喬朱一飛 李明新

·基礎(chǔ)研究·

不同色素兔光化學(xué)法誘導(dǎo)視網(wǎng)膜靜脈阻塞模型的對(duì)比

喬朱一飛 李明新

目的 觀察并比較光化學(xué)法誘導(dǎo)不同色素兔視網(wǎng)膜靜脈阻塞(RVO)模型的各自特點(diǎn)與差異。方法 普通級(jí)有色素兔和日本大耳白兔各10只。經(jīng)兔耳緣靜脈注入孟加拉紅(40 mg/kg)后，應(yīng)用倍頻532激光光凝兔雙眼視網(wǎng)膜靜脈主干，制作視網(wǎng)膜靜脈阻塞模型。所有實(shí)驗(yàn)兔分別于術(shù)前和光凝后15 min，1、3、7、14、21、28 d行眼底彩照和熒光素眼底血管造影(FFA)檢查，并于光凝后1 d，2組各選取2只模型兔處死，摘除眼球行病理組織切片檢查，觀察比較不同色素兔眼底的損傷是否存在差異；其余于光凝后28 d處死，摘除眼球行光學(xué)顯微鏡檢查。結(jié)果 2組實(shí)驗(yàn)兔光凝后均立刻出現(xiàn)視網(wǎng)膜血流阻斷現(xiàn)象。光凝后1 d，日本大耳白兔出現(xiàn)顯著的視網(wǎng)膜水腫和少量視網(wǎng)膜下出血，普通有色素兔則表現(xiàn)為視網(wǎng)膜下火焰狀出血和較為明顯的視網(wǎng)膜水腫。2組FFA均顯示視網(wǎng)膜兩側(cè)動(dòng)靜脈主干血流被阻斷。2組實(shí)驗(yàn)兔在1～3周時(shí)，光凝點(diǎn)部位血管均出現(xiàn)不同程度的再通，視網(wǎng)膜出血水腫逐漸吸收。4周時(shí)血管基本再通，F(xiàn)FA示普通有色素兔光凝部位血管周圍出現(xiàn)小范圍的無(wú)灌注區(qū)、色素紊亂以及血管形態(tài)的異常。病理切片顯示，光凝術(shù)后1 d，日本大耳白兔脈絡(luò)膜中可見(jiàn)血栓形成，而普通有色素兔則無(wú)此現(xiàn)象。2組實(shí)驗(yàn)兔均可觀察到外層視網(wǎng)膜水腫。光凝后28 d，2組實(shí)驗(yàn)兔均可觀察到視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核密度減少。結(jié)論 通過(guò)光化學(xué)誘導(dǎo)法，普通有色素兔及日本大耳白兔均可成功建立RVO模型。但不同色素兔使用相同激光能量制作RVO模型，眼底損傷部位存在差異。在眼底彩照和FFA檢查上，2組有顯著區(qū)別，且日本大耳白兔顯影較差。(中國(guó)眼耳鼻喉科雜志，2014，14：171-176)

光化學(xué)法； 視網(wǎng)膜靜脈阻塞； 色素

視網(wǎng)膜靜脈阻塞(retinal vein occlusion，RVO)是僅次于糖尿病視網(wǎng)膜病變的第二大致盲性眼底血管性疾病，常引起黃斑水腫、玻璃體出血、新生血管性青光眼及視網(wǎng)膜脫離等并發(fā)癥，對(duì)患者視功能的損害較為嚴(yán)重[1]。臨床上根據(jù)RVO部位主要分為中央靜脈阻塞(central RVO，CRVO)、分支靜脈阻塞(branch RVO，BRVO)，其中CRVO后果更為嚴(yán)重，許多患者的視力最終降到法定盲以下[2]。因此，建立具有良好可重復(fù)性，并能呈現(xiàn)與該病病理過(guò)程相類似的動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)行病因?qū)W、病理學(xué)和治療學(xué)方面的研究非常必要。

