邴晏如，莫和國(guó)，黃健云，李璐琳，歐水連，黎泳儀，陸小琴，蔡錦梅

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 中山 528415)

·論著·

男性不育患者精子形態(tài)與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶關(guān)系的研究

邴晏如，莫和國(guó)，黃健云，李璐琳，歐水連，黎泳儀，陸小琴，蔡錦梅

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 中山 528415)

目的研究男性不育患者精子形態(tài)與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的關(guān)系。方法466例男性不育患者分別根據(jù)年齡和精子正常形態(tài)百分率分成5組和8組，采用Diff-Quik染色法、酶法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分別進(jìn)行精子形態(tài)、精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的檢測(cè)。結(jié)果各年齡組的正常形態(tài)精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低，其他年齡段精中性α-葡糖苷酶的活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在精子正常形態(tài)百分率不同的8組中，年齡差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，精子正常形態(tài)百分率大于7.1%的5組精中性α-葡糖苷酶的活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余三組精中性α-葡糖苷酶的活性與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論精子正常形態(tài)百分率不受年齡和精漿彈性硬蛋白酶濃度影響，而隨著精中性α-葡糖苷酶的活性降低而降低，精中性α-葡糖苷酶活性的顯著降低可能是導(dǎo)致精子形態(tài)畸形的獨(dú)立因素。

男性不育；精子形態(tài)；中性α-葡糖苷酶；彈性硬蛋白酶

隨著社會(huì)發(fā)展，不育癥的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，育齡夫婦不育癥的發(fā)病率從20世紀(jì)60年代的7%～8%上升到近年來(lái)的15%～20%[1-2]。不育原因中20%是單獨(dú)由男性因素引起的，其余還有30%～40%與男性因素有關(guān)[3]，因此，近年來(lái)有關(guān)精子質(zhì)量與男性不育原因的研究越來(lái)越引起臨床的重視，而精子形態(tài)學(xué)正是研究中最受關(guān)注的領(lǐng)域之一。本文研究男性不育患者精子形態(tài)與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的關(guān)系，旨在評(píng)價(jià)不同因素對(duì)患者精子形態(tài)的影響程度，為男性不育癥的診斷和治療提供研究依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2012年6月至2013年12月在本院男科門診就診的466例不育男性，且精液常規(guī)檢查至少有一項(xiàng)參數(shù)結(jié)果異常，年齡21～49歲，平均33.6歲，根據(jù)年齡分成5組。診斷標(biāo)準(zhǔn)：同居一年及以上；性生活正常；未采用任何避孕措施；女方各項(xiàng)檢查均正常。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集檢查前禁欲3～7 d，手淫法取精于干燥無(wú)菌廣口杯內(nèi)，37℃液化，液化后進(jìn)行精液常規(guī)檢測(cè)，新鮮標(biāo)本液化后立即取部分標(biāo)本在3 000×g離心10 min，留取精漿，用Eppendorf管分裝數(shù)支后-20℃保存，同時(shí)分裝數(shù)支全精液標(biāo)本-20℃保存，以上所有分裝標(biāo)本凍融一次后不再使用。

1.2.2 主要儀器試劑及檢測(cè)方法精液常規(guī)采用北京偉力WLJY-9000型彩色精子分析儀檢測(cè)；精子形態(tài)分析采用WHO推薦的Diff-Quik精子形態(tài)學(xué)快速染色法；精漿中性Q-葡糖苷酶(酶法)和精漿彈性硬蛋白酶(ELISA法)定量試劑盒均購(gòu)自深圳華康公司；全自動(dòng)酶標(biāo)儀為美國(guó)Bio-Tek ELx800。

1.2.3 精子形態(tài)及精漿生化指標(biāo)正常參考正常參考值均采用世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)：精子形態(tài)按《WHO人類精液及精子—宮頸黏液相互作用實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手冊(cè)》(第4版)進(jìn)行分類，精子正常形態(tài)百分率正常參考值＞15%。精漿彈性硬蛋白酶正常參考值為＜290 ng/ml，精漿中性Ⅱ-葡糖苷酶正常參考值為≥20 Mu/一次射精(WHO)。

1.2.4 精子形態(tài)分析根據(jù)精子正常形態(tài)百分率從高到低分成8組，其中正常形態(tài)精子百分率≥15.0%為一組，輕度畸形：15.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥10.0%為一組，中度畸形：10.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥5.0%分成5組，重度畸形：正常形態(tài)精子百分率＜5.0%為一組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間均值比較采用方差分析方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 不同年齡段不育男性精子形態(tài)、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測(cè)結(jié)果(±s)

