董 婧，于業(yè)輝，趙瑩瑩，衛(wèi)侃韻，高海鈺，李 林

（沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽 110866）

溫度和食物對褶皺臂尾輪蟲種群增長及繁殖的影響

董 婧，于業(yè)輝，趙瑩瑩，衛(wèi)侃韻，高海鈺，李 林?

（沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽 110866）

本試驗(yàn)設(shè)3個(gè)溫度（20、25和30℃）和3個(gè)食物濃度（1×106、10×106和20×106cells/m L），研究不同溫度和不同食物濃度對褶皺臂尾輪蟲種群增長及繁殖的影響。試驗(yàn)期為10 d。結(jié)果表明，最大種群密度均隨溫度和食物濃度的升高而先增加后減少。溫度為25℃食物濃度為10×106cells/m L時(shí)，最大種群密度為74.39±1.81 ind/m L，與其他組比差異顯著（P＜0.05）。隨溫度升高，輪蟲的最大種群密度高峰值出現(xiàn)的時(shí)間也呈現(xiàn)逐漸前移的趨勢，最大種群增長率則隨溫度和食物濃度的增加而升高。溫度30℃食物20×106cells/m L時(shí)，最大種群增長率為0.70±0.013，與其他組比差異顯著（P＜0.05）。食物濃度對輪蟲的懷卵率有顯著影響，在同一溫度下最大懷卵率隨食物濃度的升高而增大，食物為20×106cells/m L的最大懷卵率為56.43±1.07%，與其他濃度組比差異顯著（P＜0.05）。在本試驗(yàn)條件下，溫度和食物對褶皺臂尾輪蟲的種群增長及繁殖均有顯著影響。溫度25℃食物濃度10×106cells/m L為培養(yǎng)條件的最優(yōu)組合。

褶皺臂尾輪蟲；溫度；食物濃度；種群增長；繁殖

褶皺臂尾輪蟲（Brachionus pl icati l is）生活于半咸水至海水中，是一種濾食性浮游動物，具有大小適中、繁殖迅速、營養(yǎng)豐富、適應(yīng)能力強(qiáng)、不易惡化水質(zhì)和容易培養(yǎng)等特點(diǎn)，成為海水魚和甲殼動物苗種培育中重要的開口活餌料，現(xiàn)已在世界廣泛培養(yǎng)和應(yīng)用[1-2]。高密度大規(guī)模持續(xù)性培養(yǎng)技術(shù)的研究成為熱點(diǎn)。影響種群增殖的因素包括食物、水溫、光照、接種密度及鹽度和pH值等參數(shù)[3-4]。目前，國內(nèi)外有關(guān)溫度和食物濃度對輪蟲種群增長及繁殖的研究報(bào)道結(jié)果存在不一致性[5]。本文以褶皺臂尾輪蟲為對象，研究不同溫度和食物濃度對其種群增長及繁殖的影響，為輪蟲的規(guī)?；囵B(yǎng)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料試驗(yàn)用褶皺臂尾輪蟲（Brachionus pl icati l is）為盤錦光合水產(chǎn)公司的輪蟲休眠卵孵化而得；輪蟲的培養(yǎng)用水為經(jīng)高壓消毒的人工海水，鹽度為20‰；速溶海水晶購自廣東徐聞鹽場；食物為飼用高活性干酵母購自安琪酵母股份有限公司。將輪蟲休眠卵在25±1℃的恒溫光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行孵化，光照強(qiáng)度30 LX，光照周期為TL:TD=12 h:12 h。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)3個(gè)溫度（20、25和30℃）和3個(gè)食物（1×106、10×106和20×106cel ls/mL），共9個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)液體積為10 mL，輪蟲的接種密度1 ind/mL，以酵母為輪蟲的食物。每隔24 h更換1次培養(yǎng)液。正式試驗(yàn)期為10 d。試驗(yàn)前，將孵化出的輪蟲在恒溫光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度25℃，光照強(qiáng)度30 LX，光照周期為TL:TD=12 h:12 h，以密度為8×106cel ls/mL的酵母為輪蟲的食物。試驗(yàn)過程中，每天投喂餌料2次，投喂時(shí)間分別為8:00和19:00，每12 h用玻璃微吸管吸走沉積于試管底部的雜質(zhì)，并添加1次培養(yǎng)液，每隔24 h更換1次培養(yǎng)液，直到輪蟲的1個(gè)生長周期結(jié)束為止。試驗(yàn)結(jié)束后從3個(gè)食物濃度中確定最有利于褶皺臂尾輪蟲生長的濃度。