目前制作RVO模型主要是血管結(jié)扎法、透熱法、凝血酶靜脈滴注法、玻璃體腔內(nèi)注入內(nèi)皮素-1法、激光光凝封閉視網(wǎng)膜靜脈法、光化學(xué)法[3]。其中光化學(xué)法是將光敏藥物注入靜脈后，激光照射欲阻斷的視網(wǎng)膜血管，在光敏藥物與照射激光的共同作用下，通過(guò)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致血小板聚集形成血栓，與人RVO的靜脈血栓成分及形成機(jī)制相近似，操作簡(jiǎn)便且對(duì)動(dòng)物眼球損傷小，成為目前制作RVO模型的主要方法[4-6]。兔子由于價(jià)格低廉，眼球較大，視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈血管利于觀察，在RVO的研究中被大多數(shù)學(xué)者選為模型動(dòng)物。

在光化學(xué)法制作RVO模型的研究中，白兔和有色素兔都曾作為實(shí)驗(yàn)兔在文獻(xiàn)中報(bào)道[7-9]。而激光光凝對(duì)眼球的損傷與眼底色素的多少有關(guān)，受照組織色素含量越高，對(duì)光能的吸收越強(qiáng)，越易受到激光損傷。此光損傷的一般規(guī)律在光化學(xué)法制作RVO模型的過(guò)程中，對(duì)于不同色素兔會(huì)有哪些不同的影響，文獻(xiàn)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)采用光化學(xué)法，選取不同色素兔制作RVO模型，通過(guò)眼底彩照、熒光素眼底血管造影(fluorescence fundus angiography，F(xiàn)FA)、組織病理學(xué)檢查，比較不同色素兔光化學(xué)法誘導(dǎo)RVO模型的各自特點(diǎn)和差異，為以后的研究提供有用和可行的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年日本大耳白兔及普通有色素兔各10只，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，雌雄不拘，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(蘇)2010-0003，使用許可證號(hào)為SYXK(蘇)2010-0011。實(shí)驗(yàn)在徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)前均經(jīng)裂隙燈顯微鏡及眼底檢查，排除動(dòng)物雙眼屈光介質(zhì)或眼底異常。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及主要設(shè)備 孟加拉紅鈉鹽(上海金穗試劑公司進(jìn)口分裝)，戊巴比妥鈉(上海化學(xué)試劑公司)配成3%溶液，熒光素鈉注射液(Cardinal Health Manufacturing Services B.V.，美國(guó))；0.22 μm無(wú)菌濾過(guò)器(Millipore，美國(guó))，眼底照相及眼底熒光造影設(shè)備(EOS-1Ds Mark II，佳能，日本)，倍頻532激光(VISULAS532S，蔡司，德國(guó))，光學(xué)顯微鏡(906尼康DS-Ril正置熒光顯微鏡)。

1.2 建立模型 孟加拉紅鈉鹽用生理鹽水配制，質(zhì)量濃度為50 mg/mL，經(jīng)0.22 μm無(wú)菌濾過(guò)器過(guò)濾，現(xiàn)配現(xiàn)用。普通有色素兔及日本大耳白兔各10只，雙眼均設(shè)為實(shí)驗(yàn)眼。經(jīng)復(fù)方托吡卡胺滴眼液充分?jǐn)U瞳后, 3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉(1 mL/kg)，雙眼滴入鹽酸奧布卡因滴眼液表面麻醉，經(jīng)耳緣靜脈一次性注射盂加拉紅40 mg/kg，數(shù)秒后放置角膜接觸三面鏡。光凝點(diǎn)選在靜脈主干離視盤(pán)0.5～1 DD處，避開(kāi)伴行動(dòng)脈。選定激光照射的光凝點(diǎn)，光斑大小為100 μm，曝光0.5 s，激光能量150 mW。光凝雙側(cè)視網(wǎng)膜靜脈主干40點(diǎn)后，為防止血管的快速再通，300 mW再光凝40點(diǎn)。光凝后15 min，行FFA及眼底拍照，確認(rèn)靜脈阻塞形成。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 眼底彩照及FFA 2組實(shí)驗(yàn)兔均于造模后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d行眼底照相及FFA檢查。復(fù)方托吡卡胺滴眼液擴(kuò)瞳，行眼底彩照，觀察眼底的變化情況；并在耳緣靜脈注射熒光素鈉(0.1 mL/kg)行FFA檢查，觀察眼底R(shí)VO情況。其中普通有色素兔每只眼至少拍攝5張圖像，包括：視盤(pán)、顳側(cè)分支、鼻側(cè)分支、視盤(pán)上方的視網(wǎng)膜、視盤(pán)下方的視網(wǎng)膜。日本大耳白兔組顯影效果不佳，只拍攝視盤(pán)附近視網(wǎng)膜。