表1 不同年齡段不育男性精子形態(tài)、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測(cè)結(jié)果(±s)

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段不育男性精子形態(tài)、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測(cè)結(jié)果466例不育男性根據(jù)年齡分成5組，各年齡組的正常形態(tài)精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，精液量和精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低(P＜0.01)，其他年齡段精液量和精中性α-葡糖苷酶的活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)見表1。

2.2 不育男性精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關(guān)系分析在精子正常形態(tài)百分率不同的8組中年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；精漿彈性硬蛋白酶濃度在這8組中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；精中性α-葡糖苷酶的活性在精子正常形態(tài)百分率大于7.1%的5組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余3組精中性α-葡糖苷酶的活性與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表2。

表2 不育男性精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關(guān)系分析(±s)

表2 不育男性精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關(guān)系分析(±s)

3 討論

研究結(jié)果顯示，男性不育患者各年齡段的正常形態(tài)精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在精子正常形態(tài)百分率不同的8組中，精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Eggert-Kruse等[4]研究發(fā)現(xiàn)，不育患者血清及精漿彈性硬蛋白酶含量與精子形態(tài)及精子功能各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性；與之相反，Moretti等[5]通過(guò)對(duì)患者精漿彈性硬蛋白酶的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，精漿彈性硬蛋白酶含量＞1 000 ng/ml組與精漿彈性硬蛋白酶含量＜290 ng/ml組在頭部畸形方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究還顯示，精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低，這可能與該年齡段的射精量減少有關(guān)。精子正常形態(tài)百分率小于7.1%的3組精中性α-葡糖苷酶的活性分別與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且精子正常形態(tài)百分率在5.1%～6.0%，和5.0%以下兩組的精中性α-葡糖苷酶的活性均值均低于正常參考范圍(≥20 mU/一次射精)。當(dāng)精中性α-葡糖苷酶的活性低于正常參考范圍時(shí)，精子形態(tài)表現(xiàn)為重度畸形，且精子正常形態(tài)百分率隨著精中性α-葡糖苷酶的活性降低而降低?？梢娋行驭?葡糖苷酶檢測(cè)不僅對(duì)輸精管阻塞有診斷價(jià)值[6-8]，對(duì)精子形態(tài)畸形因素的研究也有幫助。精中性α-葡糖苷酶活性的顯著降低可能是導(dǎo)致精子形態(tài)畸形的獨(dú)立因素。

綜上所述，精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶濃度無(wú)相關(guān)性，與精中性α-葡糖苷酶的活性關(guān)系密切，男性不育患者除做精液常規(guī)檢查外，還需要進(jìn)一步作精中性α-葡糖苷酶的活性檢測(cè)，查找不育原因、評(píng)估生育能力并為疾病診斷、療效判定提供了客觀依據(jù)。

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Relationship between sperm morphology and neutral a-glucosidase or elastase in male infertile patients.

BING Yan-ru,MO He-guo,HUANG Jian-yun,LI Lu-lin,OU Shui-lian,LI Yong-yi,LU Xiao-Qin,CAI Jin-mei.Department of Clinical Laboratory,Xiaolan Hospital Affiliated to South Medical University,Zhongshan 528415,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the relationship between sperm morphology and neutral α-glucosidase or elastase in male infertile patients.MethodsA total of 466 males with infertility were divided into 5 groups and 8 groups according to age and sperm morphology respectively.Diff-Quik stain,enzyme and ELISA were used to check sperm morphology and neutral α-glucosidase or elastase activity respectively.ResultsThere were no significant differences in the percentage of morphological normal sperm and elastase concentration among different age groups(P＞0.05).The neutral α-glucosidase decreased remarkably in age group 41～50 and there were no significant differences in neutral α-glucosidase among other age groups(P＞0.05).There were no significant differences in age or elastase concentration among 8 morphology groups(P＞0.05).There were no significant differences in neutral α-glucosidase among the 5 morphology groups,in which the percentage of morphologically normal sperm was above 7.1%,while there were significant differences in neutral α-glucosidase among the rest 3 groups and other groups(P＜0.01).ConclusionThe percentage of morphologically normal sperm was not affected by age and elastase concentration,but decreased with the reducing of the activity of neutral a-glucosidase,which could be the independent factor of sperm morphological abnormity.

Male infertility;Sperm morphology;Neutral α-glucosidase;Elastase

R698+.2

A

1003—6350（2014）13—1950—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0756

2014-01-27)

中山市醫(yī)學(xué)科研基金項(xiàng)目(編號(hào)：2013A020207)

莫和國(guó)。E-mail：945161386@qq.com