普通瓊脂、XLD瓊脂（木糖-賴氨酸-脫氧膽鹽瓊脂）、普通肉湯、麥糠凱瓊脂、生化反應套管均購于廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；藥敏試紙購自杭州天和微生物試劑有限公司。按常規(guī)方法配制5%小牛血清營養(yǎng)瓊脂、5%雞血液營養(yǎng)瓊脂、革蘭氏染色液、瑞氏染色液。體重20～24g的小白鼠由仲愷農(nóng)業(yè)工程學院動物科學實驗室提供。

1.2 剖檢及取樣

現(xiàn)場觀察籠養(yǎng)發(fā)病雞的臨床癥狀，剖檢新鮮死亡的雞20只，并記錄病理變化。進行肝臟細菌分離，用無菌棉拭子自肝臟燒烙面插入取得樣品分別劃線于普通瓊脂、XLD瓊脂、血清瓊脂、血液瓊脂，以及營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)24h，并取少量肝組織用于病毒分離培養(yǎng)。

1.3 病原細菌的分離鑒定

肝組織觸片，瑞氏染色，顯微鏡下觀察細菌形態(tài)；肝組織分離的細菌株經(jīng)純繁培養(yǎng)2代次后的純培養(yǎng)物涂片、革蘭氏染色，顯微鏡下觀察純培養(yǎng)細菌形態(tài)，并進行常規(guī)生化試驗。

1.4 病毒增殖培養(yǎng)與檢驗

雞肝病料剪碎、研磨，加4倍體積的滅菌生理鹽水制成肝懸液，反復凍融3次，3 000rpm離心15min，上清液通過細菌濾器后接種孵化10日齡雞胚5只，收獲接種后24～72h死亡或活胚的胚液，進行微量血凝試驗（HA），以檢驗是否含血凝性病毒。

1.5 動物接種試驗及HI檢測

肝懸液經(jīng)滴管直接插入食道深處的灌服途徑接種3周齡的雞4只，每只5ml，并以皮下注射0.2ml/只的途徑接種小白鼠8只。細菌純培養(yǎng)物懸液以皮下注射0.2ml/只的途徑接種小白鼠4只。接種動物觀察2周，對死亡動物進行肝臟細菌分離培養(yǎng)，肝臟觸片檢查細菌。對接種2周后仍存活的雞抽血檢測禽流感H5、H9和新城疫的HI抗體水平。

1.6 藥敏試驗

選擇常用藥物的藥敏試紙對分離菌株進行藥物敏感檢測，包括：頭孢拉定、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星，利福平、慶大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、新霉素、安卞青霉素、壯觀霉素、四環(huán)素、麥迪霉素、強力霉素、林可霉素、阿莫西林、鏈霉素、紅霉素、青霉素、先鋒必、先鋒V、痢特靈。采用藥敏試驗圓紙擴散法，在血清瓊脂平皿涂布，貼放藥敏試紙，37℃培養(yǎng)24h，測量抑菌圈直徑（mm），對照抑菌圈直徑判斷標準，參照抗菌藥物敏感性試驗執(zhí)行標準，分敏感、中等敏感和耐藥3個等級判斷藥敏試驗結果。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀及剖檢病理變化

49周齡產(chǎn)蛋雞群突然發(fā)病，發(fā)病的產(chǎn)蛋雞精神沉郁，叫聲減少，頸羽豎起，食欲減退，拉白色或黃綠色水樣稀糞，個別患病雞呈現(xiàn)踝關節(jié)和腳墊腫脹。平均日采食量由110g/d下降至75g/d，產(chǎn)蛋率由發(fā)病前的57%下降至28%，死亡率由正常時的每天低于0.25%提高到1～2%。同舍飼養(yǎng)的公雞，以及同場不同舍飼養(yǎng)的后備雞、雉雞均不發(fā)病。

剖檢見大多數(shù)死亡雞呈現(xiàn)卵黃性腹膜炎和輸卵管炎，成熟卵泡松軟、卵泡表面充血、出血、變形、卵黃色澤變淡或呈水囊樣變性，腹腔中積聚多量水樣或干酷樣卵黃性物質。輸卵管和子宮內有白色透明的水樣積液；部分死雞呈現(xiàn)心包液增多，心肌和心冠脂肪出血，肺臟充血出血呈紫黑色，十二指腸黏膜充血、出血，部分腸腔內有多量血樣黏液積聚；肝臟稍腫大，質脆，缺乏彈性。有個別的腺胃黏膜脫落，肌胃角質膜下見出血斑點；盲腸腫脹，腸腔充滿氣體；偶見個別胰腺表面有點狀出血或壞死。

2.2 病原菌分離培養(yǎng)特性

從死亡雞肝臟分離到一株細菌，初次分離菌株經(jīng)37℃培養(yǎng)24h，在普通瓊脂斜面上生長呈現(xiàn)較薄菌苔；在普通肉湯中呈現(xiàn)均勻混濁生長；在血清和血液培養(yǎng)基上生長呈灰白色、圓形、光滑、濕潤、隆起、邊緣整齊的露滴狀小菌落，直徑約1mm，血液培養(yǎng)基上菌落周圍不溶血。初次分離在麥糠凱和XLD培養(yǎng)基上不生長，經(jīng)血清瓊脂3代次純繁培養(yǎng)后，以及從接種小白鼠肝臟回歸分離的血液瓊脂培養(yǎng)物，均能在麥糠凱和XLD上生長呈灰白色菌落。