1.3.2 組織病理學(xué)檢查 激光光凝后1 d，經(jīng)眼底彩照及FFA確認(rèn)造模成功后，每組隨機(jī)取2只兔子，用空氣栓塞法處死；立即摘出眼球，放入10%多聚甲醛固定液中固定1周；作平行于眼球矢狀面的厚度為 4 μm的連續(xù)切片，蘇木精-伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。剩余實(shí)驗(yàn)兔做后續(xù)觀察，并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用同樣方法處、死摘除眼球，行病理學(xué)切片檢查。

2 結(jié)果

2.1 眼底彩照及FFA 所有兔子在接受光凝后，都立即出現(xiàn)靜脈血流停滯或者是靜脈管壁痙攣閉塞，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)兔動(dòng)脈在光凝靜脈的同時(shí)也會(huì)出現(xiàn)痙攣?zhàn)兗?xì)或者血流停滯現(xiàn)象。光凝后15 min，光凝處視網(wǎng)膜靜脈閉塞，遠(yuǎn)端視網(wǎng)膜靜脈迂曲，伴行視網(wǎng)膜動(dòng)脈同時(shí)出現(xiàn)血流中斷及血管痙攣，有髓神經(jīng)纖維表面的視網(wǎng)膜水腫，呈現(xiàn)強(qiáng)熒光。

2.1.1 日本大耳白兔組 光凝后15 min，光凝點(diǎn)附近的視網(wǎng)膜水腫、變白，阻塞位點(diǎn)呈相對(duì)血管的強(qiáng)熒光。光凝術(shù)后1 d，白兔眼底出現(xiàn)顯著的視網(wǎng)膜水腫、少量視網(wǎng)膜出血，視網(wǎng)膜兩側(cè)動(dòng)、靜脈主干血流均阻斷，阻塞點(diǎn)遠(yuǎn)端靜脈淤血、擴(kuò)張迂曲。光凝后7 d，出血逐漸吸收。14 d后，阻塞血管出現(xiàn)不同程度的再通。值得注意的是, 在眼底彩照中，白兔眼底視盤(pán)界限模糊，顏色較暗；攝取眼底造影圖像更為困難，無(wú)法將各個(gè)象限都拍攝下來(lái)。所能得到的熒光圖像，在脈絡(luò)膜強(qiáng)背景熒光襯托下，視網(wǎng)膜血管顯影較暗，視盤(pán)始終呈現(xiàn)為暗區(qū)(圖1)。

此外，1只模型眼光凝術(shù)后1 d出現(xiàn)周邊脈絡(luò)膜脫離現(xiàn)象(圖2)。另有2眼在3 d后血管出現(xiàn)再通的現(xiàn)象。

圖1. 白兔眼底彩照和FFA的表現(xiàn) A、B依次是光凝后15 min眼底彩照、FFA；C、D分別是光凝后1 d眼底彩照、FFA(箭頭所示為阻塞位點(diǎn))?？梢钥吹桨淄玫淖枞稽c(diǎn)成相對(duì)的強(qiáng)熒光，而血流存在的地方呈相對(duì)的弱熒光

圖2. 光凝術(shù)后1 d日本大耳白兔組周邊脈絡(luò)膜脫離1例 A、B分別為眼底彩照、FFA；脈絡(luò)膜脫離邊界(箭頭所示)

