蘇崴藝，李欣南，韓鐫竹

（遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，遼寧　沈陽(yáng)　110016）

某養(yǎng)殖場(chǎng)雞源糞腸球菌分離鑒定及耐藥性研究

蘇崴藝，李欣南?，韓鐫竹

（遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，遼寧沈陽(yáng)110016）

本文從遼寧某雞場(chǎng)100份肉雞盲腸拭子中分離獲得糞腸球菌24株，通過(guò)ATB細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定確認(rèn)為糞腸球菌，并對(duì)這24株糞腸球菌進(jìn)行了14種抗生素的藥敏試驗(yàn)。結(jié)果顯示，糞腸球菌對(duì)青霉素、萬(wàn)古霉素、氨芐西林和替拉考寧敏感；對(duì)紅霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、左氧氟沙星和奎奴普汀/達(dá)福普汀耐藥，耐藥率均達(dá)到100.0%，養(yǎng)殖場(chǎng)抗菌藥物耐藥嚴(yán)重。

糞腸球菌；抑菌作用；最低抑菌濃度

腸球菌屬（Enterococcus）廣泛分布在自然界，常棲居在人、動(dòng)物的腸道和女性生殖道，是人類的正常菌群之一[1]。近年來(lái)，腸球菌屬細(xì)菌引發(fā)的感染不斷上升，腸球菌已成為醫(yī)院感染的常見(jiàn)條件致病菌，在革蘭陽(yáng)性球菌所致的醫(yī)院感染中，腸球菌感染位居第二位，僅次于葡萄球菌，可導(dǎo)致人體多臟器的感染，病死率高達(dá)21.1%～27.15%[2-3]。臨床腸球菌感染以糞腸球菌為主，屎腸球菌次之[4]。同時(shí)糞腸球菌的感染也會(huì)對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成很大經(jīng)濟(jì)損失，蔡亞娜等[5]通過(guò)對(duì)山東某地區(qū)8個(gè)大型集約化肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)的27只死淘雞進(jìn)行剖檢、電鏡觀察、病原菌分離鑒定，明確了細(xì)菌混合感染為其顯著特征，此地區(qū)優(yōu)勢(shì)致病菌依次為糞腸球菌、淺綠氣球菌、大腸桿菌、沙門氏菌和嗜水氣單胞菌?？梢?jiàn)糞腸球菌無(wú)論在人臨床還是動(dòng)物養(yǎng)殖領(lǐng)域都有很高的潛在致病危險(xiǎn)，因此，調(diào)查糞腸球菌耐藥性對(duì)于人畜等各方面臨床用藥均有很高的指導(dǎo)價(jià)值。

1　材料

1.1儀器材料

1.1.1儀器美國(guó)NUAIRE生物安全柜 Ⅱ型、三洋全自動(dòng)高壓滅菌器、電熱恒溫培養(yǎng)箱、DENSIMAT麥?zhǔn)媳葷醿x、微量移液器、BIOMERIEUX鑒定移液器、ATB Expression鑒定儀。

1.1.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)材料ID32STAPH鑒定條；糞球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC29212）購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

2　方法

2.1試驗(yàn)菌株的制備

2.1.1試驗(yàn)菌株的采集取肉雞盲腸處于回腸與盲腸接口處刨開(kāi)，見(jiàn)圖1，將腸道內(nèi)壁外翻，用無(wú)菌棉拭子進(jìn)行樣品采集，共采集肉雞盲腸棉拭子100份。無(wú)菌條件下涂布于糞腸球菌培養(yǎng)基瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)48 h。篩選紫色突起圓形菌落為疑似糞腸球菌。

圖1　雞盲腸形態(tài)形態(tài)Fig.1　Ceca l morphology

2.1.2試驗(yàn)菌株的分離純化將疑似糞腸球菌的菌落分離接種于糞腸球菌顯色培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)48 h，見(jiàn)圖2。挑取糞腸球菌顯色培養(yǎng)基上紫色單菌落，在哥倫比亞血瓊脂上進(jìn)行劃線純化培養(yǎng)，37℃ 48 h，獲得100株可疑菌株，備用。

圖2　糞腸球菌顯色培養(yǎng)基Fig.2　Enterococcus faecalis on identification chromogenic medium

2.1.3菌株的鑒定對(duì)上述100株可疑菌株進(jìn)行生化鑒定，采用梅里埃全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀對(duì)菌株進(jìn)行鑒定，以生化鑒定作為最終判定標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果24株與標(biāo)準(zhǔn)糞腸球菌菌株生化譜一致。共獲得24株糞腸球菌菌株，糞腸球菌生化鑒定譜，見(jiàn)表1。

表1　糞腸球菌生化鑒定譜Table1　Standard biochem ica l spectrum for Enterococcus faecalis

2.2糞腸球菌對(duì)于1414種抗生素的藥物敏感試驗(yàn)將上述經(jīng)過(guò)鑒定的24株糞腸球菌，采用梅里埃的腸球菌藥敏試紙條進(jìn)行14種抗生素的細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)，通過(guò)儀器判讀結(jié)果，并通過(guò)微量稀釋法驗(yàn)證。

3　結(jié)果

對(duì)分離獲得的24株糞腸球菌，進(jìn)行了14種抗生素的藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　糞腸球菌對(duì)于14種抗生素的敏感度Tab le2　The sensitivity of Enterococcus faeca lis to antim icrobia l drugs