1.3 指標(biāo)測定方法每24 h，計(jì)數(shù)每個(gè)處理組小杯中的輪蟲數(shù)，當(dāng)輪蟲數(shù)達(dá)到一定密度時(shí)，隨機(jī)均勻取樣，吸取1 mL置于培養(yǎng)皿內(nèi)，在解剖鏡下計(jì)數(shù)1 mL培養(yǎng)液中輪蟲種群密度、攜卵個(gè)體數(shù)和卵數(shù)，連續(xù)計(jì)數(shù)3次，取其平均值，然后將取出的培養(yǎng)液吸回到原培養(yǎng)液中。計(jì)算公式如下：

式中No和Nc分別表示增殖率計(jì)算開始和計(jì)算結(jié)束時(shí)輪蟲的培養(yǎng)密度；to和tc分別表示增長率計(jì)算開始和計(jì)算結(jié)束時(shí)的時(shí)間（h）。

表1 不同培養(yǎng)條件下褶皺臂尾輪蟲的最大種群密度和種群增長率Tab le1 Maximum population density and popu lation grow th rates under different cu lture conditions o f Brachionus plicatilis

懷卵率R=（懷卵輪蟲個(gè)數(shù)/輪蟲總數(shù)量）×100%[7]

1.4 統(tǒng)計(jì)分析原始數(shù)據(jù)采用Excel 2007初步整理后，采用SPSS 13.0軟件中單因子方差分析（One-Way ANOVA）進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，所得數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，經(jīng)方差分析后，采用Duncan氏多重比較法分析試驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異顯著。

2 結(jié)果和分析

2.1 不同溫度和食物濃度對褶皺臂尾輪蟲種群增長的影響不同溫度（20、25和30℃）和食物濃度（1×106、10×106和20×106cel ls/mL）對褶皺臂尾輪蟲種群增長的影響見表1和圖1。

圖1 不同培養(yǎng)條件下褶皺臂尾輪蟲種群增長曲線Fig.1 Brachionus plicatilis population grow th curves under different culture conditions

如表1和圖1所示，隨著培養(yǎng)溫度的逐漸升高，輪蟲的最大種群密度高峰值出現(xiàn)的時(shí)間也總體上呈現(xiàn)逐漸前移的趨勢，輪蟲種群的增長率也隨溫度的升高逐漸增大，且增長率出現(xiàn)最大值的時(shí)間也逐漸縮短。最大種群密度隨著溫度的升高先增大后減小，當(dāng)溫度為25℃時(shí)不同濃度間的最大種群密度均高于其他溫度組，但濃度1×106cel ls/mL除外，其最大種群密度隨溫度的升高而升高（表1）。輪蟲種群增長率的比較結(jié)果顯示食物濃度對輪蟲的增長率有顯著影響（P＜0.05），在同一溫度下種群增長率隨食物濃度的增大而升高，其中在30℃食物濃度為100×106cel ls/mL的最大為0.7。而在食物濃度為10×106cel ls/mL時(shí)，輪蟲的種群密度最大。

2.2 不同溫度和食物濃度對褶皺臂尾輪蟲懷卵率的影響不同溫度（20、25和30℃）和食物濃度（1× 106、10×106和20×106cel ls/mL）對褶皺臂尾輪蟲懷卵率的影響見表2和圖2。