2.1.2 普通有色素兔組 光凝后15 min，所有兔眼均出現(xiàn)視網(wǎng)膜靜脈閉塞，遠(yuǎn)端視網(wǎng)膜靜脈迂曲，伴行視網(wǎng)膜動(dòng)脈血流停滯或血管痙攣，其中2眼視網(wǎng)膜血管破裂，并引起輕度玻璃體出血，出血于數(shù)秒后停止。光凝后1 d，7眼出現(xiàn)沿視盤(pán)兩側(cè)翼狀有髓神經(jīng)纖維的火焰狀出血，視網(wǎng)膜動(dòng)脈管徑顯著縮小，靜脈管徑變粗，形態(tài)迂曲，光凝點(diǎn)附近視網(wǎng)膜水腫。FFA顯示視網(wǎng)膜下出血遮蔽熒光，動(dòng)、靜脈均無(wú)血流(圖3)。5眼視網(wǎng)膜點(diǎn)片狀出血，2眼僅有半側(cè)靜脈出現(xiàn)典型出血。光凝后3 d，大部分眼視網(wǎng)膜出血部分吸收，1眼玻璃體內(nèi)殘留少量積血。光凝后第7天，視網(wǎng)膜淺層出血仍有少量殘留，玻璃體出血吸收，視網(wǎng)膜水腫漸消退。光凝后7～21 d，視網(wǎng)膜淺層出血吸收，雙側(cè)有髓神經(jīng)纖維視網(wǎng)膜色淡；視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈血管管徑變細(xì)，視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈均顯示部分再通，但再通范圍不同，形態(tài)變平直，伴隨側(cè)支血管形成。光凝后28 d，在再通的靜脈中，有80%的血管充盈延遲；并在阻塞位點(diǎn)，觀察到主要靜脈周圍的無(wú)灌注區(qū)。部分光凝處可見(jiàn)視網(wǎng)膜色素紊亂。

2.2 眼底組織病理學(xué)觀察 2組光凝后1 d均出現(xiàn)不同程度的視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層水腫，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞腫脹；光凝后28 d，2組視網(wǎng)膜層次清晰，但均出現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核密度減少。并可觀察到日本大耳白兔組視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinal pigment epithelium，RPE)層缺乏色素顆粒，普通有色素組RPE層有較多色素顆粒(圖4)。光凝后1 d，脈絡(luò)膜血管切片可見(jiàn)白兔組脈絡(luò)膜血管管腔被血栓填充，其主要成分為血小板、纖維蛋白、紅細(xì)胞及少量炎性細(xì)胞，血管壁無(wú)明顯損傷。有色素兔脈絡(luò)膜血管切片未見(jiàn)血栓(圖5)。

圖3. 有色素組光凝后的典型視網(wǎng)膜表現(xiàn) A為正常眼底；B為光凝后1 d，可見(jiàn)有髓神經(jīng)纖維表面的視網(wǎng)膜火焰狀出血，遮蔽熒光；C為光凝后7 d，出血逐漸吸收，血管開(kāi)始再通；D為光凝后7～21 d，再通范圍擴(kuò)大；E為光凝后28 d，血管基本再通，再通血管較前變細(xì)，形態(tài)上發(fā)生變化，阻塞血管周圍出現(xiàn)小范圍的無(wú)灌注區(qū)

圖4. 光凝后2組實(shí)驗(yàn)兔視網(wǎng)膜組織病理學(xué)檢查(蘇木精-伊紅染色×400) A為白兔組光凝后第1天，RPE層(短箭頭所示)缺乏色素顆粒，視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層水腫，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞腫脹(長(zhǎng)箭頭所示)；B為有色素組光凝后第1天，RPE層(短箭頭所示)可見(jiàn)明顯的色素顆粒，也可觀察到神經(jīng)節(jié)細(xì)胞腫脹(長(zhǎng)箭頭所示)；C為白兔組光凝后第28天，視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核密度減少；D為有色素兔組光凝后第28天，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核密度減少。視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(ganglion cell layer，GCL)；內(nèi)叢狀層(inner plexiform layer，IPL)；內(nèi)核層(inner nuclear layer,INL)；外叢狀層(outer plexiform layer，OPL)；外核層(outer nuclear layer，ONL)；外節(jié)狀層(outer segment，OS)；視網(wǎng)膜色素細(xì)胞層(Retinal pigment epithelium，RPE)