可以看出該養(yǎng)殖場(chǎng)分離獲得的雞糞腸球菌對(duì)于青霉素、萬(wàn)古霉素、氨芐西林和替拉考寧敏感，耐藥率分別為4.1%、0%、4.1%和4.1%；對(duì)于呋喃妥因、利福平、氯霉素、慶大霉素耐藥處于中介，耐藥率分別為25.0%、58.0%、33.0%和37.5%；對(duì)于紅霉素、呋喃妥因、利福平和環(huán)丙沙星都有較高的耐藥性，耐藥率均達(dá)到100.0%。因此，該養(yǎng)殖場(chǎng)雞糞腸球菌耐藥嚴(yán)重。

4　討論

大多數(shù)腸球菌為多重耐藥菌株，由于其細(xì)胞壁厚對(duì)多種抗菌藥物呈現(xiàn)天然耐藥。如對(duì)頭孢菌素類、低濃度氨基糖苷類、克林霉素以及復(fù)合磺胺等體外即使敏感，臨床效果不佳[1、7]。從表2中可見(jiàn)，該養(yǎng)殖場(chǎng)雞糞腸球菌對(duì)于紅霉素、氯霉素、四環(huán)素這3種常用于治療革蘭氏陽(yáng)性菌感染的抗生素出現(xiàn)了100.0%耐藥，說(shuō)明養(yǎng)殖場(chǎng)該類藥物用藥壓力嚴(yán)重，因此，在養(yǎng)殖過(guò)程中應(yīng)緩解該類抗生素的使用，并提倡聯(lián)合用藥。值得注意的是用于針對(duì)耐藥性強(qiáng)的細(xì)菌感染和糞腸球菌感染的奎奴普丁也出現(xiàn)100.0%耐藥，而替拉考寧作為多肽類新型抗生素出現(xiàn)耐藥是重要的危險(xiǎn)信號(hào)，應(yīng)重點(diǎn)監(jiān)測(cè)萬(wàn)古霉素、替拉考寧以及氨基糖苷類藥物的耐藥變化趨勢(shì)，避免超級(jí)細(xì)菌的產(chǎn)生。同時(shí)，雖然呋喃妥因耐藥率也只有25%，但硝基呋喃類藥物屬于養(yǎng)殖業(yè)禁用藥物，因此，也反映了養(yǎng)殖環(huán)節(jié)藥物濫用情況嚴(yán)重。

由于近年來(lái)糞腸球菌作為益生菌添加劑使用現(xiàn)象越來(lái)越普遍，益生菌在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的大量應(yīng)用其危害尚無(wú)法證實(shí)，但確實(shí)是抗性引入的因素之一[8]。加之養(yǎng)殖環(huán)節(jié)抗生素的亂用現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致糞腸球菌耐藥性逐漸提高，給臨床治療帶來(lái)巨大阻力。因此，應(yīng)密切監(jiān)測(cè)糞腸球菌耐藥性動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，及時(shí)反饋耐藥信息，對(duì)于合理使用抗生素有重要的指導(dǎo)意義。

[1]姚杰,徐元宏,魏志華，等.糞腸球菌和屎腸球菌臨床分離株的耐藥性檢測(cè)及比較[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，2:266-268.

[2]姚杰，徐元宏.耐萬(wàn)古霉素腸球菌檢測(cè)的研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2009，13（10）：1274-1276.

[3]劉義剛，陶傳敏，陳文昭，等.某醫(yī)院臨床分離腸球菌藥敏分析[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2009，25（3）：209-212.

[4]馬俊春.臨床標(biāo)本中110株腸球菌的重新鑒定[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1992：15（1）：33.

[5]蔡亞娜，白華，齊靜，等.大型肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)中死淘雞病原菌分析[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)雜志，2012，1：213-215.

[6]RichardsM J,Edwards J R,CulverD H,et al.Nosocomial infections in combined medical-surgical intensive care units in the United States [J].InfectCont rolHospEpidemiol,2000,21 (8):510-512.

[7]楊希國(guó)，李欣南，李香珍，等.雞大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性研究[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2011,7:32-33.

（編輯：韓斌）

IIdentification and drug resistance of Enterococcus faecalis isolated from chicken in a farm

Su Weiyi,Li Xinnan*,Han Juanzhu
(Liaoning Province Qual ity and Safety Testing Center of Veterinary Medicine and Livestock Feed,Liaoning Shenyang110000)

In this paper,24 strains of Enterococcus faecalis were isolated f rom 100 cecum swabs of broi lers in a farm,Liaoning Provence and identif ied as Enterococcus faecal is through the ATB bacterial identi fication inst rument.Their drug sensitivity was tested against 14 antibiotics.The resul ts showed they were sensitive to Penici l l in,Vancomycin,ampici l l in and Teicoplanin,resistant against Toerythromycin,Chloramphenicol,Ciprof loxacin,tet racycl ine,levof loxacin and Dal fopristin,the resistance rate reached 100%.According to the resul ts,the bacteria f rom the broi lers in the farm were resistant to antimicrobial drugs seriously.

Enterococcus faecalis;Bacteriostasis;Minimum inhibitory concent ration

S852.61

：B

：1672-9692(2014)04-0048-03

2014-02-27

蘇崴藝（1987-），男，本科，從事細(xì)菌耐藥性分子生物學(xué)研究。

李欣南（1978-），女，博士，科長(zhǎng)，主要從事動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性；微生態(tài)制劑；生鮮乳質(zhì)量安全評(píng)價(jià)等工作。