2.3 細菌形態(tài)及生化反應結果

臨床發(fā)病雞肝臟觸片，接種小白鼠肝臟觸片，染色鏡檢，看到呈單個或成雙存在的小桿菌，明顯兩極著色，有的見有莢膜。初次分離的血清培養(yǎng)物、普通瓊脂培養(yǎng)物、純繁培養(yǎng)物、攻毒小白鼠肝分離細菌培養(yǎng)物中，均見菌體呈革蘭氏陰性小桿菌，多單個存在，兩極著色，有些菌體呈圓形、卵圓形或桿形，圓形或卵圓形的菌體有類似雙球菌狀的。

生化反應結果表明，分離菌株可發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖；不能利用甘露醇、乳糖，靛基質呈陽性，V.P和M.R陰性。

2.4 病毒檢測結果

通過無菌濾器的濾液接種5枚孵化10日齡雞胚，72h后仍存活，5個雞胚的胚液HA檢測結果均呈陰性，表明肝懸液濾液中無血凝性病毒存在。

2.5 動物接種試驗

3周齡的雞接種肝懸液后，觀察2周無發(fā)病癥狀，接種2周后抽血檢測禽流感H5和H9的HI抗體滴度均 ≤1∶16，新城疫HI抗體滴度≤1∶16，表明接種雞沒有感染禽流感H5、H9和新城疫。

肝懸液接種小白鼠，在接種后4d死亡，分離菌株培養(yǎng)物接種小白鼠在接種后16～20h死亡，死亡小白鼠肝觸片染色鏡檢看見兩極著色的單個或成雙存在的桿菌，死亡小白鼠肝臟分離到灰白色、濕潤、光滑、隆起、邊緣整齊的菌落，革蘭氏染色細菌呈紅色小桿菌，單個或成雙存在，兩極著色。

2.6 藥敏試驗結果

對分離株敏感的藥物有：頭孢拉定、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、壯觀霉素、鏈霉素和先鋒V；中等敏感的藥物有：利福平、慶大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、新霉素、痢特靈；耐藥的藥物有：安卞青霉素、四環(huán)素、麥迪霉素、強力霉素、林可霉素、阿莫西林、紅霉素、青霉素和先鋒必。

3 結論與討論

病毒檢測結果排除了禽流感和新城疫的可能性，病原菌的分離培養(yǎng)、形態(tài)特征、生化反應、動物接種試驗結果表明該病情是由禽巴氏桿菌引起的雞巴氏桿菌病。

禽巴氏桿菌的宿主很多，幾乎所有的鳥類都易感。性成熟的雞比青年雞易感。該病多發(fā)生于產(chǎn)蛋禽群，并常引起產(chǎn)蛋下降和局部持續(xù)性感染。本診斷過程發(fā)病雞病料肝患液直接食道灌服接種3周齡雞不發(fā)病，可能是因為幼齡雞易感性低，以及禽巴氏桿菌的感染門戶是口腔和喉頭黏膜而不是食道、嗉囊和脾胃。

在我國，散養(yǎng)或放牧飼養(yǎng)的種禽較常發(fā)生巴氏桿菌病，而集約化層籠飼養(yǎng)的種禽發(fā)生巴氏桿菌病例報道較少。初冬氣溫驟降的應激，增加了雞對巴氏桿菌的易感性，暴發(fā)了此次病情，經(jīng)過病原分離鑒定，確診為雞巴氏桿菌病。該病情的主要特點是：僅產(chǎn)蛋母雞發(fā)病，以產(chǎn)蛋量急劇下降，死亡增加，卵巢輸卵管病變及卵黃性腹膜炎為主。與常見的雞、鴨等禽出敗以心冠脂肪噴灑樣出血和肝臟針尖樣點狀壞死為特征病變，以及以呼吸困難、哮喘、發(fā)熱為主要癥狀的不同。

根據(jù)實踐經(jīng)驗，磺胺類藥物對巴氏桿菌有效，但是磺胺類藥物已被禁止使用于肉禽和商品蛋禽群，而且磺胺類藥物能影響產(chǎn)蛋量，因此產(chǎn)蛋期種雞群通常不使用磺胺類藥物。用抗生素防治很大程度上取決于治療措施是否及時，以及是否選用敏感藥物，用藥量和持續(xù)用藥天數(shù)。急性巴氏桿菌病發(fā)病急，用藥不及時、用藥的劑量不足、療程不夠，或用不敏感藥物，易使該病反復發(fā)生，或常常由急性轉為慢性，病程延長，引起較大的損失。

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魏蘭（1972—），女，獸醫(yī)師，主要從事畜牧生產(chǎn)與疫病防治技術推廣研究工作。