表2 不同培養(yǎng)條件下褶皺臂尾輪蟲的懷卵率Table2 Brachionus p licatilis berried rate under different culture conditions

圖2 不同培養(yǎng)條件下褶皺臂尾輪蟲的懷卵率Fig.2 Brachionus plicatilis berried rate under different cu lture conditions

由圖2和表2可知，輪蟲懷卵率均在試驗(yàn)第2天或第3天達(dá)到峰值，以后逐漸下降（圖2）。對輪蟲懷卵率的比較結(jié)果顯示食物濃度對輪蟲的懷卵率有顯著影響（P＜0.05），在同一溫度下最大懷卵率隨食物濃度的升高而增大（表2），食物濃度為20× 106cel ls/mL的最大懷卵率均高于其他2個(gè)濃度。但是高濃度食物的懷卵率每天的波動較大（圖2），日平均懷卵率反而偏小。其中食物濃度為10×106cel ls/mL的日平均增長率最大，濃度在30℃時(shí)例外，食物濃度10×106cel ls/mL和20×106cel ls/mL的日平均懷卵率相差不大。

3 討論

3.1 溫度對褶皺臂尾輪蟲種群增長及繁殖的影響

溫度是影響輪蟲種群增長及繁殖的主要因素之一。研究表明，在適合的溫度范圍內(nèi)，隨溫度升高，輪蟲的世代時(shí)間縮短，產(chǎn)量隨之增加。在15～35℃范圍內(nèi),隨著水溫的升高，褶皺臂尾輪蟲繁殖速度加快；25～35℃是繁殖的最適溫度范圍，40℃是輪蟲生活和繁殖的臨界高溫[8]。30℃是培育輪蟲的最適溫度[9]。鮑蕾等[10]對方形臂尾輪蟲（Brachionus quadridentatus）研究結(jié)果表明，隨溫度升高胚胎發(fā)育期和繁殖期的變化趨勢非常相似，溫度對這2個(gè)時(shí)期的影響均非常顯著。溫度從20℃升高到30℃，繁殖期歷時(shí)和平均壽命都顯著縮短。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著培養(yǎng)溫度的逐漸升高，輪蟲的最大種群密度高峰值出現(xiàn)的時(shí)間縮短，輪蟲種群的增長率也隨溫度的升高逐漸增大。最大種群密度隨著溫度的升高表現(xiàn)出先增大后減小，溫度為25℃食物濃度為10×106cel ls/mL時(shí)，最大種群密度為74.39 ind/mL，與其他組比差異顯著。本試驗(yàn)結(jié)果與其他學(xué)者對壺狀臂尾輪蟲（Brachionus urceus）、方形臂尾輪蟲（Brachionus quadridentatus）[10-11]的研究所得結(jié)果一致。在接種密度、餌料及投餌量均相同的條件下，水溫為25℃時(shí)，輪蟲的種群密度和平均日增長率均顯著比水溫為20℃和30℃時(shí)要高。這一結(jié)果與鄭永和的研究結(jié)果基本一致[12]。