圖5. 光凝后1 d 2組實(shí)驗(yàn)兔脈絡(luò)膜血管切片(蘇木精-伊紅染色×400) A為白兔組光凝后第1天，脈絡(luò)膜血管內(nèi)見(jiàn)新鮮血栓(箭頭所示)，主要成分為紅細(xì)胞、炎性細(xì)胞、血小板、纖維蛋白；B為有色素兔組光凝后第1天，脈絡(luò)膜血管(箭頭所示)未見(jiàn)血栓

3 討論

光化學(xué)法制作的RVO模型與人類RVO的發(fā)病機(jī)制相似。最常用的是將孟加拉紅(最大吸收波峰在550 nm處)作為光敏物質(zhì)，激光照射欲阻斷的視網(wǎng)膜血管，激發(fā)血液中的氧轉(zhuǎn)變?yōu)檠踝杂苫?，啟?dòng)內(nèi)外凝血途徑，形成視網(wǎng)膜血管內(nèi)血栓。李聞思等[10]在2009年的一項(xiàng)關(guān)于兔眼底對(duì)光動(dòng)力治療反應(yīng)研究中發(fā)現(xiàn)，色素的多少造成了眼底光化學(xué)反應(yīng)部位的不同和程度差異。這種差異是否會(huì)在光化學(xué)法制作兔RVO模型中同樣存在，又會(huì)對(duì)RVO病程有怎樣的影響，成為我們?cè)O(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)的初衷。本實(shí)驗(yàn)采用相同造模條件制作不同色素兔RVO模型，通過(guò)眼底彩照、FFA、組織病理學(xué)檢查，比較不同色素兔光化學(xué)法誘導(dǎo)RVO模型的各自特點(diǎn)和差異。

通過(guò)對(duì)2組不同色素兔的觀察，發(fā)現(xiàn)其各自特點(diǎn)和差異主要表現(xiàn)為：①白兔與有色素兔均可利用光化學(xué)法成功制作RVO模型。有色素兔中，疾病可以觀察到3個(gè)階段：第1階段，術(shù)后即刻出現(xiàn)視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈血流停滯,術(shù)后24 h視網(wǎng)膜靜脈完全阻塞，出血現(xiàn)象達(dá)到高峰；第2階段，約于術(shù)后1～2周，視網(wǎng)膜出血、水腫逐漸吸收，血管再通，并且這種再通是從靜脈主干向周邊進(jìn)行的，伴隨側(cè)支循環(huán)的形成；第3階段，術(shù)后3～4周，血管基本再通，但血管管腔變細(xì)，走行與正常血管不同，并在血管周圍存在小范圍的無(wú)灌注區(qū)及色素紊亂。這點(diǎn)與以往的研究[6,11]結(jié)果一致。而白兔組，由于眼底不易觀察，只能大致將其分為阻塞期、再通期，眼底分期無(wú)法像色素兔一樣界定明顯。②早期白兔視網(wǎng)膜水腫似乎比有色素兔更強(qiáng)，而出血卻較有色素兔少。兔眼視網(wǎng)膜靜脈接受光凝后產(chǎn)生視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈阻塞，此前已有報(bào)道[6,11]；而我們通過(guò)病理切片證實(shí)，白兔脈絡(luò)膜中亦有血栓形成(圖5)，有色素兔則未觀察到此現(xiàn)象。這一點(diǎn)說(shuō)明白兔眼底由于無(wú)色素組織的遮擋作用，脈絡(luò)膜血管可直接吸收外界激光能量產(chǎn)生光化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致脈絡(luò)膜血管阻塞；而有色素兔眼底由于色素組織的遮擋作用，可掩蓋脈絡(luò)膜組織的損傷。Iliaki等[7]將第二代光敏劑氯化鋁磺酸肽菁注入無(wú)色素兔耳緣靜脈，以二極管作為光源照射眼視網(wǎng)膜大血管的實(shí)驗(yàn)中，脈絡(luò)膜阻塞長(zhǎng)達(dá)7個(gè)月之久。而我們觀察到1例白兔眼底脈絡(luò)膜的脫離，這是否與其脈絡(luò)膜的損傷較重關(guān)系密切，由于樣本量小，我們尚不能給出確切的解釋。此外2組視網(wǎng)膜病理切片都顯示外層視網(wǎng)膜水腫(圖4)，與以往研究[12-14]一致。③眼底彩照及FFA表現(xiàn)，二者截然不同。日本大耳白兔組眼底視盤(pán)境界顯示不清，可同時(shí)透見(jiàn)視網(wǎng)膜血管及脈絡(luò)膜血管網(wǎng)；FFA顯像效果較差，視網(wǎng)膜血管顯影較暗，視盤(pán)始終呈現(xiàn)為暗區(qū)，但血管阻斷位點(diǎn)大致可辨，呈現(xiàn)相對(duì)強(qiáng)熒光。普通有色素兔組則表現(xiàn)為阻塞位點(diǎn)遠(yuǎn)端靜脈擴(kuò)大迂曲，沿大血管干的出血，遮蔽熒光，或者阻塞位點(diǎn)無(wú)熒光。這是由于白兔眼底缺乏色素，在強(qiáng)烈的脈絡(luò)膜背景熒光的襯托下，視網(wǎng)膜血管的熒光反而顯得相對(duì)較暗，我們發(fā)現(xiàn)，這點(diǎn)與人類白化病患者的眼底情況[15]相似。

