陸雪明，王樹欽，林松青

C-erbB-2蛋白在惡性腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義正受到人們密切關(guān)注，特別是在乳腺癌方面已達(dá)成共識[1]，但在賁門癌中有關(guān)C-erbB-2蛋白表達(dá)的報道較少。本文通過對200例賁門癌手術(shù)組織標(biāo)本使用免疫組化分析方法檢測C-erbB-2蛋白的表達(dá)情況，分析C-erbB-2蛋白過表達(dá)與賁門癌病理類型、分化程度、分期、生存情況等的相關(guān)性，從而闡明C-erbB-2蛋白過表達(dá)與賁門癌預(yù)后之間的關(guān)系，為后期賁門癌靶向治療的研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2010年1月至2012年6月在揭陽市人民醫(yī)院經(jīng)病理確診且行手術(shù)治療的賁門癌病例200例。其中男147例，女53例，男女比例為2.8∶1。年齡37～76歲，中位年齡61.5歲，其中60歲以下67例，60歲以上(包括60歲)133例。腫瘤最大直徑≤5 cm 111例，>5 cm 89例。病理類型：腺癌169例，黏液性腺癌25例，印戒細(xì)胞癌6例。分化程度：高分化65例，中分化73例，低分化62例。腫瘤侵犯食管下段8例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者71例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者129例。按2002年UICC臨床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期73例，Ⅲ期 99例。所有患者術(shù)前均未行放、化療，手術(shù)均由同一組人員完成，術(shù)后均按2009年版NCCN賁門癌診療規(guī)范進(jìn)行隨診及治療。本研究隨訪工作截止于2013年12月，中位隨訪時間38個月，隨訪率100%。

1.2 方法 采取兔抗人C-erbB-2腫瘤多克隆抗體及免疫組化二步法試劑盒(上海長島抗體試劑公司)并嚴(yán)格按照說明進(jìn)行操作。用已知陽性賁門癌標(biāo)本切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。C-erbB-2蛋白定位于細(xì)胞膜。強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)采用Hoffmann[2]的評判法，免疫組織化學(xué)陰性(-)：不染色或<10%的細(xì)胞膜染色；免疫組織化學(xué)弱陽性(+)：>10%的細(xì)胞膜染色較淺或僅有部分膜染色；免疫組織化學(xué)中度陽性(++)：>10%的細(xì)胞膜或外膜輕到中度染色；免疫組織化學(xué)強(qiáng)陽性(+++)：>10%的細(xì)胞膜360°強(qiáng)染色或U字形強(qiáng)染色。本次結(jié)果判定：陰性結(jié)果為免疫組織化學(xué)陰性(-)及免疫組織化學(xué)弱陽性(+)；中度陽性(++)需經(jīng)FISH檢測C-erbB-2基因有無擴(kuò)增再作判斷；陽性結(jié)果(即過表達(dá))為免疫組織化學(xué)強(qiáng)陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所有分析均在SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包中進(jìn)行，方法為χ2檢驗(yàn)，生存率分析采用Log-rank檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 C-erbB-2蛋白在賁門癌中的表達(dá)情況 在200例中，賁門癌組織C-erbB-2蛋白表達(dá)陰性48例，弱陽性44例，中度陽性45例，強(qiáng)陽性63例，強(qiáng)陽性率為31.5%。

2.2 C-erbB-2蛋白在賁門癌中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系 具體數(shù)據(jù)見表1，C-erbB-2在不同性別、年齡、腫瘤大小及食管是否受累中的陽性率的比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。而在組織類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度及TNM分期中，各組 C-erbB-2蛋白的表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。

表1 C-erbB-2蛋白表達(dá)水平與賁門癌臨床病理因素的關(guān)系

2.3 C-erbB-2蛋白表達(dá)與賁門癌預(yù)后之間的關(guān)系 本研究隨訪工作截止于2013年12月，中位隨訪時間38個月，隨訪率100%。92例C-erbB-2蛋白表達(dá)陰性病例的1年、3年生存率分別為100%、66.3%，45例C-erbB-2蛋白表達(dá)可疑陽性病例的1年、3年生存率分別為97.8%、48.9%，而63例C-erbB-2蛋白表達(dá)陽性病例的1年、3年生存率分別為95.2%、39.7%。三組3年生存率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。