3.2 食物濃度對褶皺臂尾輪蟲種群增長及繁殖的影響食物濃度是影響輪蟲種群增長的重要因素之一。但不同的研究結(jié)果也有較大差異。Fushimi等[13]投喂小球藻的試驗(yàn)表明，每只輪蟲每天能消耗10×104～15×104cel ls/mL單胞藻，而張學(xué)成等認(rèn)為，單胞藻的密度最好保持在5×106cel ls/mL以上。姚久祥等[14]認(rèn)為，輪蟲培養(yǎng)前期，較低的藻類濃度可使輪蟲繁殖速度加快，濃度過高會使其在生長代謝中積累產(chǎn)生毒素，從而抑制溶氧濃度，改變pH值，抑制輪蟲的繁殖，但在培養(yǎng)后期，提高藻類濃度才能保證輪蟲有充足的餌料，達(dá)到最大增殖率。面包酵母投喂量的研究結(jié)果也不一致，張登瀝等[15]對面包酵母投喂量的研究結(jié)果顯示，酵母的最佳投喂率為2.0，而廖永巖[9]認(rèn)為，面包酵母投喂量以80～120 g/億個(gè)·d較為理想，王金秋等[16]提出最適投喂密度為15×106cel ls/mL。藺麗麗等[17]對圓型臂尾輪蟲（Brachionus rotundi formis）研究結(jié)果表明，酵母濃度達(dá)到8×106cel ls/mL，每日投喂2次，為最佳投喂量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，食物濃度對輪蟲的增長率有顯著影響，在同一溫度下種群增長率隨食物濃度的增大而升高，其中在30℃食物濃度為20×106cel ls/mL時(shí)，種群增長率最大，而在食物濃度為10×106cel ls/mL時(shí)，輪蟲的種群密度最大，這與姚久祥等[14]研究結(jié)果一致，表明食物濃度較高反而抑制了種群增長。本研究結(jié)果表明，食物濃度對輪蟲的懷卵率也有顯著影響。在同一溫度下最大懷卵率隨食物濃度的升高而增大，食物濃度為20×106cel ls/mL的最大懷卵率，均顯著高于其他2個(gè)濃度組，但是高濃度食物的懷卵率每天的波動較大，日平均懷卵率反而偏小，這與Sarma等[18]研究結(jié)果一致。在本試驗(yàn)條件下，溫度和食物濃度對褶皺臂尾輪蟲的種群增長及繁殖均有顯著影響。溫度25℃食物濃度10×106cel ls/mL為培養(yǎng)條件的最優(yōu)組合。

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（編輯：韓斌）

Effects of tem perature and food on population grow th and reproduction of rotifer, Brachionus plicatilis

Dong Jing，Yu Yehui，Zhao Yingying，Wei Kanyun，Gao Haiyu，Li Lin*
(Col lege of Animal Science and Veterinary Medicine,Shenyang Agricul tural University,Liaoning Shenyang 110866)

Ef fects of temperature and food concent ration on population growth and reproduction of roti fer,Brachionus pl icati lis were studied in growth three temperatures(20℃,25℃ and 30℃)and di f ferent food concent rations(1×106cel ls/mL,10×106cel ls/mL and 20×106cel ls/mL).The cul ture was lasted for 10d.The resul ts showed that there were very signi ficant in the ef fects of temperature and food concentration on the population density,population growth rate and egg ratio.The maximum population density decreased af ter the f irst increase with temperature and food concent ration increase.When the food concent ration was 10×106cel ls/mL at 25℃,the maximum population density was 74.39±1.81ind/mL,which was signi ficant ly higher than that in the other groups（P＜0.05）. With the increase of temperature,the time of maximum peak rotifer population density also showed a gradual emergence of forward t rends,the largest population growth rate increased with the increase of temperature and food concent ration.When the food concent ration was 20×106cel ls/mL at 30℃,the largest population growth rate was 0.70±0.013 which signi ficant ly higher than the other groups（P＜0.05）.At the same temperature,the maximum egg ratio increased with the increase of con-centration in food.When the food concentration was 20×106cel ls/mL,the maximum egg ratio was 56.43±1.07%,which was signi f icant ly higher than in the other groups（P＜0.05）.In conclusion,temperature and food concent ration had signif icant ly ef fects on the population growth and the reproduction of rotifer,Brachionus plicati l is.It is suggested that the optimum food concent ration was 10×106cel ls/mL and the temperature was at 25℃.

Brachionus pl icatil is;temperature;food concent ration;population growth;reproduction

S963.21+4

：B

：1672-9692(2014)04-0035-05

2014-01-06

董婧（1982-），女，講師，在讀博士，主要從事水產(chǎn)動物營養(yǎng)研究。

李林（1978-），男，副教授，博士，研究生導(dǎo)師，主要從事動物疾病防治。

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31302149）；沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)青年教師科研基金項(xiàng)目（20111015）；遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目。