兔眼的兩側(cè)視網(wǎng)膜靜脈主干并不匯聚成一條中央靜脈，而是兩側(cè)分別向下走行，動(dòng)、靜脈之間又存在廣泛的動(dòng)、靜脈交通，并且在視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜之間，存在一些毛細(xì)血管，這些都與人類不同[16]。這些解剖學(xué)差異使我們無(wú)法創(chuàng)造出與人類完全一致的CRVO模型。在光化學(xué)法制作兔RVO模型中，主要的造模原理是反應(yīng)中產(chǎn)生的活性氧，特別是單態(tài)氧和自由基破壞血管內(nèi)皮以及繼發(fā)的血流淤滯和血管阻塞。視網(wǎng)膜色素含量并不是影響造模的關(guān)鍵因素。但比較國(guó)內(nèi)外光化學(xué)法造模研究結(jié)果和本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同色素含量的視網(wǎng)膜在接受光化學(xué)法造模后，實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在一定程度的差異。盡管目前使用白兔造模是可行的，但由于其同時(shí)存在較為明顯的脈絡(luò)膜血管阻塞情況，且在眼底觀察和眼底血管造影方面，有色素兔顯示出顯著的優(yōu)越性，故我們認(rèn)為在此模型中選用有色素兔將有利于對(duì)病程的掌握和觀察。

[ 1 ] Laouri M, Chen E, Looman M, et al.The burden of disease of retinal vein occlusion: review of the literature[J].Eye (Lond), 2011, 25(8):981-988.

[ 2 ] Rogers S, McIntosh RL, Cheung N,et al.The prevalence of retinal vein occlusion: pooled data from population studies from the United States,Europe,Asia,and Australia[J].Ophthalmology, 2010, 117(2):313-319.

[ 3 ] 袁子茗.視網(wǎng)膜靜脈阻塞動(dòng)物模型制作的研究進(jìn)展[J].中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志，2012，30(11):1044-1047.

[ 4 ] Chuang LH, Wu WC, Yeung L, et al. Serum concentration of bevacizumab after intravitreal injection in experimental branch retinal vein occlusion[J].Ophthalmic Res,2011,45(1):31-35.

[ 5 ] Rehak M, Hollborn M, Iandiev I,et al.Retinal gene expression and Muller cell responses after branch retinal vein occlusion in the rat[J].Invest Ophthalmol Vis Sci, 2009, 50(5):2359-2367.

[ 6 ] 王帥，宋蓓雯，吳強(qiáng)，等.倍頻激光激發(fā)孟加拉紅建立色素兔視網(wǎng)膜靜脈阻塞模型[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011，31(8):1082-1085.

[ 7 ] Iliaki OE, Naoumidi II, Tsilimbaris MK,et al.Photothrombosis of retinal and choroidal vessels in rabbit eyes using chloroaluminum sulfonated phthalocyanine and a diode laser[J].Lasers Surg Med, 1996, 19(3):311-323.

[ 8 ] 翁歡，李秋華，張瑞帆，等.光化學(xué)法誘導(dǎo)兔視網(wǎng)膜靜脈阻塞的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)眼耳鼻喉科雜志，2009，9(3):142-144.