3 討論

原癌基因C-erbB-2 (又稱HER-2)屬于酪氨酸激酶癌基因家族，位于人類第17號染色體長臂的7q21，編碼185 ku，具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白(P185)[3]。正常情況下處于非激活狀態(tài)，若C-erbB-2基因激活，則具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性。因?yàn)镃-erbB-2基因激活與C-erbB-2蛋白表達(dá)有較好的相關(guān)性，因此檢測過度表達(dá)的蛋白產(chǎn)物可間接反映C-erbB-2基因狀態(tài)，從分子水平認(rèn)識腫瘤的本質(zhì)[4]。C-erbB-2蛋白在賁門癌組織中的表達(dá)陽性率從6%～43%不等[5]，造成如此大差異的原因很多，其中缺乏對賁門癌C-erbB-2蛋白表達(dá)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)是重要原因之一。本研究采用目前較為認(rèn)可的Hoffmann評分法對C-erbB-2蛋白表達(dá)評分，增加了結(jié)果的可信度。本組賁門癌C-erbB-2蛋白的表達(dá)主要在細(xì)胞膜，陽性率31.5%，高于Gravalos等[6]研究的胃食管連接部癌的25%。本組結(jié)果顯示在不同性別、年齡、腫瘤大小及食管是否受累等方面C-erbB-2的陽性率組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。在組織學(xué)類型方面，印戒細(xì)胞癌C-erbB-2陽性表達(dá)率為66.7%，明顯高于腺癌(30.8%)及黏液性腺癌(28.0%)。另外，本研究結(jié)果顯示高、中、低分化癌組的C-erbB-2表達(dá)陽性率分別為21.5%、30.1%、43.5%，即隨組織學(xué)分級的增高，其表達(dá)陽性率增加。C-erbB-2 過表達(dá)提示腫瘤分化程度低，惡性程度高。這與Janehne等[7]的研究報道不符，可能與研究的病例構(gòu)成、研究方法等有關(guān)。本研究還表明淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及各臨床分期C-erbB-2蛋白表達(dá)陽性率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與韓少良等[4]的研究相似。

本次結(jié)果表明C-erbB-2蛋白表達(dá)陰性者的生存率明顯高于陽性者，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但由于病例偏少，且隨訪時間偏短，結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)意義尚待進(jìn)一步研究分析，對5年生存率的意義也有待統(tǒng)計分析。陳斌等[8]報道C-erbB-2蛋白表達(dá)陽性者中位生存時間顯著低于陰性者。2009年發(fā)表的TOGA試驗(yàn)結(jié)果表明，對免疫組織化學(xué)標(biāo)記C-erbB-2蛋白表達(dá)為+++，或C-erbB-2基因表達(dá)為++，經(jīng)FISH檢測C-erbB-2基因有擴(kuò)增的賁門癌患者可用化療加赫賽汀的治療方案[9]。因此認(rèn)為C-erbB-2蛋白表達(dá)情況在賁門癌治療選擇中起重要作用。

本研究結(jié)果表明C-erbB-2蛋白與腫瘤浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期等密切相關(guān)，且初步顯示出與生存率的相關(guān)性。因此，C-erbB-2蛋白是賁門癌預(yù)后的一項(xiàng)判斷指標(biāo)。我們將進(jìn)一步進(jìn)行C-erbB-2基因檢測，繼續(xù)嚴(yán)格隨訪病人以完善相關(guān)統(tǒng)計學(xué)資料，并將更多合適病例入組，同時將進(jìn)行赫賽汀在賁門癌C-erbB-2蛋白表達(dá)陽性病例的臨床研究，為后期賁門癌靶向治療的研究提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Dent R,Trudeau M,Pritchard KI,et al.Triple-negative breast cancer: clinical features and patterns of recurrence[J].Clin Cancer Res,2007,13(15 Pt 1):4429-4434.

[2] Hoffmann M,Stoss O,Shi D,et al.Assessment of a Her-2 scoring system for gastric cancer: results from a validation study[J].Histopathology,2008,52(7):797-805.

[3] Zhou XX,Ji F,Zhao JL,et al.Anti-cancer activity of anti-p185 HER-2 ricin A chain immunotoxin on gastric cancer cells[J].J Gastroenterol Hepatol,2010,25(7):1266-1275.

[4] 韓少良,邵永孚,劉秀萍,等.中期胃癌nm23, P21和C-erbB-2基因表達(dá)及其臨床意義[J].癌癥, 2000,19(9):922-926.

[5] Meza JJ,Au HJ,Sawyer MB.Trastuzumab for gastric cancer [J].Expert Opin Biol Ther,2009,9(12):1543-1551.

[6] Gravalos C,Jimeno A.HER2 in gastric cancer: a new prognostic factor and a novel therapeutic target[J].Ann Oncol,2008,19(9):1523-1529.

[7] Janehne J,Urmacher C,Thaler HT,et al.Expression of HER2 Pneu oncogene product P185 in correlation to clinicopa_thological and prognostic factors of gastric carcinoma[J].Cancer Res Clin Oncol,1992,118(6):474-497.

[8] 陳斌,羅榮城,崔斐.胃癌HER-2/neu基因表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2006, 26(3):344-347.

[9] Petrelli NJ,Winer EP,Brahmer J,et al.Clinical Cancer Advances 2009: major research advances in cancer treatment, prevention, and screening-a report from the American Society of Clinical Oncology[J].J Clin Oncol,2009,27(35):6052-6069.