[ 9 ] 高小明，陳輝，高小偉，等.光動(dòng)力血栓法制作實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜分支靜脈阻塞模型[J].眼科研究，2005，23(5):488-490.

[10] 李聞思，張風(fēng)，周海英，等.不同色素兔眼底對(duì)光動(dòng)力治療反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志，2009，18(1):23-28,65-67.

[11] Ameri H, Ratanapakorn T, Rao NA,et al.Natural course of experimental retinal vein occlusion in rabbit; arterial occlusion following venous photothrombosis[J].Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol, 2008, 246(10):1429-1439.

[12] Wood JP,Shibeeb O,Plunkett M,et al.Retinal damage profiles and neuronal effects of laser treatment: comparison of a conventional photocoagulator and a novel 3-nanosecond pulse laser[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2013,54(3):2305-2318.

[13] McMullen WW, Garcia CA.Comparison of retinal photocoagulation using pulsed frequency-doubled neodymium-YAG and argon green laser[J].Retina, 1992, 12(3):265-269.

[14] Lavinsky D, Cardillo JA, Mandel Y, et al. Restoration of retinal morphology and residual scarring after photocoagulation[J].Acta Ophthalmol,2013,91(4):e315-323.

[15] Moshiri A, Scholl HP, Canto-Soler MV, et al. Morphogenetic model for radial streaking in the fundus of the carrier state of X-linked albinism[J].JAMA Ophthalmol, 2013, 131(5):691-693.

[16] Sugiyama K, Bacon DR, Morrison JC,et al.Optic nerve head microvasculature of the rabbit eye[J].Invest Ophthalmol Vis Sci, 1992, 33(7):2251-2261.

(本文編輯 諸靜英)

Comparison of experimentally induced retinal vein occlusion between pigmented rabbits and conventional albino rabbits

QIAO-ZHUYi-fei，LIMing-xin.

DepartmentofOphthalmology，theAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege，Xuzhou221000，China

LI Ming-xin, Email：lmx216@vip.sina.com

Objective To compare the differences of experimentally induced retinal vein occlusion (RVO) between pigmented rabbits(PR)and conventional albino rabbits(CAR).Methods PR (n=10) and CAR (n=10) were included in the study. RVO was created by using an double-frequency laser(532 nm) following intravenous injection of Rose Bengal. A laser was applied to all major veins at the optic disc margin to mimic central RVO. Fundus photograph and fluorescence fundus angiography (FFA) were performed before photocoagulation and 15 min, 1 d, 3 d, 7 d, 14 d and 28 d after photocoagulation.Two rabbits was sacrificed in each group 1 d after photocoagulation for light microscopy observation, and the rest were killed 28 d after photocoagulation for light microscopy observation.Results Immediately following laser application, blood flow ceased or extremely slowed in the retinal veins in all cases. At 1 day after photocoagulation, CAR showed significant retinal edema and mild hemorrhages，while PR showed flame-shaped retinal hemorrhages; On FFA, no retinal blood flow was observed in most eyes (neither arteries nor veins) for both groups. Between week 1 and 3, reopening of laser sites and partial or complete revascularization of both retinal arteries and veins occurred; and most cases showed a progressive appearance of less hemorrhages and intraretinal edema. On week 4, there were small range capillary nonperfusion and pigmentary changes around the blood vessels which received photocoagulation before, however, the vascular pattern was abnormal. Histopathological examinations indicated that thrombus formed in choroidal vessels in CAR 1 d after photocoagulation, but PR didn′t show the same phenomenon. There was outer retinal edema 1 d after photocoagulation and retinal ganglion cell nucleus density decreased 28 d after photocoagulation in both groups.Conclusions RVO models were successfully established in both groups. Rose Bengal photochemical method on ocular fundus of different pigmented rabbits have different photosensitive reaction and histological damages. On Fundus photograph and FFA, the imaging of CAR is significant different from that of PR. (Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2014,14:172-176)

Photochemistry； Retinal vein occlusion； Pigment

徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院眼科 徐州 221000

李明新(Email:lmx216@vip.sina.com)

2014-02-17)